健心合米尔高滋斑安比热片质量标准的改进

毛 艳， 蔡晓翠， 庞克坚， 贺金华*， 何 江

（1. 新疆维吾尔自治区药物研究所， 新疆 乌鲁木齐830004； 2. 和田维吾尔药业股份有限公司， 新疆 和田848200）

健心合米尔高滋斑安比热片由牛舌草、 牛舌草花、 珍珠、 琥珀、 红宝石、 檀香、 玫瑰花等14 味药材组成, 具有补益支配器官的功效, 用于治疗心悸、 失眠多梦, 但原标准仅有性状、 理化鉴别项[1], 并无定性鉴别、 含有量测定,故国家药典委员会将其列入2015 年度国家药品标准提高工作（中药） 中。 本实验对健心合米尔高滋斑安比热片质量标准进行改进, 以期更有效地控制该制剂质量。

1 材料

1.1 仪器 UltiMate 3000 系列高效液相色谱仪, 配置二极管阵列检测器、 四元梯度泵、 在线脱气机、 自动进样器、柱温箱、 4～40 ℃恒温箱（美国Thermo Scientific Technologies公司）； CPA225D 电子天平（0.01 mg, 德国Sartorius 公司）； AS20500BDT 超声波清洗器（40 kHz、 240 W, 上海科导超声仪器有限公司）； UPT-Ⅱ-10T 优普特实验室超纯水机（成都超纯科技有限公司）； SP-20E 全自动点样仪（上海科哲生化科技有限公司）； WFH-201B 紫外投射反射仪（上海精科实业有限公司）； CX31RTSF 显微镜, 配置ScopePhoto 3.0 成像系统（日本奥林巴斯公司）。

1.2 试药 迷迭香酸 （批号111871-201505, 含有量98.5%）、 檀香油（批号110789-200005）、 甘氨酸（批号110735-200102）、 丙氨酸 （批号140680-201303, 含有量99.9%）、 木犀草素（批号111520-200504）、 齐墩果酸（批号110709-200505）、 芳樟醇（批号111503-201302, 含有量98.5%）、 香叶醇（批号111643-200301） 对照品及玫瑰花（批号121508-201403）、 檀香（批号121240-201002） 对照药材均购自中国食品药品检定研究院。 健心合米尔高滋斑安 比 热 片 （ 批 号 20140602、 20150301、 20150302、20150501、 20150502、 20150901、 20151001、 20151002、20151201、 20151202） 和方中药材（由新疆维吾尔自治区药物研究所何江研究员鉴定为正品） 均由和田维吾尔药业股份有限公司提供。 薄层层析用硅胶G、 硅胶GF254薄层板（青岛海洋化工有限公司）。 乙腈为色谱纯； 其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 定性鉴别

2.1.1 珍珠、 琥珀、 红宝石[2-3]本品粉末呈棕黄色, 取适量置于载玻片中央, 加水合氯醛试液1 滴, 解剖针搅匀并使其浸润粉末, 酒精灯上加热至微沸后离火, 再加水合氯醛试液1 滴, 解剖针搅匀, 再加热, 如此反复3 次, 离火, 加稀甘油1～2 滴, 搅匀, 盖片。 显微镜下发现, 珍珠为不规则形碎块, 半透明, 呈淡黄棕色, 边缘色较暗, 有光泽, 表面显颗粒性, 由数个至十数个薄层重叠, 片层结构排列紧密, 可见致密的成层线条或微波状纹理, 有的表面有裂纹, 小块片亦由多数薄片重叠[4], 见图1； 琥珀为不规则形结晶块, 透明或半透明, 呈淡黄色或红棕色, 大多为一边厚、 一边薄的斜块片, 富有立体感, 加热不熔化[5]； 红宝石为不规则形碎块, 透明或半透明, 呈灰白色,具明显放射状、 弧形或近平行的细纹理, 边缘色较暗, 棱角锐尖, 有光泽。

