种公猪精液携带6种繁殖障碍性病原状况调查

杨永能

（云南省楚雄州动物疫病预防控制中心，云南楚雄 675000）

猪繁殖障碍性疾病的存在给各地养猪业带来了潜在的威胁和巨大的经济损失。随着养猪业的进一步发展，多病因的混合感染让猪繁殖障碍病因越来越复杂，防治越来越困难。当前，导致猪群发生繁殖障碍性疾病的病毒性疫病主要有：猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪瘟（CSF）、伪狂犬病（PR）、猪细小病毒病（PP）、猪乙型脑炎（JE）等。公猪精液中存在这些疫病的病毒会给养猪业造成潜在的威胁。

云南省楚雄彝族自治州位于滇中腹地，东靠昆明市、西接大理白族自治州、南临普洱市和玉溪市、北连四川省，土地面积2.84万平方千米。楚雄州下辖10县（市），分别为禄丰县、南华县、双柏县、姚安县、元谋县、武定县、永仁县、牟定县、大姚县和楚雄市，全州103个乡镇，2017年底全州常住人口达273.3万人。2017年楚雄州生猪存栏277.3万头，出栏377万头，畜禽肉类总产量43.99万吨；全州畜牧业总产值达114.91亿元，占农业总产值的37.15%。

楚雄州动物疫病预防控制中心2017年对猪群中的猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒抗体抽样检测，阳性率结果为：未检出猪瘟病毒，猪伪狂犬病毒32.51%、猪乙型脑炎病毒64.77%、猪细小病毒26.97%、猪圆环病毒64.38%。采集180份猪脾、肺组织样品进行猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒核酸进行监测，检出猪瘟病毒阳性样品2份、高致病性猪蓝耳病病毒阳性样品1份、猪圆环病毒2型阳性样品33份，未检出猪伪狂犬病毒，阳性率分别为1.11%、0.56%、18.33%和0。

楚雄州辖区内目前有164个猪的人工授精改良站、1 242个本交改良站，2017年完成33.61万胎猪的人工授精、15.62万胎猪的本交。对当地1 500户母猪养殖户的2 120头能繁母猪调查，发现受胎率为93.75%、平均窝产仔数为10.64头、产仔成活率为94.49%。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源

2017年8月至2018年2月对楚雄州10个县（市）分别选取5个对外猪精液供应站点，共50个种猪精液供应点，合计采集212份精液样品进行检测，分别是楚雄市56份、元谋县10份、大姚县20份、姚安县10份、武定县16份、南华县14份、永仁县16份、牟定县16份、禄丰县28份、双柏县26份。

1.1.2 试验仪器

试验过程中采用的仪器均由云南农业大学动物传染病实验室提供。

1.1.3 试验试剂

RNA提取试剂盒，6×Loading Buffer购自大连宝生物；Bioteke细胞/组织基因组DNA和RNA提取试剂盒购自百泰克生物技术有限公司；Easy First-Strand cDNA Super Mix、2×TransTaq HiFi PCR Super Mix，TransTaq DNA Polymerase High Fidelity购自北京全式金生物技术有限公司；异丙醇、75%乙醇、琼脂粉、TAE缓冲液、双蒸水、氯仿等由云南农业大学动物医学实验教学中心预防兽医学实验室提供。试验中所需的阳性对照选取了 PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、JEV、PPV疫苗，均由楚雄州动物疫病预防控制中心和云南农业大学动物医学院兽医传染病实验室提供。

1.1.4 PCR引物合成

PCR检测引物序列参照云南农业大学动物传染病实验室检测所使用的引物序列，由昆明硕擎生物科技有限公司合成。

1.2 试验方法

按照RNA和DNA提取试剂盒说明书提取精液中的RNA和DNA。采用RT-PCR和PCR法分别对提取的RNA和DNA进行目的基因片段扩增。取10 μL PCR扩增产物配制成体系后加样到1.5%琼脂糖凝胶（含0.2%EB）孔中，并在100 V电压下电泳40 min，在凝胶成像系统上观察结果，并拍照。

2 试验结果

2.1 种公猪精液中6种繁殖障碍性病毒病原检测结果

对来自云南楚雄州10县（市）的212份精液样品分别进行猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和猪乙型脑炎病毒（JEV）检测。结果显示，检测出PRRSV阳性样品16份，阳性率7.55%（16/212）；检测出CSFV阳性样品2份，阳性率0.94%（2/212）；检测出PCV-2阳性样品38份，阳性率17.92%（38/212）；检测出PRV阳性样品2份，阳性率0.94%（2/212）；未检测出PPV和JEV阳性样品（见表1）。

表1 6种繁殖障碍性病毒性病原检测统计结果

2.2 不同地区检测结果统计

由表2可知，大姚县采集的20份样品中检测出14份携带PCV-2，检出率为70%，检出率最高；元谋县的10份样品中检测出6份精液携带病毒（4份携带PCV-2、2份携带PRV），病毒检出率为60%，且是唯一检出PRV病毒的县；禄丰县的28份样品中检出16份携带PRRSV，病毒检出率为57.14%，为唯一检测出PRRSV的县；双柏县的26份样品中检测出4份携带病毒（2份携带CSFV、2份携带PCV-2），病毒检出率为15.38%，为唯一检测出CSFV的县；南华县的14份样品中检出8份携带PCV-2，病毒检出率为57.14%；武定县的16份样品中检出4份携带PCV-2，病毒检出率为25%；姚安县的10份样品中检出2份携带PCV-2，病毒检出率为20%；永仁县的16份样品中检出4份携带PCV-2，病毒检出率为25%；楚雄市的56份样品中均未检出携带病原；牟定县的16份样品中均未检出携带病原。在此次采集的所有样品中均未检出JEV和PPV（见表2）。

