特种甘薯TSP-1提取物对环磷酰胺致血小板减少症小鼠的初步研究

王洪云 张毅钮 福祥 孙健 徐飞 朱红 岳瑞雪 张文婷

摘 要：ICR小鼠连续3d腹腔注射100mg/kg环磷酰胺，建立血小板减少症模型。将造模成功小鼠分别灌胃6g/kg和2g/kg剂量TSP-1水提取物、6g/kg和2g/kg剂量TSP-1石油醚提取物、2g/kg剂量TSP-1正丁醇提取物和1g/kg剂量TSP-1氯仿提取物，造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血测定血小板和白细胞数量。结果表明：2g/kg TSP-1石油醚提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物可以显著升高环磷酰胺模型小鼠的血小板，但各提取物对环磷酰胺所致白细胞减少无治疗作用，提示特种甘薯氯仿与石油醚提取物具有进一步用于治疗血小板减少症的潜在价值。

关键词：特种甘薯TSP-1;环磷酰胺;血小板减少

甘薯为璇花科甘薯属一年或多年生草本植物，是一种药食同源作物，具有重要的药用保健价值[1]。研究表明，甘薯叶含有树脂糖苷、萜类、酚酸类、黄酮类和甾体类等化学成分，具有抗氧化、抑制癌细胞增殖和提高免疫力等多种功能[2-3]，某些特种甘薯对过敏性紫癜出血等疾病具有良好的治疗作用[4]。近些年来，笔者通过特种甘薯TSP-1对志愿者的临床试用效果进行观察，发现该品种的叶片提取物对血小板减少症具有良好的治疗作用。

目前，临床上使用的大多数化疗药物都会对癌症患者造成较为严重的毒副作用，主要的血液学毒性作用表现在血小板数量明显降低，患者的免疫功能降低，进而影响化疗进程[5]。本研究以化疗药物环磷酰胺制作血小板减少症小鼠模型，采用特种甘薯TSP-1不同提取物（水、石油醚、正丁醇、氯仿）对ICR小鼠灌胃，观察其对血小板减少症模型小鼠外周血小板和白细胞数量的影响，为其进一步药用开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

ICR小鼠，清洁级，18～23g，雌雄各半，共64只，由南京医科大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂

环磷酰胺（上海华联制药有限公司，沪卫药淮字（1995）第012034号）、石油醚（国药集团）、正丁醇（国药集团）、氯仿（国药集团）、羧甲基纤维素（安耐吉）。

1.3 主要仪器与设备

CA-800全自动血球分析仪（日本吉泰）、FA1104 型精密电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、灌胃针、采血针等 。

1.4 特种甘薯TSP-1不同提取物的制备

制备流程：特种甘薯TSP-1干燥叶片→清洗、去砂、粉碎→溶劑提取（水、石油醚、正丁醇、氯仿）→过滤→真空浓缩→冷冻干燥→真空4℃保存。灌胃前用1%羧甲基纤维素配成混悬液。

1.5 环磷酰胺致血小板减少症小鼠模型的建立与给药

ICR小鼠，雌雄各半，18～23g，随机分为8组，分别为空白对照组、模型对照组、6g/kg TSP-1水提取物、2g/kg TSP-1水提取物、6g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1正丁醇提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物。各受试组按每10g体重灌服0.2mL受试药物，空白和模型对照组给予等量的1%羧甲基纤维素溶剂，每日1次，连续6d。给药第4天，除空白对照组外，其余各组腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，每日1次，连续3d，建立血小板减少症模型。

1.6 外周血小板和白细胞数量的测定

造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血，加入全自动血球分析仪，测定血小板、白细胞数。

1.7 统计学分析

采用SPSS 18.0软件处理数据，以平均值±标准误表示。统计显著性水平设为：P<0.05有差异、P<0.01差异显著。

2 结果与分析

2.1 TSP-1不同提取物对环磷酰胺致血小板减少症模型小鼠外周血血小板的影响

小鼠连续3d灌胃特种甘薯TSP-1不同提取物，TSP-1石油醚提取物、TSP-1正丁醇提取物和TSP-1氯仿提取物组血小板降低10%～25%，其中2g/kg石油醚提取物、1g/kg氯仿提取物组具有显著性差异（P<0.01），其余各组血小板数量相近。连续3d腹腔注射环磷酰胺，模型组血小板数量下降到693×109/L，与造模前比较减少19.8%，与造模前和空白对照组均有显著性差异（P<0.05）。2g/kg水提取物组血小板数量降幅最大，与造模前、模型对照组和空白对照组均有极显著差异（P<0.01）;2g/kg正丁醇提取物组小鼠血小板与造模前也有显著下降（P<0.05）。6g/kg水提取物和石油醚提取物组的小鼠血小板无明显减少，分别与造模前和空白对照组相近（P>0.05）;而1g/kg氯仿提取物组血小板数量较造模前显著升高（P<0.01）。