2.1.2 玫瑰花 取本品10 片, 除去糖衣, 研细, 取约3 g, 加25 mL 乙醇超声（59 kHz、 160 W） 20 min, 滤过,滤液蒸干, 残渣加1 mL 乙醇溶解, 作为供试品溶液； 另取对照药材1.0 g, 研细, 同法制成相应溶液。 按照2015 年版《中国药典》 薄层色谱法（通则0502）, 吸取上述溶液各3 μL, 点于同一硅胶G 薄层板上, 甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7 ∶5 ∶1） 预饱和15 min 后展开, 取出, 晾干, 喷以1%三氯化铁乙醇溶液, 显色后日光下检视, 结果见图2。 由图可知, 供试品色谱在与对照药材相应位置上显相同颜色斑点, 阴性无干扰[6-9]。

图1 珍珠、 琥珀、 红宝石显微图

图2 玫瑰花TLC 色谱图

2.1.3 檀香 取本品10 片, 除去糖衣, 研细, 取约3 g,加25 mL 石油醚超声处理（59 kHz、 160 W） 20 min, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加1 mL 石油醚溶解, 作为供试品溶液； 另取对照药材0.5 g, 同法制成相应溶液。 按照2015年版《中国药典》 薄层色谱法（通则0502）, 吸取上述溶液各10 μL, 点于同一硅胶G 薄层板上, 石油醚-乙酸乙酯（17 ∶3） 预饱和薄层板30 min 后展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯（365 nm） 下检视, 结果见图3。 由图可知, 供试品色谱在与对照药材相应位置上显相同颜色斑点, 阴性无干扰[8-9]。

图3 檀香TLC 色谱图

2.1.4 香青兰、 蚕茧、 龙涎香、 牛舌草 香青兰主要含有挥发油、 黄酮类、 氨基酸, 本实验以含有量较高的齐墩果酸、 木犀草素为对照进行TLC 鉴别, 发现两者阴性均有干扰, 见图4。 蚕茧主要成分为氨基酸, 本实验以含有量最高的甘氨酸、 丙氨酸为对照进行TLC 鉴别, 发现两者阴性均有干扰, 见图5。 龙涎香主要含有甾醇、 挥发性成分,本实验以含有量较高的芳樟醇、 香叶醇为对照进行TLC 鉴别, 发现两者阴性均有干扰, 见图6。 牛舌草主要含有皂苷、 黄酮、 氨基酸、 挥发油等成分, 本实验进行TLC 鉴别时发现它们阴性均有干扰[10-11], 见图7。

图4 香青兰TLC 色谱图

图5 蚕茧TLC 色谱图

图6 龙涎香TLC 色谱图

2.2 迷迭香酸含有量测定

2.2.1 溶液制备

2.2.1.1 对照品溶液 精密称取迷迭香酸对照品6.57 mg,置于25 mL 量瓶中, 流动相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制成每1 mL 含0.258 9 mg 该成分的溶液, 即得。

图7 牛舌草TLC 色谱图

2.2.1.2 供试品溶液 取本品20 片, 除去糖衣, 研细,精密称取约0.3 g, 置于具塞锥形瓶中, 加20 mL 流动相,称定质量, 超声（250 W、 40 kHz） 45 min, 放冷, 流动相补足减失的质量, 摇匀, 上清液滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.2 色谱条件 填充剂十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相乙腈-0.1%甲酸（18 ∶82）； 检测波长330 nm； 体积流量1 mL/min； 柱温30 ℃。

