鸡内金对功能性消化不良模型大鼠胃肠功能改善作用

沈 明 ，黄小强 ，阮美江

（1.福建中医药大学附属第二人民医院，福建 福州 350003；2.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；3.福建中医药大学附属第二人民医院东二环分院，福建 福州 350011）

功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）是以胃肠功能障碍为特征的严重疾病［1-2］，其主要特点是有腹痛、腹胀、食欲不振、早饱、呕吐以及恶心等不适症状，在临床上表现为胃排空和肠推进减慢，部分表现为胃液排空延迟［3］，但缺乏器质性病变［4］，其发病机制目前尚未阐明。鸡内金性甘、平，归脾、胃、小肠、膀胱经，具有健胃消食功效［5］。研究报道鸡内金具有增加小肠推进率的作用［6］。故本研究采用功能性消化不良模型大鼠，探讨鸡内金对功能性消化不良大鼠模型大鼠胃肠功能的改善作用。

1 材 料

1.1 仪器 多功能酶标仪（奥地利Infinite公司）；高速台式冷冻离心机（美国赛默飞世尔科技有限公司）；垂直电泳槽、多功能成像系统（美国Bio-Rad公司）

1.2 药品与试剂 鸡内金［同仁堂（亳州）饮片有限责任公司，批号：001006133］；多潘立酮（西安杨森制药有限公司，批号：180345630）；水合氯醛（上海源叶生物科技有限公司，批号：Z03D6Y7011）；胃动素（MOT）和胃泌素（GAS）酶联免疫吸附（ELISA）测定试剂盒（上海西塘生物科技有限公司，批号：1804081、1809071）；一抗水通道蛋白 4（AQP4）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、β-肌动蛋白（β-actin）、二抗羊抗鼠和羊抗兔（美国CST公司，批号分别为：59678、5880、3700、14709、14708）；RIPA 裂解液、PMSF蛋白酶抑制剂、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、BCA蛋白浓度定量试剂盒和ECL发光剂（上海碧云天生物科技有限公司，批号分别为：P0013B、ST506、P0690、P0012、P0018FS）。

1.3 动物 60只SPF级SD大鼠，雌雄各半，体质量180～200 g，购自上海史莱克实验动物中心，生产使用合格证：SCXK（沪）2018-0006，饲养于福建中医药大学动物实验中心SPF级动物房，温度21～23℃，相对湿度55%～75%，12 h昼夜循环，适应性饲养7 d后用于实验。

2 方 法

2.1 药物制备

2.1.1 鸡内金水提物的制备 取鸡内金药材100 g，放置圆底烧瓶中，然后加入8倍量蒸馏水，浸泡30 min后，武火煮沸后转文火煎煮20 min，抽滤；滤渣再加6倍量蒸馏水，武火煮沸后转文火煎煮20 min，抽滤；合并2次滤液，60℃下减压浓缩至0.4 g／mL适量，备用。

2.1.2 多潘立酮溶液的制备 将多潘立酮研成细粉末，溶于水中，制备成质量浓度0.000 4 g／mL的溶液，备用。

2.2 分组、造模与给药 将60只大鼠适应性饲养1周后，随机分为正常组，模型组，多潘立酮组［0.004／（kg·d）］，鸡内金低、中、高剂量组［生药材1、2、4／（kg·d）］，每组 10 只。 正常组大鼠灌胃给予常温生理盐水，其余各组大鼠给予0℃ 0.5 mol／L稀盐酸（剂量1 mL／100 g体质量）诱导功能性消化不良模型［7］。 连续造模 14 d 后，按照 1 mL／100 g 体质量灌胃给药，正常组、模型组大鼠给予常温生理盐水，其余各组大鼠给予相应浓度药物，每天灌胃给药1次。连续给药7 d后采用10%水合氯醛（0.35 mL／100 g体质量）麻醉腹主动脉取血后处死，检查各组大鼠胃排空和肠推进功能，并取胃组织液氮速冻后，保存于－80℃低温冰箱，备用。

2.3 大鼠胃排空和小肠推进功能测定 大鼠禁食不禁水12 h后，给予半流质饲料和碳粉混合物，2 g／只，第 30 min给予水合氯醛 0.3 mL／100 g腹腔注射麻醉，大鼠腹主动脉取血处死；然后取胃组织在洗净前后分别称定质量，并计算胃内残渣量（胃内残渣量＝胃总质量-胃净质量），以评价大鼠胃排空功能；取小肠平铺，测量半流体饲料和碳粉混合物从胃幽门括约肌推动到回盲肠的距离，并计算小肠推进率（小肠推进率＝幽门至碳末前沿的长度／幽门至盲肠长度×100%）。

2.4 大鼠血清中GAS和MOT测定 取血后离心3 000 r／min，10 min，取上清，按照试剂盒说明书步骤，用ELISA法测定大鼠血清中GAS和MOT含量。

