T-型钙离子通道、CA125及HE4在上皮性卵巢癌中检测探讨

单 峰 乔海风 刘曼华 周 峰 刘宏斌

江苏省南通市第一人民医院(226001)

作为一种常见的生殖系统恶性肿瘤，卵巢癌(OC)发病率呈逐年升高趋势，其中以上皮性卵巢癌(EOC)的发病占多数[1]。由于上皮性卵巢癌临床早期无典型症状，确诊时患者多已处于晚期，晚期患者的5年生存率较低，早期发现可有效提高患者生存率。T-型钙通道是钙离子通道家族的一员[2]，包括Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3 3种亚型，其中Cav3.1和Cav3.2目前研究较深入。联合糖类抗原125(CA125)水平增高与肿瘤的分期密切相关，在上皮性卵巢癌中高表达。人附睾蛋白4 (HE4)作为肿瘤标志物与CA125有着类似的敏感性，在恶性盆腔疾病的诊断中具有独特的优势。T-型钙离子通道、CA125及HE4三者联合检测在上皮性卵巢癌的研究较为少见。本课题拟探究检测T-型钙离子通道、CA125及HE4在上皮性卵巢癌的病变及预后的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性收集本院2011年1月—2012年12月经病理检查确诊为上皮性卵巢癌38例(癌症组)，确诊为良性卵巢肿瘤患者38例(良性组)，选择同期本院体检的健康女性38例(对照组)。患者年龄(39.2±3.9)岁(23～68岁)。均排除患有其他系统恶性肿瘤、神志不清、哺乳期或妊娠女性。在5年内定期对患者回访。本研究得到医院伦理委员会的批准，所有受试者均知情并同意本研究。

1.2 外周血CA125和HE4检测

收集3组受试者空腹外周血，加入100mmol/L的枸橼酸钠0.2ml，离心取上清，应用酶联免疫方法检测CA125(武汉默沙克生物科技有限公司)和HE4(上海酶联生物科技有限公司)。

1.3 卵巢组织的Cav3.1与Cav3.2表达

取癌症组和良性组患者卵巢组织行免疫组化分析。Cav3.1和Cav3.2位于细胞浆内，胞浆和(或)胞核中出现棕黄色至深棕黄色[3]。每张切片在5个随机的高倍视野中计数100 个细胞，染色强度按下列标准评分：无色为0分；染色弱(浅棕黄色)但明显强于阴性对照为1分；染色清晰(棕黄色)为2分；染色强(棕褐色)为3分。阳性细胞率≤25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为2分，>75%为3分；阳性细胞率>10%视为异常表达。将以上两项得分相加，0分判为“-”，1～2分判为“﹢”，3～4分判为“(﹢﹢)”，5～6分判为“(﹢﹢﹢)[6]。Cav3.1与Cav3.2抗体均购自美国Proteintech Group公司。

1.4 统计学方法

数据使用SPSS18.0软件进行分析，用χ2检验计数资料，用t检测计量资料，P<0.05表明有统计学差异。

2 结果

2.1 各组外周血中CA125与HE4表达水平比较

外周血中的CA125与HE4水平对照组<良性组<癌症组(P<0.05)，见表1。

表1 各组血中CA125与HE4水平比较

*与对照组比#与良性组比P<0.05

2.2 良性组与癌症组卵巢组织中T-型钙离子通道蛋白表达水平比较

T-型钙离子通道Cav3.1、Cav3.2蛋白在癌症组中的表达高于良性组 (P<0.05)，见图1和表2。

图1 良性组与癌症组卵巢中Cav3.1、av3.2表达(200)

表2 两组肿瘤患者卵巢中T-型钙离子通道蛋白表达水平比较[例(%)]

2.3 各组受试者5年生存率的对比

患者5年生存率，良性组均高于癌症组(P<0.05)，见表3。

表3 各组受试者5年生存率的对比(例)

*与良性组比 P<0.05

3 讨论

恶性肿瘤的发生是多种因素、分步骤共同作用，且漫长而又复杂的过程[7]。虽然从分子生物学角度了解到癌症发生的基因基础，但具体过程中会产生哪些蛋白质至今了解甚少。目前临床卵巢癌通常处于晚期，即使经过手术与放化疗，患者的生存率仍相对较低[8]。检测外周血中肿瘤标志物，是判断卵巢癌发生及分期的重要方法，寻找准确有效的标志物是当前研究的热点。目前有多种标志物可以用来检测上皮性卵巢癌的发生，本研究中选择CA125、HE4与T-型钙离子通道进行研究[9]。

CA125是目前临床普遍应用的一种肿瘤标志物[10]。对卵巢癌的病情监控作用得到临床肯定，但在早期诊断中的作用仍存在一定争议。CA125在卵巢癌早期患者中并不全部表现升高趋势，且在一些良性盆腔疾病、其他系统恶性肿瘤中表达水平也有升高，单独检测CA1125进行判断存在争议[11]。在本研究中，对照组CA125水平显著低于良性组和癌症组。

HE4是一种新发现的肿瘤标志物，被认为是附睾特异性的[12]。有研究表明[13]，HE4在上皮性卵巢癌中表达水平较健康人和良性盆腔疾病者高，对上皮性卵巢癌的诊断可能有一定作用。在本研究中，外周血中HE4水平癌症组高于对照组和良性组，说明HE4水平的升高与卵巢癌的发生有关。借助基因芯片研究发现[14]，HE4除了在附睾中表达，在近端器官上皮与生殖道、唾液腺中有高表达，而在健康的卵巢组织中表达水平极低，但在卵巢恶性肿瘤中表达上调，在其他系统的恶性肿瘤中表达水平极低甚至不表达，因此HE4具有上皮性卵巢癌的肿瘤标志物独特优势。通过cDNA的微阵列分析[15]，HE4对卵巢癌检测的敏感性与CA125相似，但特异性高于CA125，可作为卵巢癌肿瘤标志物，而联用CA125对卵巢癌诊断具有较好临床意义。此外，也有研究表明[13]，单独采用HE4检测的敏感度与准确性均高于CA125检测，说明在上皮性卵巢癌的诊断中，应用HE4具有很高的价值并能补充CA125的不足。

钙离子参与了机体多种生理活动，也是细胞内的第二信使[15]。以钙离子作为第二信使的信号通路广泛分布于机体内，钙通道表达变化直接或间接参与癌症的发生[16]。T型钙通道是钙离子通道家族的一员，具有激活快、失活快、去活慢、低电压激活的特性，凭借在细胞增殖中独特作用成为药物靶点研究的热点。T型钙通道在脊椎动物中有3种亚型，本研究选择其中Cav3.1，Cav3.2进行研究，良性组中Cav3.1与Cav3.2蛋白表达均低于良性组和癌症组。

综上所述，本研究应用3项指标检测评估上皮性卵巢癌诊断与愈后，为深入研究提供参考。由于标志物在肿瘤细胞中表达模式及病理类型差异，为临床诊断上皮性卵巢癌的预测、治疗、预后评估将发挥重要作用。