铁线莲属蒙药材薄层层析图谱研究

罗彩神

关键词：铁线莲属;蒙药材;薄层色谱

前言

铁线莲属（Clematis L.）隶属于毛茛科，为多年生木质或草质藤本，或为直立灌木或草本，分布于世界各地，约300种，我国各地均有分布[1]。内蒙古地区有16种6变种[2]，经本草考证[2-5]，其中入蒙药的植物有：芹叶铁线莲（Clematis aethusifolia）、黄花铁线莲（C. intricata）、短尾铁线莲（C. brevicaudata）、棉团铁线莲（C. hexapetala） 长瓣铁线莲（C. macropetala）和辣蓼铁线莲（C. mandshurica）（又名：东北铁线莲）。

以上6种铁线莲属蒙药，从药性及功能主治方面，各有差异，不能等同。但由于来源于同科同属不同种植物，亲缘关系相近，原植物形态、药材性状及显微特征方面相似，故临床用药混用、代用等现象较为严重.

现有资料报道的铁线莲属药材薄层研究主要以齐墩果酸或芦丁作为对照品，单独的对棉团铁线莲、芹叶铁线莲、威灵仙进行定性鉴别。而运用薄层色谱法系统地对上述6种铁线莲进行鉴别还未见报导.本研究运用硅胶薄层色谱法对上述6种铁线莲的薄层色谱图谱进行分析，对6种铁线莲进行准确、快速鉴别，从而为临床安全用药提供科学依据。

1.仪器与试剂

烧杯数个;量筒;冷凝回流装置（数字恒温水浴锅，球形冷凝管，圆底烧瓶）;抽虑装置（抽滤瓶，布式漏斗，抽虑泵，滤纸）;10ml容量瓶数个;玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）;层析缸;喷瓶;ZF-20D暗香式紫外分析仪（南京科尔仪器设备有限公司）;薄层层析硅胶GF254（青岛海洋化工）;所用试剂均为分析纯。

2.材料与实验方法

2.1材料

于2009～2011年药材采收期采集6种铁线莲植物全草，置于阴凉通风干燥处储存。蒙药材原植物均经药用植物学教研室李骁老师认真鉴定。

2.2实验方法

2.2.1样品提取

分别精确称取第一批材料样品各三份，每份5g，适当粉碎，分别用75ml蒸馏水、75ml70%乙醇， 75ml95%乙醇浸泡过夜。再分别将隔夜浸泡的药材与溶剂转移至圆底烧瓶，加热回流1h，趁热抽虑，滤渣分别加入第一次所加溶剂65ml，回流0.5h，趁热抽虑，合并两次滤液，水浴蒸干得浸膏，浸膏中加少量（约6-8ml）无水乙醇溶解，定容至10ml容量瓶，备用。

2.2.2 提取方法选择

取10cm×20cm硅胶板，分别点上第一批样品10μL，预饱和15分钟，横向展开（展开系统甲苯：乙酸乙酯：甲酸=20：3：1），展距8cm;25%硫酸水溶液显色，加热至斑点显色清晰.

结果显示，70%乙醇提取液展开的点数目较多且斑点清晰，故优先选用以70%乙醇溶液提取。

2.2.3  提取方法重复性与稳定性研究

以70%乙醇提取芹叶铁线莲作重复性和稳定性研究，分别称取第一批芹叶铁线莲三份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.2.1项下方法提取，存放时间分别为0h，24h，48h;取10cm×20cm硅胶板，点样10μL，展開剂石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1，预饱和15分钟，展开，展距13.8cm，25%硫酸水溶液显色，加热至斑点显色清晰.

结果显示，斑点数目及清晰度一致，说明该提取方法重复性和样品稳定性良好。故按2.2.1方法以70%乙醇提取第二批药材。

2.2.4  展开系统选择

以70%乙醇提取物为标准，分别实验了如下种展开系统：

1.石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1;

2.环己烷：乙酸乙酯：冰乙酸=12：3：1;

3.苯：丙酮=3：1;

4.三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5

5乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水=8：1：1：1

经检视后发现石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1和三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5系统可明显区别出六种药材，故以这两展开系统作为优先展开系统。

2.3 药材薄层图谱鉴别

将两批样品点于同一张薄层板上（10cmX20cm），展开剂石油醚：乙酸乙酯： 丙酮=9：3：1展开，展距8.0cm，喷25%硫酸水溶液后加热至色点清晰，日光下检视。

再以氯仿：甲醇：水（15：3：0.5）为展开剂，将两批药材点于同一张薄层板上（20cm×20cm），展距17.0cm， 25%浓硫酸水溶液显色后于365nm紫外灯下检视。

3.结果

以石油醚：乙酸乙酯：丙酮（9：3：1）为展开剂，得图3，图谱中可以看到Q点为辣蓼铁线莲所独有色点， Q点Rf=0.86，从而可以鉴别出辣蓼铁线莲;再以三氯甲烷：甲醇：水（15：3：0.5）为展开剂，得图4，图中可以看到，芹叶铁线莲独有A色点，长瓣铁线莲比芹叶铁线莲只少了A色点，棉团铁线莲独有B，F，G色点，短尾铁线莲缺C色点，黄花铁线莲C，D点都有，辣蓼铁线莲D，E，F，G点不明显，经过分析对比，从而辨别出了芹叶铁线莲，黄花铁线莲，短尾铁线莲，棉团铁线莲，长瓣铁线莲和辣蓼铁线莲。各色点比移值：A点Rf=0.65;B点Rf=0.56;C点Rf=0.49;D点Rf=0.43;E点Rf=0.32;F点Rf=0.24;G点Rf=0.16.

4.讨论

实验分析发现，铁线莲属蒙药材中，棉团铁线莲成分最为特殊和复杂。有多种独有成分。芹叶铁线莲和长瓣铁线莲成分最为相似。作为同属蒙药材，铁线莲属蒙药化学成分多有相同，但是也有区别，相互之间的替代使用还需要符合药理事实依据，因此我们在保证用药安全的同时， 合理利用药材资源， 综合开发，合理的替代，以达到药材资源的永久持续利用。本研究主要进行了药材鉴别的薄层色谱方法学研究，摸索出适合于铁线莲属6种蒙药材鉴别的薄层色谱方法，并运用该方法鉴别出6种蒙药材;该方法快速，简便，重复性好。

5.不足之处：

1.由于难以找到适合标准品，本研究未对药材成分进行定性分析。只是用薄层色谱比较了他们之间的区别。

2本研究提取样品所含化学成分较复杂，展开效果常被其他成分干扰而影响检视效果，猜测利用萃取方法先对样品溶液进行萃取，再对不同萃取部位点样分析效果可能会更加明显。

参考文献

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志（第二十八卷）[M]. 北京：科学出版社，1989， 74～87.

[2] 内蒙古植物志编辑委员会. 内蒙古植物志（第二卷）[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1989， 515～534.

[3] 中国中医药管理局《中华本草》编委会.《中华本草·蒙药卷》[M].上海：上海科学技术出版社， 2004， 80，216，353.

[4] 柳白乙拉主编. 蒙药正典（占布拉道尔吉著）[M]. 北京：民族出版社，2006， 128～129.

[5] 内蒙古植物药志编辑委员会. 内蒙古植物药志（第一卷）[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，2000，389～397.