微小RNA-302b在急性心肌梗死患者血清中的表达及临床意义

苏晓莉 王选琦 吴晓鹏 张燕

710043 西安，陕西省第四人民医院心血管内科

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是目前欧美等发达国家致死率最高的疾病，在我国其发病率和致死率也呈逐年上升趋势[1]。近年来国内外多项研究指出，微小RNA(microRNA，miR)在AMI患者血清或组织中表达发生显著变化，参与心肌细胞损伤或坏死的调控，是AMI的重要生物标记物[2-4]。Wang等[5]通过尸检发现，miR-186、miR-125b和miR-302b在心肌梗死患者心肌组织中表达显著升高。本研究通过对比AMI患者和健康人血清中miR-302b的相对表达量，探讨miR-302b在AMI患者中的临床意义。

1 对象和方法

1.1 研究对象

本研究为前瞻性研究。收集2016年在陕西省第四人民医院心血管内科治疗的AMI患者72例作为AMI组，其中男性37例，女性35例，年龄39～72岁，平均(47.7±5.9)岁；并采用随机数字表法选取同期进行体检的健康人48名作为对照组，其中男性25名，女性23名，年龄35～69岁，平均(48.6±5.8)岁。纳入标准：年龄≥18岁；临床资料完整；对本研究知情，并签订知情同意书。排除标准：心绞痛、各类心脏病、心肌炎或心包炎患者；合并肝肾等脏器功能障碍、恶性肿瘤、急慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏病史、高胆固醇血症或其他血液类疾病；入组前半年内因其他疾病进行手术治疗或住院治疗；妊娠期或哺乳期妇女；AMI患者治疗过程中死亡。本研究经医院伦理委员会批准(伦理批号：2016-035)。

1.2 AMI的诊断与治疗

对于出现胸痛和相关症状的患者，在询问患者冠心病、高血压、糖尿病及外科手术等病史后，立即抽取静脉血5～10 ml进行血清心肌损伤标记物检测，然后进行超声心动图检查，对于第1次超声心动图检查不明确的患者应在10～30 min后复查。根据患者检查结果，参照指南[6]对AMI进行诊断。根据心电图结果，对于ST段抬高型心肌梗死伴剧烈胸痛患者给予镇痛治疗，其他治疗根据患者具体病情进行，包括溶栓、经皮冠状动脉介入术、冠状动脉旁路移植术、抗栓、抗凝及抗心肌缺血治疗等。

1.3 血清学指标测定

所有研究对象于清晨空腹采集5～10 ml静脉血，1 000 rpm离心10 min收集血清，全自动生化分析仪(AU680，Beckman Coulter，美国)测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。

1.4 血清miR-302b的提取与测定

AMI患者在临床确诊后12 h内采集血液(健康人群的采血时间无特殊规定)。将200 μl血浆加入1 000 μl QIAzol裂解液(QIGEN，德国)以分离血清总RNA，室温下静置15 min，然后运用miRNeasy血清/血浆试剂盒(QIGEN，德国)提取血清总RNA，PrimeScript miRNA cDNA合成试剂盒(Takara，日本)反转cDNA，ABI 7500荧光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国)进行qPCR扩增。qPCR参数：95℃ 30 s，90℃ 5 s-65℃ 30 s-40个循环。以U6为内参，用2△t法(△t=CTmiR-CTU6)计算miR-302b相对表达量。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 一般资料比较

两组在年龄、性别、体质指数、合并高血压、高脂血症和糖尿病比例、TC、TG、心率、血压上比较，差异均无统计学意义(均为P>0.05)，见表1。

2.2 miR-302b在AMI患者血清中的表达

miR-302b在AMI组患者血清中的相对表达量显著高于对照组(3.14±0.76 比1.13±0.22，t=17.706，P<0.001)。

2.3 AMI患者miR-302b表达与心肌损伤的相关性

miR-302b在AMI患者血清中的相对表达量与CK-MB(r=0.428，P=0.017)、AST(r=0.519，P=0.045)、LDH(r=0.718，P=0.003)和cTnI(r=0.772，P=0.000)均呈正相关。

2.4 miR-302b对AMI的诊断价值

miR-302b诊断AMI的ROC曲线下面积为0.834，当血清miR-320b水平为3.45时，约登指数最大，因此miR-320b的诊断阈值为3.45，敏感度为88.6%、特异度为64.3%。

3 讨论

本研究发现，miR-302b在AMI患者血清中的相对表达量显著高于健康体检者。国内外多项相关研究指出，miR-302b可以调控细胞周期核心凋亡，是一个与细胞损伤、坏死及凋亡密切相关的miR[7-8]。Wang等[5]在心肌梗死患者尸体解剖时发现，miR-302b在心肌梗死患者心肌组织中表达显著升高。miR-302b定位于人染色体4q25上，是miR-302/367家族中的重要一员。miR-302/367是目前研究最为广泛的miR家族，被发现广泛参与多种疾病的发生发展。近年研究显示，颗粒物污染与心血管病发病率和死亡率密切相关，颗粒物大气污染已被明确提出是心血管疾病的一个可控制的独立危险因素[9]。Bollati等[10]研究证实，在体内、体外模型中，颗粒物处理后可以显著提高血浆和细胞培养上清中miR-302的表达，并进一步分析发现miR-302与冠状动脉疾病、心肌肥大和心力衰竭相关信号通路有关。此外，以往研究表明，miR-302b不仅可通过调节BCL-2和Cyclin D2蛋白的表达而调控神经细胞凋亡[8]，而且还可通过调节细胞DNA损伤增强乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性而促进其死亡[11]。这些研究均提示，在外因诱导下miR-302b的高表达可引起AMI患者心肌细胞坏死或凋亡。本研究还发现，AMI患者血清miR-302b相对表达量与AST、LDH、CK-MB和cTnI呈正相关。提示AMI患者高表达的miR-302b可能与心肌细胞损伤有关。

表1 两组研究对象的临床资料比较

为了评估miR-302b对AMI的诊断价值，我们还计算了miR-302b诊断AMI的ROC曲线下面积，显示miR-320b的AUC为0.834，诊断AMI的敏感度为88.6%和特异度为64.3%。由此，我们可以看出miR-302b诊断AMI具有较好的灵敏度，但特异度较低，这可能与冠状动脉疾病、心肌肥大和心力衰竭等多种心血管疾病都会导致miR-302b表达出现异常有关[9-10]。我们的研究提示，miR-302b在AMI患者血清中呈高表达，且可能与心肌损伤有关。

利益冲突：无