基于健脾活血法探讨参菝抗瘤液对人胃癌SGC-7901裸鼠异种移植瘤的抑制作用研究

刘莲芳，许 纯，潘迎英

（南京中医药大学附属张家港市中医医院，江苏 张家港 215600）

胃癌目前已成为全球最常见的恶性肿瘤之一，在初治的胃癌患者中，中国胃肠肿瘤外科联盟数据报告2014—2016年早期胃癌占19%，进展期胃癌占71%，晚期胃癌占10%［1］。我国一项单中心统计结果显示：ⅢC期患者5年生存率为25.7%，Ⅳ期胃癌患者5年生存率仅为12.4%［2］。手术目前仍是胃癌的唯一根治方式，其他西医手段包括放化疗、靶向治疗、免疫治疗。而中医药治疗作为我国的特色治疗，目前在进展期及晚期胃癌治疗方面也显示了一定的优势。在实验研究方面，近年来中医药在胃癌的细胞学水平和分子生物学水平作用已经得到广泛的证实，其主要体现在：诱导细胞凋亡、阻滞信号传导、抑制血管生成、诱导分化、端粒及端粒酶的稳定性、细胞毒作用、放化疗保护、癌基因和抑癌基因表达等［3］。

参菝抗瘤液为我院曹林华院长的经验方，曹林华为张家港市名中医，长期从事中医治疗肿瘤的工作，抗肿瘤治疗经验丰富，特别是在胃癌方面，他提出的健脾活血法治疗胃癌在临床已经取得良好的疗效，并设立基本方，制成院内制剂参菝抗瘤液，临床广泛应用于治疗胃癌、肠癌。参菝抗瘤液在体内的抗肿瘤效应尚未进行过研究，故本课题建立人胃癌SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤模型，观察参菝抗瘤液对肿瘤的抑制作用及其机理。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性BALB／c裸小鼠，平均体质量18～22 g，日龄：5周，上海灵畅生物科技有限公司提供，生产许可证：SCXK（沪）2013-0018，合格证编号：2013001831677，实验动物使用许可证：SYXK（苏）2017-0015，适用于屏障环境（SPF级，小鼠），每组8只，共40只。

1.2 药物 参菝抗瘤液组成：太子参15 g，白术10 g，茯苓 10 g，陈皮 6 g，生半夏 15 g，生牡蛎 30 g，地龙 3 g，菝契 15 g，藤梨根 15 g，绿梅花 10 g，三棱10 g，莪术 10 g，野葡萄藤 15 g，山慈菇 10 g。 由我院中药房煎煮成200 mL中药饮液，并配制成10、50、100、200 mg／mL 的母液，-20℃保存备用。 氟尿嘧啶注射液由上海旭东海普药业有限公司提供（批号：1711041）；0.9%氯化钠配制备用，按 1 mg／kg使用。

1.3 试剂与仪器 YJ-875医用净化工作台（苏州净化设备厂）；HANGPING FA2104S电子秤（上海手术器械厂）；Cmias-98A图像处理分析仪及分析软件（北京航天航空大学）。

1.4 分组与模型制备 取小鼠40只，接种16 d后，此时肿瘤生长至100～150 mm3，将动物随机分为模型对照组、氟尿嘧啶组、参菝抗瘤液低剂量组（低剂量组）、参菝抗瘤液中剂量组（中剂量组）、参菝抗瘤液高剂量组（高剂量组），每组8只。

根据既往的文献方法复制小鼠移植瘤模型：①复苏人胃癌细胞SGC-7901瘤株，接种于3只小鼠腋窝皮下保种，10 d转种1次，共2次；② 选取生长良好的胃癌组织，剪碎匀浆，制成细胞悬液，经0.2%台盼蓝染色后计数活细胞数＞95%，调整细胞浓度为1×107／mL；③ 每只小鼠右腋皮下接种0.2 mL细胞悬液。

1.5 给药方法 模型对照组每天灌服0.2 mL／10 g体质量的生理盐水；氟尿嘧啶组按照氟尿嘧啶1 mg／（kg·d）（容量为 0.2 mL／10g 体质量）腹腔注射；低、中、高剂量组分别按照参菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／（kg·d）灌胃（容量同对照组），连用 15 d。

小鼠给药剂量具体换算按照人与动物用药量换算方式：人体表面积按照许文生氏公式［4］，即体表面积／m2＝0.006 1×身高 ／cm+0.012 8×体质量 ／kg-0.152 9

式中W为体重；K为常数，随动物种类而不同，小鼠为9.1，本试验中药剂量共174 g，按人 50 kg、小鼠22 g进行计量换算，174 g小鼠等效剂量为12.6 mg／kg，取12.5 mg／kg·d，并设低、高剂量组分别为 6.25、25 mg／kg·d。

1.6 观察指标 停药24 h后处死所有小鼠，称体重。将各组小鼠的皮下肿瘤完整剥取，并称瘤重，计算相对肿瘤增殖率（T／C）及抑瘤率（IR）。游标卡尺测量肿瘤的长径、短径，计算肿瘤体积［4］：