造模后第6天，模型对照组血小板数量已明显回升，这说明环磷酰胺骨髓抑制效果结束，但实验结束时，模型组小鼠血小板数量仍然明显低于造模前（P<0.05），说明模型建立成功[6]。造模后随着给药时间的延长，给药小鼠血小板均有所提高，除2g/kg水提取物组外，其余各组血小板数量均超过造模前水平，其中2g/kg石油醚提取物和1g/kg氯仿提取物组提升效果最好，与造模前比较具有显著性差异（P<0.01）。试验结果提示，特种甘薯TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善环磷酰胺致外周血血小板减少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好。

2.2 TSP-1不同提取物对环磷酰胺致血小板减少症模型小鼠外周血白细胞的影响

连续3d灌胃特种甘薯TSP-1不同提取物，6g/kg水提取物和6g/kg石油醚提取物组小鼠外周血白细胞比空白对照组升高约30%，其中6g/kg甘薯水提取物组升高具有显著性差异（P<0.05），其余各提取物组均显著降低（P<0.05或0.01）。造模后第3天，外周血中白细胞数量即急剧下降，约为给药前的15%～30%之间，包括模型对照组在内，各组与空白对照比较均具有极显著差异（P<0.01），试药组与模型组比较无显著性差异（P>0.05）。造模后第6天，各组小鼠白细胞数量均无明显变化。试验结果提示，特种甘薯TSP-1水提取物6g/kg剂量与石油醚提取物6g/kg剂量具有升高正常小鼠外周血白细胞的作用，但各提取物对环磷酰胺致外周血白细胞减少均无治疗作用。

3 结论与讨论

环磷酰胺为常用抗肿瘤化疗药物，有骨髓抑制等不良反应，给予大剂量环磷酰胺会使B和T淋巴细胞免疫功能下降，引起体液及细胞免疫功能的全面抑制，从而对血小板生成起抑制作用。已有文献报道，小鼠连续3d皮下注射100mg/kg环磷酰胺，停药后3d左右血小板可下降20%～30%[7]。本研究应用环磷酰胺对血小板的抑制作用，以环磷酰胺100mg/kg连续3d给小鼠皮下注射，成功建立血小板减少症模型，造模后第3天血小板数量降到最低，造模后第6天血小板数量仍低于造模前。

抗肿瘤化学药物临床应用常导致血小板减少，严重者可威胁生命。目前临床上主要治疗手段是应用促血小板生成素（TPO）或白细胞介素-11（IL-11）、输注血小板和应用糖皮质激素，降低化疗药物剂量或推迟治疗至患者的骨髓造血功能恢复。应用重组人血小板生成素（rhTPO）治疗，价格昂贵;输注血小板有可能增加血源性感染肝炎和艾滋病的危险;而降低化疗药物剂量或推迟治疗，对患者的疗效会有不利影响[8]。

近年来，相继有文献报道，中药或天然药物对血小板减少症有一定疗效[9-10]。本研究以特种甘薯TSP-1为研究对象，对TSP-1抗血小板减少症的有效部位进行筛选，结果表明，TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善环磷酰胺致外周血血小板减少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好，但各提取物对环磷酰胺致外周血白细胞减少均无治疗作用。在外周血血小板数量方面，石油醚提取物低剂量组的效果强于高剂量组，这说明其最低有效剂量可能低于2g/kg，今后的药效实验需进一步测定其最低有效剂量;而高剂量组药效不如低剂量组，可能是高剂量给药无法完全吸收。

中药来源的化合物一直都是國内外药物研发的热点，本实验显示，特种甘薯TSP-1在提升血小板减少症小鼠外周血血小板数量上有很好的效果，其作用机制还需要更加深入的研究，有效成分也有待进一步鉴别，然而，其用量少、成本低、给药方便等优势足以使其成为有潜力的候选药物。◇

参考文献

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[2]Gundala SR，Yang C，Lakshminarayana N，et al.Polar biophenolics in sweet potato greens extract synergize to inhibit prostate cancer cell proliferation and in vivo tumor growth[J].Carcinogenesis，2013，34（9）：2039-2049.

[3]Johnson M，Pace RD.Sweetpotato leaves：properties and synergistic interactions that promote health and prevent disease[J].Nutrition Reviews，2010，68（10）：604-615.

[4]许世卫，钮福祥.甘薯主张[M].青岛：青岛出版社，2006.

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[7]张擎，彭红娟，余晓彬，等.环磷酰胺诱发小鼠血小板减少症模型的建立及其血小板功能的测定[J].第一军医大学学报，2003，23（12）：1277-1279、1282.

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