冠心宁中14种成分的含量测定

李清清 张继芬

摘   要：建立同时测定冠心宁中主要水溶性和难溶性药效物质的HPLC测定方法。采用HPLC同时测定丹参素、藁本内酯、丹参酮IIA 等14种成分的含量。色谱条件可同时测定上述14种成分，其方法学验证符合药典要求。冠心宁水煎液只可检测到丹参素等8种成分，醇提液可检测到含水难溶性和水溶性的14种成分。建立的测定方法简便、灵敏，适用于冠心宁的体外质量控制。

关键词：冠心宁;HPLC;含量测定

冠心宁收载于《部颁药品标准》（中药成方制剂第17册），由川芎、丹参两味中药组成，具有活血化瘀、通脉养心功效[1]，临床用于冠心病、心绞痛治疗。已有川芎、丹参药材指纹图谱的研究报道[2-5]，但均针对单味药材，尚无同时定量分析川芎、丹参药中各成分的研究。本研究以冠心宁为研究对象，建立同时测定冠心宁中14种成分的HPLC测定方法，以期为冠心宁的深入研究提供参考。

1    仪器与材料

AB135-S电子天平（梅特勒·托利多仪器有限公司）;LC-20AD 高效液相色谱系统（岛津公司）;RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）;CoolSafe 110-4 Pro真空冷冻干燥机（丹麦LaboGene）。

川芎、丹参饮片（重庆慧远药业有限公司）;丹参素（批号：KJ0622CA14）、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸 B、丁烯基苯酞、丹参酮I、隐丹参酮对照品（上海源叶生物科技有限公司），纯度均大于98%;洋川芎内酯 H、洋川芎内酯 A、洋川芎内酯 I、藁本内酯对照品（成都瑞芬思生物科技有限公司），纯度均大于98%;川芎嗪对照品、阿魏酸对照品（成都克洛玛生物科技有限公司），纯度均大于98%;丹参酮ⅡA对照品（成都曼思特生物科技有限公司，纯度大于98%）;冠心宁注射液（山西振东泰盛制药有限公司，批号：1712141）;冠心宁片（正大青春宝药业有限公司，批号：1807002）;乙醇（重庆川东化工有限公司）;甲醇（色谱纯，Adamas公司）;甲酸（色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司）;其余试剂均为分析纯。

2    方法与结果

2.1  供试品溶液的制备

分别称取川芎、丹参粉末（过40目筛）各5 g，加85%乙醇100 mL，60 ℃回流提取两次，每次1 h，合并药液，60 ℃减压回收乙醇后冷冻干燥，即得浸膏。取浸膏约0.1 g，加甲醇超声溶解后定容至10 mL，待测。

2.2  对照品溶液的制备

分别精密称取适量丹参素等14种对照品，丹参素纯水溶解并定容，丹参酮I氯仿溶解并定容，其余对照品用甲醇溶解并定容，制得各对照品贮备液。精密吸取各对照品贮备液0.1 mL，甲醇定容至2 mL，得混合标准品溶液。

2.3  色谱条件

色谱柱：Symmetry C18（4.6×250 mm，5 µm）;流动相：0.1%甲酸-甲醇;梯度洗脱：0～22 min，25%～36%甲醇;22～35 min，36%～60%甲醇;35～45 min，60%～70%甲醇;45～55 min，70%～85%甲醇;55～65 min，85%甲醇;65～70 min，85%～25%甲醇;流速：1.0 mL/min;检测波长：280 nm;柱温：30 ℃。

2.4  专属性

取阴性对照溶液、对照品溶液、供试品溶液，按“2.3”项色谱条件进行分析，记录色谱图。由图1冠心宁的HPLC可知，在该色谱条件下各成分分离良好，阴性对照溶液不干扰测定。

2.5  线性与范围

取混合对照品溶液，依次稀释4倍，得系列不同质量浓度的混合对照品溶液。将各对照品溶液按“2.3”项色谱条件进样分析，记录各峰面积。以对照品峰面积（y）为纵坐标，质量浓度（x）为横坐标，进行线性回归，回归方程和线性范围如表1所示。结果表明，各对照品在各质量浓度范围内线性关系良好。

