结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在肺结核快速诊断中的应用价值

李桂杭 高东花 黄振超 罗世战 翟翀 王辉

[摘要]目的 研究结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）在肺结核快速诊断中的应用。方法 选取2018年1～12月我院收治的132例疑似肺结核患者作为研究对象，所有疑似患者分别采用液体分枝杆菌培养管（MGIT）培养法和Xpert MTB/RIF检测法。比较两种检测方法的灵敏度和特异性。结果 132例患者中，经金标准确诊为肺结核的患者120例，非肺结核患者12例。液体MGIT培养法检查确诊为肺结核的患者89例，阴性43例。Xpert MTB/RIF检测法检查确诊为肺结核的患者106例，阴性26例。Xpert MTB/RIF检测法的灵敏度为87.50%，高于液体MGIT培养法的66.67%，差异有统计学意义（P<0.05）;Xpert MTB/RIF检测法的特异性为91.67%，明显高于液体MGIT培养法的25.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 对于疑似肺结核的患者，可采取Xpert MTB/RIF检测法，临床诊断价值较高，且灵敏度和特异性较高，患者可及时治疗，改善其预后，值得临床采納。

[关键词]液体分枝杆菌培养管;实时荧光定量核酸扩增检测技术;肺结核;快速诊断

[中图分类号] R521          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）6（c）-0149-03

[Abstract] Objective To study the application of real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification detection of Mycobacterium tuberculosis/Rifampicin resistance （Xpert MTB/RIF） in rapid diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 132 suspected tuberculosis patients admitted to our hospital from January to December 2018 were selected as the research objects， all suspected tuberculosis patients were cultured by liquid mycobacterium culture tube （MGIT） and detected by Xpert MTB/RIF. The sensitivity and specificity of the two methods were compared. Results Among 132 patients， 120 were diagnosed as tuberculosis by gold standard， and 12 were non-tuberculosis. 89 cases were diagnosed as tuberculosis by liquid MGIT culture， 43 cases were negative. Xpert MTB/RIF test was performed in 106 patients with confirmed pulmonary tuberculosis and 26 patients with negative pulmonary tuberculosis. The sensitivity of Xpert MTB/RIF assay was 87.50%， higher than 66.67% of liquid MGIT culture method， the difference was significant （P<0.05）. The specificity of Xpert MTB/RIF assay was 91.67%， which was significantly higher than 25.00% of liquid MGIT culture method， the difference was significant （P<0.05）. Conclusion Xpert MTB/RIF can be used to detect suspected pulmonary tuberculosis patients. It has high clinical diagnostic value， high sensitivity and specificity. Patients can be treated in time to improve their prognosis， which is worthy of clinical adoption.

[Key words] Mycobacterial growth indicator tube; Real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification detection; Pulmonary tuberculosis; Rapid diagnosis

肺结核属于慢性传染性疾病，住院时间长，大多患者为贫困人群，采取快速可靠的方式进行诊断、实施精准治疗对于控制结核病具有重要意义[1-5]。本研究旨在探讨液体分枝杆菌培养管（MGIT）培养法和结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）在肺结核快速诊断中的应用价值，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2018年1～12月我院收治的132例疑似肺结核患者作为研究对象，其中，女54例，男78例;年龄16～80岁，平均（44.87±5.34）岁。纳入标准：①疑似肺结核患者需要具有肺结核明显的临床症状与体征;②出现乏力、咯血、午后低热等明显症状的患者;③均知晓本研究且愿意参加者;④本研究经医院医学伦理委员会审核批准。排除标准：①影像学检查不典型者;②病例检查或支气管镜检查为肺结核感染者;③出现心脑、肝肾等器官疾病者;④临床资料不完善者。

1.2方法

分别在晨间、晚间、即时3个时间段取1次患者痰液，按照临床实验室检验规程，进行涂片染色与质量监控操作。3个时间段取痰所制标本，任意1次的检出结果为阳性，记为结核分枝杆菌检出阳性。药敏实验使用菌液均取自液体MGIT培养法检出阳性者[6]。