其中a、b分别表示长径、短径

V0：分笼给药时测量所得肿瘤体积；Vt：每次测量时的肿瘤体积

TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型对照组RTV

1.7 统计学方法 采用SPSS 19.0进行数据分析。计量资料属正态分布的以（）表示，采用t检验；计数资料采用Kruskal-Wallis H检验。

2 结 果

本研究通过建立人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤模型，评价了参菝抗瘤液的抗肿瘤活性。实验结果表示：参菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／kg 对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤的T／C分别为 63.36%、52.67%、35.21%，IR分别为 37.5%、50.2%、65.5%；而相同条件下，氟尿嘧啶组T／C为37.73%，IR 为 63.8%，见表 1、图 1～图 5。

表1 各组对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤生长的抑制比较

图1 各组对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤动物体质量的影响

3 讨 论

图2 各组对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤瘤体积的影响

图3 参菝抗瘤液对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤瘤重的影响

图4 裸鼠处死后暴露肿瘤照片

图5 肿瘤照片

胃癌的主要治疗手段为系统性治疗，早期胃癌以手术为主，而对于失去手术根治或复发转移的晚期胃癌患者，目前公认应采取以全身药物治疗为主的综合治疗手段，诸如姑息手术、放射治疗、射频消融、腹腔灌注及动脉介入栓塞灌注等局部治疗手段。目前胃癌治疗药物主要包括化学药物和分子靶向药物，一线化疗以毒性相对低、疗效相当的两药联合化疗，以顺铂或奥沙利铂为代表联合5-FU或口服氟尿嘧啶类，该方案可使晚期胃癌患者中位无进展生存期（PFS）延长 5～6个月，总生存期（OS）接近10～13个月。二线治疗多用多西他赛或紫杉醇或伊立替康单药。三线治疗仅涉及小样本研究，化疗获益不明确，临床实践中，特别强调根据患者体力状态、基础疾病等综合考虑。对于HER-2阳性的胃癌患者，化疗基础上联合赫赛汀可显著提高OS至14个月，减少26%的死亡风险。此外，靶向于血管内皮生长因子受体（VEGFR）的单克隆抗体及小分子TKI也在胃癌的二线或三线治疗显示出PFS及OS的获益［5-10］，免疫检查点抑制剂在晚期胃癌的三线治疗中已有前瞻性研究结果支持，但目前获益人群尚存在争议［11］，但尽管如此，晚期胃癌患者预后仍然很差［12］。中医药疗法作为我国传统特色疗法，其在临床已取得良好的疗效，目前研究主要是临床实验和应用、临床研究等。随着国家对中医药发展的高度重视，如何从中药中提取有效抗肿瘤成分，也将成为新药研制的热点。

参菝抗瘤液方中太子参、白术、茯苓健脾益气，陈皮、半夏健胃消食，生半夏、三棱、莪术、山慈茹消肿散结，野葡萄藤、菝葜活血祛瘀，天龙、牡蛎散结，全方共奏健脾理气、活血散结的功效。为了能更进一步研究其中的抗肿瘤成分，寻找高效、低毒的抗肿瘤中药，设计了本实验研究。

3.1 动物模型选择 首先，建立恰当的动物模型在抗肿瘤药物的体内实验研究中是不可或缺的［13-14］，既往文献表明，理想的肿瘤模型应具备以下条件：① 指标客观；② 快速且经济；③ 有良好的预测性；④ 重复性好［15］。移植肿瘤模型包括同种移植性和异种移植性肿瘤模型，异种移植性肿瘤模型移植成活率高，并且可提供大量生长均匀的肿瘤模型，目前研究中运用的最多［16-17］。本研究选用动物为BALB／c裸鼠，该鼠为胸腺缺失、T细胞免疫缺陷、B细胞功能缺陷的小鼠，可明确用于肿瘤学发生机理的研究。

3.2 实验方法 本研究采用的体内实验比较接近临床状态，其所得的结果可较好反映临床疗效，较为可信［18-19］。本实验从抑瘤率来看，显示了参菝抗瘤液对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤的生长有明确的抑制作用，但与氟尿嘧啶组比较无显著差异，需排除实验过程中操作流程、操作人员的因素，实验的设计是否符合该裸鼠的活动规律等［20-22］。

3.3 参菝抗瘤液对裸鼠胃癌移植瘤的抑制作用效果评价 胃癌属中医 “癌病”“岩病”“癥瘕积聚”等范畴，中医病因病机不外乎外感、内伤、起居等原因［23］。本研究基于“健脾益血、消肿散结”法治疗胃癌，目的为临床运用其进行治疗提供客观依据和理论支持。本实验结果显示：参菝抗瘤液低、中、高剂量组对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤的生长有抑制作用，并且随着剂量的增加抑制作用增加，瘤重与模型对照组有显著性差异，说明高剂量参菝抗瘤液具有抑瘤作用，证实了参菝抗瘤液的抗胃癌作用。当然，结果受各种因素影响，本实验未经过重复性验证，期望日后可进行重复性的实验研究，并进一步设计实验来研究该方中的抗肿瘤具体单体成分，并预先进行毒理实验，以得出更为精准的数据。