耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋的影响

刘晓斌，马俊杰，王华民，李斌峰，马珍珍，郝少君，孙建华，张正臣

0 引言

耳复康口服液系我院院内制剂，组方由人参、红花、酸枣仁、骨碎补、路路通、石菖蒲、枸杞、麦冬等组成，临床应用效果良好。研究显示，耳复康口服液可改善肾上腺素致小鼠微循环障碍，对肾上腺素致急性血瘀症小鼠微循环障碍模型毛细血管开放数及血流情况有很好的改善作用，可改善庆大霉素致聋豚鼠的听力障碍[1-4]，而其对顺铂所致豚鼠耳聋是否存在保护作用，其机制如何，值得进一步研究。本文探讨耳复康口服液对顺铂所致豚鼠耳聋的影响，为耳复康口服液在临床上治疗耳鸣耳聋提供实验依据[5-7]。

1 实验材料

1.1 药品及试剂 耳复康口服液，由人参、红花、川芎、麝香、酸枣仁、石菖蒲、骨碎补、路路通、杞果、麦冬组成；功能主治：益气活血化瘀、醒脑通窍、祛风通络、滋阴潜阳。主要用于耳鸣、耳聋及气虚血瘀性中风；生产厂家：中国人民解放军第三七一医院；用法用量：口服，1～2支/次，3次/d；规格：10 ml/支；生产批号：20150706。耳聋左慈丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批准文号：国药准字Z11020011)。豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(苏州卡尔文生物科技有限公司，批号：20180101SR)，丙二醛(MDA)测试盒(苏州卡尔文生物科技有限公司，批号：20180101SR)。

1.2 仪器 耳声发射检测仪(河南迈松医用设备制造有限公司，注册证号：豫械注准字20152210139)；顺铂(齐鲁制药有限公司，批准文号：国药准字H37021358)。

1.3 动物 Hartley豚鼠，雌雄各半，级别：普通级，合格证编号：37009700000359，提供单位：济南金丰实验动物有限公司，许可证号：SCXK(鲁)20140006，实验动物使用许可证编号：SYXK(豫)2015-0005。

2 方法与结果

2.1 方法 将72只健康豚鼠随机分为空白组，模型组，阳性(耳聋左慈丸)组，耳复康大、中、小剂量组，每组12只，除空白组外，其余各组均给予腹腔注射顺铂注射液4 mg/kg，连续3 d。第4天采用ABR阈值测定对模型复制情况进行评价。造模成功后，除空白组及模型组外，耳聋左慈丸组给药剂量2.7 g/kg(相当于人临床剂量的9倍)，耳复康大、中、小剂量组给药剂量18、9、4.5 ml/kg(相当于人临床剂量的18、9、4.5倍)给予相应剂量灌胃给药，所有组别均每天灌胃给药，1次/d，各组灌胃均持续14 d。于末次给药后取豚鼠耳蜗。表观指标：听觉耳动反射；听力病理指标：耳蜗组织；生化指标：SOD、MDA。

2.2 结果 听觉耳动反射又称普赖厄反射，表现为耳廓竖起以应答刺激的声音。分别于造模后第3天、给药第14天，距豚鼠30 cm处用力击掌发出掌声作为刺激声，以此观察豚鼠耳廓竖起抖动情况。每次检测击掌5次，每次击掌间隔5 s，检测期间保持周围环境安静无明显杂音以保证检测不被影响。按照耳廓竖起抖动的强弱程度，将其强度分为4个等级：阴性(-)：耳廓完全无抖动，耳廓反射消失；弱阳性(+)：耳廓抖动微弱，耳廓反射阈值重度提高；中阳性(++)：耳廓抖动较明显，耳廓反射阈值轻度提高；强阳性(+++)：耳廓抖动非常明显，耳廓反射阈值几乎无变化。

2.2.1 耳复康口服液对顺铂所致豚鼠耳聋的影响 ①造模后第3天，各组对顺铂所致豚鼠耳聋的影响：各组给予顺铂注射液3 d后，采用听觉耳动反射(普赖厄反射)观察豚鼠耳廓竖起抖动情况，结果见表1。Ridit检验显示，与空白组比较，各组豚鼠耳廓抖动微弱(P<0.01)，说明造模成功。