2.6  仪器精密度

取同一供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行分析，每天进样3次，连续进样3天，计算各成分质量分数的日内精密度及日间精密度。丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎內酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎内酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II A的日内精密度分别为1.13%、2.56%、1.15%、1.20%、2.04%、1.59%、2.77%、2.46%、1.75%、2.53%、1.71%、2.18%、2.48%、2.72%，内间精密度分别为1.49%、2.64%、1.25%、1.25%、1.41%、1.31%、1.57%、1.23%、1.71%、2.02%、0.90%、3.22%、2.48%、2.43%，可满足分析要求。

2.7  重复性

取同一份浸膏，按“2.1”项下供试品制备方法制备6份供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行分析，记录各峰面积，计算各成分质量分数及RSD值，丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎内酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II A的RSD为1.01%、2.97%、2.73%、1.46%、2.67%、2.51%、2.12%、2.26%、2.26%、1.79%、3.23%、0.58%、3.34%、2.30%，该方法重复性良好。

2.8  加样回收率实验

取同一浸膏约0.1 g，共9份，分别置于10 mL容量瓶，再分别加入相当于原成分质量分数50%、100%、150%的“2.2”项制备的各成分对照品贮备液溶液，甲醇超声分散后定容至10 mL，摇匀，0.22 µm微孔滤膜过滤，取续滤液，按“2.3”项下色谱条件进样分析，计算各成分加样回收率。丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎内酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II A平均加样回收率分别为101.73%、100.81%、100.42%、102.86%、100.65%、98.05%、100.12%、102.40%、96.13%、96.39%、97.42%、97.44%、97.17%、95.48%，平均加样回收率在92%～105%范围内，可满足分析要求。

2.9  稳定性

取供试品溶液在0、2、6、8、10、12 h时间点进样，按“2.3”项色谱条件进行分析，记录各峰面积，计算各成分质量分数及RSD值。丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎内酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II A的RSD值为1.48%、2.87%、2.61%、2.91%、1.16%、2.95%、2.90%、1.14%、2.77%、1.16%、2.00%、1.88%、2.23%、2.24%，各成分RSD均小于3%，供试品溶液在12 h内稳定。

2.10  冠心宁不同提取方式的含量测定

（1）水煎液。将川芎、丹参药材打粉（过40 目筛），分别称取川芎、丹参粉末5 g，加10倍量纯水煎煮2次，每次1 h，合并两次提取液，减压浓缩，冷冻干燥，得浸膏。取浸膏0.1 g，加甲醇超声溶解并定容至10 mL，待测。

（2）醇提液。将川芎、丹参药材打粉（过40 目筛），分别称取川芎、丹参粉末5 g，10倍量85%乙醇，60 ℃回流提取两次，每次1 h，合并两次提取液，经60 ℃减压回收乙醇，冷冻干燥，得合提浸膏。取浸膏0.1 g，加甲醇超声溶解并定容至10 mL，待测。

以上两种供试品溶液按照“2.1”项色谱条件HPLC测定，结果如表2所示。

结果可知，水煎液中含有丹参素、原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、迷迭香酸、丹酚酸B;醇提液中除含以上成分外，还含洋川芎內酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA水难溶性成分。

3    结语

提取方式对冠心宁中的成分及质量分数有很大影响，水煎液主要含丹酚酸B等水溶性成分，但丹参、川芎成分的药效研究，藁本内酯、丹参酮IIA等水难溶性成分对冠心宁的临床功效具有重要贡献。可见，开发同时含有丹参素、丹酚酸B等水溶性成分和藁本内酯、丹参酮IIA等难溶性成分的冠心宁新制剂具有一定的价值和意义。

[参考文献]

[1]卫生部药品标准.中药成方制剂（第17册）[S].北京：中华人民共和国卫生部药典委员会，1996.

[2]刘   娟，冯   芮，蒲忠慧，等.指纹图谱结合HPLC定量分析在中药川芎质量评价中的应用研究[J].中药材，2019，42（2）：353.

[3]方文韬，邓爱平，任振丽，等.丹参品质评价研究进展[J].中国中药杂志，2018，43（6）：1 077-1 085.

[4]周蔚昕，刘   涛，刘   钱，等.川芎饮片标准汤剂的HPLC及物理指纹图谱研究[J].中草药，2018，49（21）：5 107.

[5]王   涛，张   慧，赵   丹，等.丹参波长叠加指纹图谱及多指标成分测定研究[J].中国中药杂志，2019，44（2）：338.