2.5 大鼠胃组织中AQP4和eNOS蛋白表达检测取胃组织，采用液氮研磨法，以1∶10比例（0.1 g组织∶1 mL 裂解液），12 000 r／min 离心 10 min， 取上清液，用BCA试剂盒进行蛋白定量，制备样品；采用SDS-PAGE凝胶制备试剂盒制备10%分离胶和5%浓缩胶，上样，电泳，PVDF转膜，5%脱脂奶粉封闭2 h后加一抗，其中内参 1∶5 000，其他抗体 1∶1 000，过夜，TBST 冲洗 3 次，加入二抗 1∶5 000，TBST冲洗3次，ECL发光液显影。

2.6 统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行分析处理。计量资料符合正态分布的以（）表示，采用单因素方差分析检验。

3 结 果

3.1 6组大鼠胃排空功能的影响 见表1。

表1 6组大鼠胃排空功能的影响（）

表1 6组大鼠胃排空功能的影响（）

注：与正常组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.01，3） P＜0.05。

组别正常组模型组多潘立酮组鸡内金低剂量组鸡内金中剂量组鸡内金高剂量组n 10 10 10 10 10 10胃内残渣量／g 0.83±0.15 1.70±0.121）1.27±0.142）1.67±0.11 1.56±0.13 1.47±0.143）

3.2 6组大鼠小肠推进功能的影响 见表2。

3.3 6组大鼠血清中GAS和MOT的影响 见表3。

表2 6组大鼠小肠推进功能的影响（）

表2 6组大鼠小肠推进功能的影响（）

注：与正常组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.01。

组别正常组模型组多潘立酮组鸡内金低剂量组鸡内金中剂量组鸡内金高剂量组n 10 10 10 10 10 10小肠推进率／%67.05±7.61 43.87±5.701）61.42±4.702）46.55±6.18 51.85±5.192）56.16±5.192）

表3 6组大鼠血清中GAS和MOT的影响（）pg／mL

表3 6组大鼠血清中GAS和MOT的影响（）pg／mL

注：与正常组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.05，3） P＜0.01。

组别正常组模型组多潘立酮组鸡内金低剂量组鸡内金中剂量组鸡内金高剂量组n 10 10 10 10 10 10 GAS 188.41±20.71 109.85±14.301）152.52±23.402）116.95±12.85 128.65±15.823）142.76±16.102）MOT 107.69±14.34 58.57±8.581）80.21±8.742）61.90±6.01 69.18±8.473）77.42±11.072）

3.4 6组大鼠胃组织中AQP4和eNOS蛋白表达的影响 见图1和表4。

图1 6组大鼠胃组织中AQP4和eNOS蛋白表达

表4 6组大鼠胃组织中AQP4和eNOS 蛋白表达的影响（）

表4 6组大鼠胃组织中AQP4和eNOS 蛋白表达的影响（）

注：与正常组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.05，3） P＜0.01。

组别正常组模型组多潘立酮组鸡内金低剂量组鸡内金中剂量组鸡内金高剂量组n 10 10 10 10 10 10 AQP4／β-actin 1.00±0.18 0.68±0.141）0.86±0.182）0.76±0.18 0.89±0.172）0.92±0.233）eNOS／β-actin 1.00±0.26 1.89±0.431）1.16±0.353）1.47±0.452）1.21±0.313）0.91±0.233）

4 讨 论

据统计，全球范围内FD的发病率约为10%～30%［8］，其发病因素与脑肠轴失衡、胃肠运动功能障碍、内脏过敏、慢性炎症、幽门螺杆菌感染、精神和心理因素有关［9-10］，其中胃肠运动功能障碍是FD的主要病理生理学基础，研究发现高达50%以上的FD患者都存在胃肠动力障碍［11］，因此胃肠动力障碍在FD发生中起着重要作用，提示增加胃动力药物成为FD的主要治疗方案之一。GAS主要由胃窦G细胞分泌，可刺激胃酸的分泌，调节胃肠运动功能，是一种可兴奋胃肠运动的脑肠肽［12］。MOT是一种促进和影响胃肠蠕动及胃肠道对水、电解质运输的消化道激素，可以直接促进胃肠的肌纤维收缩，防止内容物反流［13］，提示GAS和MOT在治疗FD患者中发挥重要作用。

AQP4蛋白广泛分布于胃组织细胞中，对胃酸分泌、水分转运和渗透压调节起到重要作用［14］。内皮型eNOS以L-精氨酸为底物合成NO，NO具有调节血管、抑制血小板凝聚、保护内皮细胞等作用［15］。曹峰等［16］在茯苓甘草汤对功能性消化不良大鼠的调节研究中发现功能性消化不良的改善与胃组织中AQP4和eNOS蛋白表达有关，说明FD发病与AQP4和eNOS表达有关。

本研究结果显示：鸡内金可以增强FD模型大鼠胃排空和小肠推进率，提高血清中GAS和MOT水平，上调胃组织中AQP4蛋白表达和降低胃组织中eNOS表达水平，从而改善FD模型大鼠胃肠功能。