液体MGIT培养法：本院的结核杆菌液体培养采用BD公司BACTECMGIT 960全自动分枝杆菌快速培养鉴定药敏仪（美国JOHNSTON实验公司）及其配套试剂（包括MGIT培养管、MGITOADC营养添加剂、PAN-TA杂菌抑制剂）。取1 ml痰标本置于50 ml有盖的尖底离心管中，取N-乙酰半胱氨酸-氢氧化钠前处理液消化20 min，再次加入磷酸盐缓冲液（PBS）到50 ml，3000 r/min离心15 min，弃上清，利用pH值为6.8的PBS液，将剩余沉淀制备成0.5 ml悬浊液，将其接种在MGIT培养管中。接种前，将MGIT培养管在无菌条件下分别加入0.8 ml MGITPANTA/OADC混合液备用。将MGIT培养管置入BACTECMGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪孵育培养。仪器自动判定培养结果，阴性培养管培养判读持续6周。检出结果为阳性的培养管，进行涂片抗酸染色以确定是否为分枝杆菌;检出结果为阴性的培养管在仔细观察管内浑浊情况。取0.1 ml液体MGIT培养法培养的阳性菌液，用生理盐水稀释100倍。取2支MGIT培养管，标为对照管与研究管，分别加入0.8 ml营养添加剂。将100 μl利福平加入观察管中，加入0.5 ml阳性菌液;对照管加入0.5 ml∶100稀释后的阳性菌液。置入BACTECMGIT 960全自动分枝杆菌快速培养鉴定药敏仪内进行培养，仪器根据分枝杆菌的生长情况对比而判断该药物敏感性。

Xpert MTB/RIF检测法：取1 ml痰标本置于带盖前处理管，加入2 ml SR痰标本处理液，将前处理管旋紧，置于螺旋振荡器上震荡20～30 s，取下静置15 min，确保痰标本能够充分液化[7]。取2 ml处理后的痰标本经过加样孔加入Gene Xpert反应盒内，将反应盒置于Gene Xpert检测模块中，使用仪器自动检测，检测结果需要在检测系统窗口下直接观察。将液体MGIT培养法检出阳性的痰标本，使用上述方法检测MTB对利福平的耐药情况。

1.3观察指标及评价标准

比较两种检测方法的灵敏度及特异度。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%;特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%。

1.4统计学方法

采用统计学软件SPSS 19.0分析数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统計学意义。

2结果

2.1液体MGIT培养法检查的诊断效能分析

132例患者中，经金标准确诊为肺结核的患者120例，非肺结核患者12例。液体MGIT培养法检查确诊为肺结核的患者89例，阴性43例（表1）。

2.2 Xpert MTB/RIF检测法检查的诊断效能分析

132例患者中，经金标准确诊为肺结核的患者120例，非肺结核患者12例。Xpert MTB/RIF检测法检查确诊为肺结核的患者106例，阴性26例（表2）。

2.3两种检测方法灵敏度与特异性的比较

Xpert MTB/RIF检测法的灵敏度为87.50%，高于液体MGIT培养法的66.67%，差异有统计学意义（P<0.05）;Xpert MTB/RIF检测法的特异性为91.67%，明显高于液体MGIT培养法的25.00%，差异有统计学意义（P<0.05）（表3）。

3讨论

随着我国人口流动处于较为频繁的状态，且我国外来肺结核患者的流动性较大，耐药结核病、结核菌/艾滋病病毒双重感染、流动人口结核病防治属于今后结核病防治工作的三大挑战，应根据实际逐步开展结核菌培养与药物敏感性实验，确保患者能得到及时的诊断[8-12]。

本研究结果显示，132例患者中，经金标准确诊为肺结核的患者120例，非肺结核患者12例。液体MGIT培养法检查确诊为肺结核的患者89例，阴性43例。Xpert MTB/RIF检测法检查确诊为肺结核的患者106例，阴性26例。Xpert MTB/RIF检测法的灵敏度为87.50%，高于液体MGIT培养法的66.67%，差异有统计学意义（P<0.05）;Xpert MTB/RIF检测法的特异性为91.67%，明显高于液体MGIT培养法的25.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。Xpert MTB/RIF检测技术是将样品准确、定量PCR扩增与荧光检测结合的检测分析系统，操作较为简单，且无需培训，仅需要在标本盒中加入待检测标本，系统即可自动完成标本纯化，24 h内可获得检测结果[13-14]。检测期间封闭性较好，不会出现交叉感染，对涂阴肺结核患者敏感度较高，目前该项技术已经被世界卫生组织纳为结核病推荐的检验方法[15]。而MGIT培养法检测原理主要为底部包埋的荧光物质，能够对培养管中的氧含量变化产生一定的反应，结核分枝杆菌在MGIT内生长会消耗管内氧，受到特定光源激发后，荧光物质会释放出荧光，并采取读数仪进行判定;整个操作较为复杂，耗时较长。且Xpert MTB/RIF能够多通道设计，可同时检测多个标本，检测时间明显缩短，临床较为高效，并提供利福平耐药基因突变信息，为肺结核的快速诊断提供了重要参考。

综上所述，对于疑似肺结核的患者，可采取Xpert MTB/RIF进行检测，诊断价值较高，能确保患者及时进行治疗，改善其预后，值得应用。由于本研究样本数量有限，研究项目较少，结果可能会出现一定的偏差，临床后期可加大样本容量，增加研究项目，完善实验结果。

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（收稿日期：2019-03-08  本文编辑：刘克明）