表1 造模后第3天各组对顺铂所致豚鼠耳聋的影响

②给药第14天，各组对顺铂所致豚鼠耳聋的影响：各组给予顺铂注射液14 d后，采用听觉耳动反射(普赖厄反射)观察豚鼠耳廓竖起抖动情况，结果见表2。结果显示，经Ridit检验，与空白组相比，模型组动物耳廓反射显著减弱(P<0.01)，说明模型制作成功。给药14 d后，与模型组相比，阳性组和耳复康大、中、小剂量均可显著改善顺铂致豚鼠听觉耳动反射情况(P<0.01)。

表2 给药第14天各组对顺铂所致豚鼠耳聋的影响

2.2.2 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型TEOAE的影响 与空白组相比，模型组豚鼠总反应能量升高，说明模型制作成功(P<0.01)。与模型组相比，阳性组及耳复康大、中剂量组豚鼠听力总反应能量显著改善(P<0.01)，耳复康小剂量组豚鼠听力总反应能量明显改善(P<0.05)，见表3。

2.2.3 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型MDA、SOD的影响 与空白组相比，模型组SOD水平降低(P<0.01)，MDA水平升高(P<0.01)，说明模型制作成功。与模型组相比，阳性组及耳复康大、中剂量组SOD水平升高(P<0.01)，耳复康小剂量组SOD水平升高(P<0.05)；与模型组相比，阳性组、耳复康大剂量组MDA水平降低(P<0.01)，耳复康中、小剂量组MDA水平降低(P<0.05)，见表4。

2.2.4 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型耳蜗组织病理切片的影响 空白组：毛细胞胞核与细胞浆形态基本正常，未见病理改变；模型组：毛细胞胞浆空泡样变，个别细胞固缩；阳性组：毛细胞胞核饱满，无空泡样变性，毛细胞未见明显病理改变；耳复康大剂量组：毛细胞形态正常，未见病理改变；耳复康中剂量组：少量毛细胞胞浆空泡样变；耳复康小剂量组：少量毛细胞胞浆空泡样变，个别细胞固缩。见图1。

表3 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型TEOAE的影响

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

表4 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型MDA、SOD的影响

注：与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

图1 耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋模型耳蜗组织病理切片的影响(HE，400×)

3 讨论

顺铂是疗效显著的广谱化疗药之一，其不良反应较大[8-10]。对耳的毒副作用虽然出现较迟[11-13]，但目前没有较好的防治办法[14]，因此，探寻克服其耳毒性作用的方法至关重要。

随着年龄的增长，体内的氧代谢减慢，产生的自由基增多，过多的自由基损伤耳蜗细胞，造成听力的下降和逐渐消失。在抗氧化酶系统中，SOD是重要的一员，可以清除体内代谢产生的氧自由基，测定血清SOD活性，可以反映机体的自由基清除能力。测定耳蜗SOD活性，可以反映SOD对耳蜗的保护作用。MDA是氧化反应产生大量脂质过氧化物的重要产物之一，反映机体自由基的生成水平和组织损伤程度，常与SOD共同作为研究自由基的指标。

耳复康口服液由人参、红花、麝香、骨碎补、路路通等中药组成。诸药合用，具有益气、活血化瘀、醒脑通窍、祛风通络、滋阴潜阳的功效。肾中真阳真阴皆得补益，阳蒸阴化，肾气充盈，则耳聋自除。本研究结果显示，顺铂诱导豚鼠发生耳聋后，耳复康口服液的干预能够降低模型豚鼠的反应[15-18]。耳复康大、中、小剂量均可显著改善顺铂致豚鼠听觉耳动反射情况；3种剂量均可改善豚鼠听力总反应能量，升高血清SOD水平，降低MDA水平，改善耳蜗病理组织。

综上所述，耳复康口服液能改善豚鼠听觉耳动反射，降低血清中MDA水平，提高SOD水平，能改善耳蜗病理组织。初步认为耳复康口服液能对抗顺铂所致豚鼠耳聋的情况。

致谢：本实验在河南中医药大学苗明三教授指导下完成，特此致谢！