免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较

赵科

摘要：目的研究免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力。方法将四中不同的干扰素游离胆红素（FBil）、结合胆红素（CBil）、血红蛋白（Hb）、乳糜（CH）以不同浓度分别与特定蛋白血浆混合，采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法分别对所制备的混合标本进行监测，监测结果平均值与空白对照组相比较，计算出干扰率，对比两种监测方法的抗干扰能力。结果在特定蛋白的检测中四中干扰物对免疫透射比浊法均未出现任何干扰现象。，而免疫散射比浊法在检测高浓度的IgM时分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000 FTU时干扰率为6.12%、6.55%、5.23%，在低浓度lgM分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000FTU干扰率分别为6.01%、5.44%、8.97%;高浓度的IgM在Hb浓度为9.9、29.6umol/L干扰率分别为5.11%、5.12%;检测低浓度Hb浓度为9.9、29.6umol/L时干扰率分别为7.58%、6.10%，则表示以上浓度时均出现干扰现象结论在检测特定蛋白的检验过程中，免疫透射比浊法对游离胆红素（FBil）、结合胆红素（CBil）、血红蛋白（Hb）、乳糜（CH）四中干扰素的抗干扰能力明显优于免疫散射比浊法。

关键词：免疫透射比浊法免疫散射比浊法特定蛋白抗干扰能力

免疫比浊法是现如今医学检验常用的检测方法，其基本原理是抗原抗体动态测定方法，当抗原抗体在某些特殊稀释系统中反应而且比例合适的作用下，形成微粒，使反应液出现一定浑浊度，若抗体浓度固定，形成的复合物的量随着样品中的抗原含量增加而增加，浊度也随之增加，通过测反应液的浊度与一系列标准品对照即可计算出抗原含量。免疫比浊法主要包括免疫透射比浊法、免疫散射比浊法、免疫胶乳比浊法，不同的免疫比浊法在检测结果、检测方法、抗干扰能力方面具有一定的差异，在选择是常常需结合所检验的样本性质进行。本研究通过使用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法对混入干扰素的人体特定蛋白的检测，比较两种在抗干扰能力方面的差异，进一步指导临床检验工作中检验方法的选择，其具体报告如下。

1.一般资料和方法

1.1实验资料

采用随机抽样法采集我院门诊及住院患者血清样本，血清样本必须满足无溶血、浑浊、黄疸、脂血。特定蛋白检测主要包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、c反应蛋白（cRP），3种特定蛋白各取高、低2个浓度，分别为IgG：8-12 g/L、>16 g/L;IgM：1.10-1.5 g/L、>2.0 g/L;CRP：4-10 mg/L、>100 mg/L。干扰物包括离胆红素（FBil）、结合胆红素（cBil）、血红蛋白（Hb）、乳糜（CH），每种干扰物设置三个不同浓度，FBil：1927、2571、3210umol/L;CBil：2 058、2671、3398umol/L;Hb：9.9、19.8、29.6umol/L;CH：8000、12000、14000 FTU。

1.2方法

1.2.1样本配置

将对血清与各个浓度的每一种干扰素分别进行混合，配置比例为1：7，配置成对照组，共12个小组，按此方法分别配置相同的两份样品;空白对照组选用蒸馏水作为空白干扰素，同样按照1：7配比与血清样本进行混合，作为空白对照组，按此方法分别配置相同的两份样品。

1.2.2检测方法

将配置好的实验组和空白对照组样品均采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法分别进行检测，所有操作均按照相应检验方法严格进行。

1.2.3检测仪器和试剂

免疫透射比浊法选用ROCHE Modular P全自动生化分;免疫散射比浊法选用SIEMENSBN ProSpec特定蛋白测定仪。三种特定蛋白的检测试剂均由多使用仪器提供的配套试剂盒。

1.3观察及评价指标

实验组样本反复才检测3次，空白对照组反复测定3次，检测结果均取多次检测的平均值，将实验组检测平均值与相应的空白对照组检测平均值相比较，若差异大于或小于空白对照组的5%均认为存在干扰，按美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP7-A文件评价2种方法的抗干扰能力。统计不同浓度出现的干扰例数，进行比较。

1.4统计学处理

本研究采用SPSS18.0软件包对所得的数据进行统计学分析，计量资料采用表示，组问比较采用t检验，计数资料采用率表示，x 2检验，检验标准a=0.05，P

2.结果

经过两种不同检测方法的测定，免疫透射比浊法在检测高低浓度特定蛋白对四中干扰物均不敏感，未出现任何干扰现象。，而免疫散射比浊法在检测高浓度的IgM时分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000 FTU时干扰率为6.12%、6.55%、5.23%，在低浓度IgM分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000 FTU干扰率6.01%、5.44%、8.97%;高浓度的IgM在Hb浓度为9.9、29.6umol/L干扰率为5.11%、5.12%;检测低浓度Hb浓度为9.9、29.6umol/L时干扰率为7.58%、6.10%，则表示以上均出现干扰现象，其余未列出的平均值与空白对照比较干扰率均<5%两组将干扰能力差异存在显著统计学意义（P<0.05）见表1。

3讨论

免疫透射比浊法所采用的检测仪器为全自动生化分析仪，应用双波长检测，利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比，与单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法比较具有敏感、快速简便，结果准确等优点。而免疫散射法是利用一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关，其对某些如乳糜、严重溶血是的血红蛋白等大颗粒物质的干扰较为敏感，导致检测结果与正常结果又较大的偏差，該法还可能受到多种物理因子的影响，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等。

本研究结果显示，免疫透射比浊法在测定混入不同种类、不同浓度的干扰物的血清样本时，结果与空白组对照差异并不大，干扰率均小于5%，而免疫散射比浊法在测定上述样本时在乳糜和血红蛋白的两种不同浓度中出现了偏差，检测高浓度的IgM时分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000 FTU时干扰率为6.12%、6.55%、5.23%，在低浓度IgM分别在乳糜（CH）浓度为8000、12000、14000 FTU干扰率6.01%、5.44%、8.97%;高浓度的IgM在Hb浓度为9.9、29.6umol/L干扰率为5.11%、5.12%;检测低浓度Hb浓度为9.9、29.6umol/L时干扰率为7.58%、6.10%。不难看出，干扰素对免疫散射比浊法的干扰程度远远大于对免疫透射比浊法的干扰。

在临床检验工作中，样本的检测常常受到多种因子的干扰而导致结果的误差，甚至出现医疗误诊、误判，科学而高效的检验方法是临床诊疗工作的得力助手，而作为常用的检验方法，免疫透射比浊法对的抗干扰能力明显优于免疫散射比浊法，值得临床推广。