β族链球菌检测方法的对比评价

辛洁，魏文婷，杨利鑫

（空军航空医学研究所附属医院 检验科，北京 100089）

0 引言

β族链球菌又名无乳链球菌（GBS），是一种革兰氏阳性球菌和条件致病菌，是孕妇围产期感染和新生儿感染的重要病原菌。孕妇围产期感染GBS可致胎膜早破、早产、流产、产褥感染，并可导致新生儿肺炎、脑膜炎、败血症等[1]。因此，临床实验室必须加强对围产期孕妇GBS筛查工作。本研究旨在通过对GBS的细菌培养法、免疫法和PCR法的五种检测方法进行评估，为快速、准确地鉴定GBS感染诊断提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）研究对象：我院2016年6月至12月的门诊妊娠34-37周的孕妇200例（均为初产妇），孕周均通过B超和末次月经时间核查确认，近期无感染性疾病及抗菌药物使用史。标本为同时采集5份生殖-直肠分泌物。

（2）仪器与试剂PCR扩增仪，荧光PCR试剂盒为厦门泰普生物科学有限公司。西门子全自动微生物鉴定及药敏分析系统及其配套革兰氏阳性细菌鉴定卡，CO2培养箱，层析法试剂盒由珠海华澳科技提供。乳胶法试剂盒由北京金沃生物工程技术有限公司提供。

1.2 方法

（1）混合血琼脂培养法：拭子在选择增菌培养基（GBS增菌肉汤）增菌后转种到血平板上，在37℃有氧条件下培养18-24小时，根据细菌的形态和溶血特性，及革兰氏染色、Camp试验及全自动微生物分析仪鉴定菌种。

（2）哥伦比亚血琼脂培养法：在35℃、5%CO2条件下避光孵育18-24小时，对中小灰白，有β溶血，用革兰氏染色和触酶试验筛选，用全自动微生物分析仪鉴定菌种。

（3）胶乳凝集法：使用吸附了抗GBS荚膜多糖的抗体的胶乳混悬液与检测物中的GBS荚膜多糖抗原结合，形成免疫复合物的检测方法。

（4）免疫层析法：利用针对GBS的特异性单克隆抗体-标记物和固相化多克隆抗体来检测标本中的GBS。

（5）荧光PCR检测法：按试剂盒规定提取拭子中的细菌DNA，在稀释50倍后制成PCR检测模板进行测定。

1.3 统计学处理

采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析采用t检验，用计数资料采用χ2检验，用%表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1 五组检测结果对比表

2.1 两种细菌培养法阳性检出率比较

200例标本增菌后转种血琼脂平板和哥伦比亚琼脂平板培养后的检出率分别为：4.5%（9/200）和5.0%（10/200），二者差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 两种免疫学检查法阳性检出率比较

胶乳凝集法和免疫层析法检出率分别为：5.0%（10/200）和5.5%（11/200），二者差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 PCR与细菌培养法、免疫学检查法比较

PCR检测阳性15例，阳性检出率为7.5%，与两种细菌培养法、两种免疫学检查法阳性检出率比较差异均有统计学意义（P<0.05）。

3 结论

B族链球菌寄居肠道和直肠，一般正常健康人群感染后并不致病，是条件致病菌。而孕妇作为特殊人群感染后会导致不良妊娠结局，其中40%-70%可在分娩中传递给新生儿[2-3]，导致败血症。由于产妇B族链球菌感染时，临床症状不够明显，从而易被忽视，因此产前孕妇进行B族链球菌的检测是十分重要，检测阳性者可通过药物治疗，改善妊娠结局，使新生儿及孕产妇的健康得以保障[4-6]。

细菌培养法阴性预测值和准确度较高，是国内大多数医院采用的首选检测法，但细菌培养阳性率易受外界条件影响，例如：临床检测准确、快速的要求。免疫学方法灵敏度高于细菌培养法，简单实用且成本相对较低，是一种快速定性试验，更适用于社区医院快速检测。荧光PCR技术是通过体外扩增获得特定的DNA片段，其优点快速、灵敏、特异性准确性高，并且在检测过程中可进行全程监控[7-9]，具有更高的临床实用性和优越性。本次研究显示：对200例孕妇B族链球菌检测，PCR准确率为100%（15/15），比细菌培养法和免疫检测法有明显的优势，差异有统计学意义（P<0.05）[10]。

综上所述，荧光PCR法检测孕妇B族链球菌具有灵敏、准确、快速、阳性检出率高的特点，为更快速、准确的鉴定B族链球菌，合理应用抗菌药物提供可靠的诊断依据。