2.2.3 专属性试验 按处方比例称取缺牛舌草、 缺香青兰、 缺牛舌草花及缺牛舌草、 香青兰、 牛舌草花的药材,按照与制备工艺相同的方法制得阴性样品溶液, 同时制备对照品、 供试品溶液, 在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定, 结果见图8, 可知阴性无干扰, 方法专属性良好。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1.1” 项下对照品溶液0.2、 0.6、 0.8、 1.0、 1.4、 1.8 mL 至10 mL 量瓶中,流动相定容至刻度, 摇匀, 分别精密吸取10 μL, 在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定。 以溶液质量浓度为横坐标（X）, 峰面积为纵坐标（Y） 进行回归, 得方程为Y=366.73X+0.139 8 （r=0.999 2）, 在0.005 18 ～0.046 59 mg/mL 范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 取“2.2.1.1” 项下对照品溶液适量,在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定6 次, 测得迷迭香酸峰面积RSD 为0.26%, 表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验 取同一供试品（批号20150301）, 按“2.2.1.2” 项下方法平行制备6 份供试品溶液, 在“2.2.2”项色谱条件下进样测定, 测得迷迭香酸含有量RSD 为0.61%, 表明该方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品（批号20150301） 溶液, 10 ℃下于0、 2.5、 5、 7.5、 12.5、 24 h 在“2.2.2”项色谱条件下进样测定, 测得迷迭香酸峰面积RSD 为1.37%, 表明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.2.8 中间精密度试验 取同一供试品 （批号20150301）, 在不同日期经不同人员按“2.2.1.2” 项下方法制备2 份供试品溶液, 在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定5 次, 测得迷迭香酸含有量RSD 为1.42%, 表明该方法中间精密度良好。

2.2.9 加样回收率试验 精密称取含有量已知的供试品（批号20150301） 约0.15 g, 共6 份, 置于具塞锥形瓶中,精密加入对照品溶液1 mL, 按“2.2.1.2” 项下方法制备供试品溶液, 在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定, 计算回收率, 结果见表1。

图8 迷迭香酸HPLC 色谱图

表1 迷迭香酸加样回收率试验（n=6）

2.2.10 样品含有量测定 取本品适量, 按“2.2.1.2” 项下方法制备10 批供试品溶液, 在“2.2.2” 项色谱条件下进样测定, 计算迷迭香酸含有量, 结果分别为0.88、 0.89、0.89、 0.95、 0.96、 0.87、 0.87、 0.91、 0.98、 0.89 mg/片。由于实际生产过程中药材来源不同, 迷迭香酸含有量也会有所变化, 故在此基础上再下调20%, 即本品含有量以该成分计, 每片不得少于0.73 mg。

3 讨论

3.1 檀香TLC 定性鉴别 课题组前期曾参照2015 年版《中国药典》 一部方法[3], 提取药材中挥发油后进行点样,但该方法费时繁琐, 样品耗费量大。 本实验采用石油醚超声处理样品, 该方法简便快速, 斑点清晰, 阴性无干扰。

3.2 玫瑰花TLC 定性鉴别 玫瑰花中主要含有挥发油、黄酮、 鞣质, 故本实验分别采用乙醇、 50% 乙醇、 乙酸乙酯处理样品, 展开剂选择石油醚-乙酸乙酯（9 ∶1）、 甲醇-冰醋酸-水（8 ∶1 ∶3）、 甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7 ∶2 ∶1）等, 发现只有鞣质阴性无干扰, 可列入TLC 定性鉴别。

3.3 含有量测定 课题组前期考察了宝心艾维西木口服液, 发现其组方和功效与健心合米尔高滋斑安比热片极为相似, 均含有牛舌草、 香青兰、 檀香等药材, 并通过HPLC-MS 法初步推测其化学成分, 确定牛舌草、 香青兰中含有迷迭香酸。 迷迭香酸是存在于迷迭香中的水溶性多酚类成分, 具有抗氧化、 抗炎、 抗病毒、 抗血栓、 抗血小板聚集、 抗抑郁等多种生物活性, 与健心合米尔高滋斑安比热片主要功效一致, 而且含有量较高, 故以其为指标。 本实验发现, 牛舌草花、 牛舌草、 香青兰中都含有迷迭香酸,含有量分别为0.671%、 0.208%、 0.092%, 可为相关定量测定提供参考依据。

4 结论

健心合米尔高滋斑安比热片方中药材大多为新疆地产,具有较好的临床应用基础。 但《维吾尔药分册》 中所收载药材及制剂标准的研究水平整体上较低, 大多仅为药材基原鉴定或理化鉴别, 并未建立完善的质量控制体系, 导致长期以来药材品质不一致, 以次充好现象严重, 临床疗效不稳定, 制约了新疆地产中药、 民族药临床应用和市场开拓。 本实验改进了健心合米尔高滋斑安比热片质量标准,方法简便准确, 重复性好, 可为该制剂临床安全有效的应用提供理论依据。