3 讨论与分析

3.1 PRRSV感染情况分析

从采集的212份样品中检测出PRRSV阳性样品16份，样品阳性率为7.55%。姜佳佳等[1]在2016年对广西地区15个中小规模种猪场公猪精液进行PRRSV检测，阳性率为48.39%。吴永刚[2]2013年对四川省6个地区猪场的126份公猪精液进行PRRSV检测，阳性率为11.9%。赵谦等[3]2016年对云南部分地区规模化猪场的212份种公猪精液进行PRRSV检测，阳性率为7.08%。对比可知，此次调查结果显示PRRSV阳性率属适中水平。但从地区分布来看，16份PRRSV阳性样品均来自禄丰县的精液样品中，占该地区样品数的57.14%；其他地区均未检出PRRSV。从地理位置可知，禄丰县是楚雄州连接云南昆明和四川的重要交通枢纽，生猪流通量较大，疫情情况较复杂。因此，需要加强禄丰县的疫情监测工作，加强种猪精液质量安全检测，及时淘汰携带PRRSV的种公猪，及时切断传染源是控制PRRS疫病传播和流行的重要措施。

表2 不同地区检测结果统计表

3.2 PCV-2感染情况分析

在212份猪精液样品中检测出PCV-2阳性样品38份，占所有样品数的17.92%，为所检测的6种病毒中阳性率最高的1种。姜佳佳等[1]对广西地区15个中小规模种猪场公猪精液进行PCV-2检测，阳性率为3.23%。吴永刚[2]对四川省6个地区猪场的126份公猪精液进行PCV-2检测，阳性率为2.38%。赵谦等[3]对云南部分地区规模化猪场的212份种公猪精液进行PCV-2检测，阳性率为6.6%，此次调查结果显示PCV-2阳性率（17.92%）处于较高水平。从区域分布来看，38份阳性样品分别来自元谋县、大姚县、姚安县、武定县、南华县、永仁县、双柏县等7个县，占楚雄州的70%。其中，大姚县和南华县PCV-2阳性率较高，分别为70%和57.14%。PCV-2在楚雄州阳性率较高且分布广泛。主要是PCV-2在我国大多数猪场广泛存在，致病率高，仅少部分猪表现临床症状，目前尚未引起政府和生产企业的高度重视，且PCV-2未被列入楚雄州重大动物疫病防治和监测范围。PCV-2可使猪群产生严重的免疫抑制，容易使感染猪并发或继发其他病毒性疾病；此外PCV-2可通过精液垂直传播，且断奶仔猪对PCV-2最易感。因此，加强对PCV-2的监测及防治，及时淘汰带毒种猪，切断传染源，开展PCV-2疫病净化，对进一步提高养殖企业生产效率尤为重要。

3.3 CSFV感染状况分析

212份精液中检测出CSFV阳性样品2份，占所有样品数的0.94%。姜佳佳等[1]对广西地区15个中小规模种猪场公猪精液进行CSFV检测，阳性率为16.94%。吴永刚[2]对四川省6个地区猪场的126份公猪精液进行CSFV检测，阳性率为3.17%。赵谦等[3]对云南部分地区规模化猪场的212份种公猪精液进行CSFV检测，阳性率为3.77%。从总体看，此次调查结果显示CSFV阳性率（0.94%）处于较低水平。从地区分布来看，2份CSFV阳性样品来自双柏县，占地区样品数的7.7%。其他地区均未检出CSFV。CSFV作为养猪业危害较大的动物传染病，政府将其作为重大动物疫病来监测和防治，但该病毒在养殖生产中依然零星存在，尤其在种公猪体内，且种公猪不表现出明显的临床症状，CSFV可通过精液传播，给该病的防治和根除增加了困难。加强CSFV的监测，加强供精站点精液质量安全监管，及时消除传染源，积极开展动物免疫，是根除该病的重要手段。

3.4 PRV感染状况分析

212份精液中检测出PRV阳性样品2份，占所有样品数的0.94%。姜佳佳等[1]对广西地区15个中小规模种猪场公猪精液进行PRV检测，阳性率为5.24%。吴永刚[2]对四川省6个地区猪场的126份公猪精液进行PRV检测，阳性率为3.17%。赵谦等[3]对云南部分地区规模化猪场的212份种公猪精液进行猪PRV检测，阳性率为3.3%。从总体看，此次调查结果显示PRV阳性率处于较低水平。从地区分布来看，2份PRV阳性样品来自元谋县，占地区样品数的20%。其他地区均未检出PRV。虽然PRV阳性率较低，但在种猪精液中依然存在，该病通过精液传播的风险较大，因此定期对猪群进行PRV疫苗免疫，全面开展PRV监测，及时淘汰阳性猪，能够有效地控制和根除该病。

3.5 不同地区感染状况分析

由调查结果可知，楚雄州种公猪精液病原检出率最高的地区为大姚县（20份样品中14份携带PCV-2），其次为元谋县（10份样品中6份携带病毒）。种公猪精液病原检出率最低的地区为楚雄市和牟定县，病原检出率均为0。通过实地调查及查阅各地畜牧科技推广相关资料可知，大姚县和元谋县的猪人工授精站点数量分布较少，且供精站点大多以小规模个体养殖户为主。楚雄市和牟定县均为楚雄州生猪存栏数量较大的县市，2地区猪人工授精站点分布较多，且供精站点多以中大规模生产企业为主，企业相互之间存在较强的市场竞争，精液品质直接影响企业效益。综上所述，生产企业的规模与种猪精液品质安全有一定关系，中大规模生产企业更注重种猪精液的品质安全，小规模个体户受制于生产技术和管理水平，种猪精液品质难以保障。一定区域内企业之间的市场竞争，有利于种猪精液品质的提高。