NFATC2基因变异在某区儿童急淋白血病中的分布调查

韩怡波 刘 伶* 孙 智 张世恒 杨月明 慕万颖 曲 畅 李 婷

（大连市妇女儿童医疗中心，辽宁 大连 116034）

近年儿童急性淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）的诊断治疗取得显著进步，发达国家对儿童ALL的总治愈率接近85%[1-2]。目前ALL复发的治疗仍是难点，即使通过高强度联合化疗及异基因造血干细胞移植治疗，也仅30%～50%的复发ALL患者可获长期缓解[3-4]，提示此SNP可能与ALL复发相关，基于此项研究，我们对该SNP在我院治疗ALL患儿中的分布作了调查。

1 资料与方法

1.1 一般资料：2014年11月至2017年11月在我院明确诊断的初诊有治疗意向ALL患儿，共30例。患儿年龄最小1.0岁，最大13.2岁，中位年龄6.5岁。其中男性20位，女性10位。ALL类型B系ALL 28位，T系ALL 2位。其中1位男性T系患儿髓外ALL复发。白血病危险度分型依据《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗建议（第四次修订）》，高危9例，中低危21例。本研究经伦理委员会批准，所有入组患儿家属均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 诊断方法：所有患儿均根据骨髓细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、特殊融合基因检测诊断为ALL。

1.2.2 样本SNP采集及检测：取非抗凝静脉血，由我院生殖遗传实验室采集样本DNA，送由大连宝生物科技有限公司通过PCR扩增直接测序法检测NFATC2 rs6021191核苷酸序列。

1.2.3 门冬酰胺酶使用及过敏反应观察方法：我院使用两种门冬酰胺酶制剂化疗，大肠杆菌源左旋门冬酰胺酶（L-ASP）（诱导缓解用法：6000 U/m2，隔日1次，共10次；继续治疗中2次再诱导治疗用法：6000 U/m2，隔日1次，10次）；聚乙二醇化门冬酰胺酶（Peg-ASP）（诱导缓解用法：2000 U/m2，第6及26天各用1次；继续治疗： 2000 U/m2/3周×6次）。患儿对门冬酰胺酶过敏反应由临床观察，任何一种门冬酰胺酶过敏反应，包括皮疹、骚痒、皮试阳性等均记为有过敏反应，不包括肝功能损害、胰腺炎、高血糖、神经系统异常等门冬酰胺酶其他不良反应。

1.3 统计学处理：应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，相关因素分析采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NFATC2 rs6021191检测结果：30例样本，rs6021191位点AA 20例（66.67%），AT 9例（30%），TT 1例（3.33%）。

2.2 门冬酰胺酶过敏反应：30例患者共观察到4例过敏反应，1例使用PEG-ASP后皮疹，1例使用L-ASP后发生皮疹，2例L-ASP皮试阳性。s6021191变异与门冬酰胺酶过敏反应发生比较，P=0.107＞0.05，未提示统计学相关性。在本次调查中此SNP与门冬酰胺酶过敏反应未表现显相关性，有趣的是我院的门冬酰胺酶制剂过敏反应临床报告率远未达到文献中的30%左右，一方面是由于过敏反应的观察有相当的主观性，另一方面我院主要使用Peg-ASP，治疗方案中使用次数减少也有可能减少临床过敏反应发生概率。

表1 rs6021191与门冬酰胺酶过敏反应的比较

2.3 ALL复发：本次调查中，仅有1位T系ALL患者发生髓外复发，rs6021191变异与ALL复发比较，P=0.772＞0.05，无统计学相关性。由于复发样本过少仅作参考。

表2 rs6021191与ALL复发比较

2.4 ALL危险度分层：rs6021191变异与白血病危险度比较，无明显统计学意义。虽然此SNP的变异（T及A/T）总发生率与按此次调查中判定为高危患者比率恰巧相似，但二者无统计学联系，也无临床意义。

表3 rs6021191与高危ALL比较

3 讨 论

ALL复发是目前儿童ALL治疗中的重点难点，在临床工作中，我们发现有部分复发ALL患儿来自中、低危组，其原因可能是目前已确定的预后不良因素未对初诊ALL患儿进行精准的危险度分级，致使部分高危患儿纳入低危组或中危组，导致复发率升高，因此发现新的ALL复发相关因素就有重要的意义。目前有研究认为ALL复发的主要机制包括肿瘤细胞对化疗药物的耐药现象等，在Kawedia、Fernandez等人的一系列研究中发现门冬酰胺酶抗体与地塞米松暴露及白血病复发有相关性，并进一步筛选出rs17885382（HLA-DRB1）及rs6021191（NFATC2）两组单基因可能与此相关，并在以人种分组的研究中发现前者与欧洲裔相关性较高，后者与亚裔相关性较明显。

NFATC2是NFAT转录子家族中的一员。NFATC2在药物致过敏风险性中的作用并不明确。NFATC2 rs6021191变异定位于基因内含子并且是HUVEC（人血管内皮细胞）和K562细胞系弱增强子激活区域，提示此SNP可以影响NFATC2的表达。当前NFATC2 rs6021191作为ALL复发相关因素的研究尚不完善，国内外关于此SNP与ALL间关系的文献并不多，这种SNP与ALL相关性的研究必然需要多中心、大样本调查才有价值，我们此次试验仅就此SNP在我院ALL患儿中的分布作初步调查，也是为我们进一步研究此类基因的临床意义所做的前期工作。