三叶苷质量标准初步研究*

2019-09-16郑斌婕王李婷张凤娥

中国药业 2019年18期

郑斌婕，王李婷，熊佩，张凤娥，蔡伟 △

（1.湖南医药学院药学院，湖南怀化 418000； 2.湖南医药学院·侗医药研究湖南省重点实验室，湖南怀化 418000）

木姜叶柯Lithocarpuslitseifolius（Hance）Chun 为壳斗科柯属常绿植物，多分布在长江以南的低山密丛中[1]，药食兼用，可做茶、糖、药[2]。其有清热利尿、滋肝养胃、化痰、祛风、降压等功效，可用于治疗湿热痢疾、皮肤瘙痒、肺热咳嗽、高血压等症[3]。近代医学研究证明，木姜叶柯具有抗氧化[4]、免疫抑制[5]、降血糖[6]等药理作用。三叶苷是其主要活性成分之一，具有抗糖尿病[7]、抗人类免疫缺陷病毒（HIV）-1感染[8]、抗炎[9-10]等作用。文献[11]报道的三叶苷单体分离步骤烦琐，耗时较长。为高效提取、纯化三叶苷并对其进行质量控制，本试验中采用热水回流提取，乙醇热饱和结晶得成品，并结合波谱及薄层色谱对其进行鉴定。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪，包括G1311B四元泵、4212BDAD型二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；AUW120D型电子分析天平（日本Shimadzu公司）；Mighty-10型超纯水机（上海砾鼎水处理设备有限公司）；BZF-50型真空干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；薄层色谱（青岛海洋化工厂）。

1.2 试药

三叶苷对照品（四川省维克奇生物科技有限公司，批号为WKQ18052505，含量＞98.0%）；所用试剂均为分析纯，水为超纯水。木姜叶柯药材购自湖南省溆浦县君健中药材专业合作社，经湖南医药学院蔡伟副教授鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 提取、分离与结晶

取木姜叶柯药材0.1 kg，用粉碎机稍加粉碎，过2号筛，置2 000 mL圆底烧瓶中，以10倍量水在80℃条件下提取3次，每次1 h，得残渣和滤液，合并滤液，于冰箱冷藏静置12 h，滤过，得黄色沉淀物，减压干燥（55℃）24 h，得三叶苷粗品。在无水乙醇溶液中缓慢加入三叶苷粗品，边加热边溶解，待三叶苷饱和溶解后，冷却溶解液得结晶，重复3次，干燥，得三叶苷纯品。

2.2 水分测定

按2015年版《中国药典（四部）》通则0832项下水分测定法第二法（烘干法）测定三叶苷纯品中的水分。取三叶苷纯品约2 g，置干燥至恒重的称量瓶中，精密称定，打开锥形瓶瓶塞，置105℃干燥箱中干燥5 h，移出，并迅速盖上瓶盖，置干燥器中冷却30 min，精密称定，继续干燥1 h，迅速取出，冷却后称定质量，连续2次干燥后的质量差小于5 mg时停止干燥，根据损失的质量，计算三叶苷纯品中水分含量，重复3次。结果三叶苷纯品水分含量为（3.550 ±0.163）%。

2.3 结构鉴定

白色针状结晶。1H-NMR （500 MHz，DMSO）δ：7.03（2H，d，J=8.0 Hz，H-2，H-6），6.66（2H，d，J=8.0 Hz，H-3，H-5 ），6.04（2H，S），4.88（1H，d，J=7.71 Hz），5.36（1H，d，J=5.82 Hz），5.13（1H，d，J=5.42 Hz），2.78（2H，t，J=7.66 Hz，H- β）。13C-NMR δ：131.49（C-1），129.20（C-2，C-6），155.42（C-4 ），115.09（C-3，C-5），45.77（C-α），29.32（C-β），205.07（C=O），105.23（C-1′），163.39（C-2′，C-6′），95.07 （C-3′，C-5′），163.74（C-4′），99.52（C-1″），73.05（C-2″），76.41（C-3″），69.41（C-4″），77.14（C-5″），60.48（C-6″）。以上数据与文献[12]报道结果基本一致，故鉴定化合物为三叶苷。

2.4 薄层鉴别

取三叶苷对照品和三叶苷纯品各适量，分别加甲醇溶解制成对照品溶液和供试品溶液。按2015年版《中国药典（四部）》TLC法试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以石油醚-正丁醇（1 ∶8，V/V）、乙酸乙酯 -正丁醇（2 ∶1，V/V）、乙酸乙酯 -丙酮（3 ∶2，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置日光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，详见图1。