中草药对大肠杆菌的体外抑菌试验

董晓龙 孙 越 张立永 赵月平 李子平 刘海斌

1.华北理工大学药学院，河北唐山063210；2.河北北方学院牧业研究所，河北宣化075131

中草药含有丰富的维生素、矿物质以及皂苷、多糖、生物碱等成分，具有一定抗菌消炎作用，因此，生产绿色、安全、性能稳定的中药制剂来预防、治疗大肠杆菌疾病已是一种趋势。本试验选择单味中草药对大肠杆菌进行体外抑菌试验，以期为治疗大肠杆菌的中药制剂的配制提供理论参考。

1 材 料

1.1 中草药的选购

中草药黄芩、黄连、穿心莲、大青叶、厚朴、秦皮、金银花、白术、木香、甘草、黄芪、黄柏、茯苓、白芍、当归、马齿苋、鱼腥草、栀子、大黄、赤芍、白头翁、知母、苍术、葛根、石榴皮、板蓝根、蒲公英和苦参，均购自张家口医药公司。

1.2 试验菌株

坝上长尾鸡鸡源大肠杆菌株1 号（血清型O78）、2 号（血清型O41）、3 号（血清型O24）、4 号（血清型O1+O148）。

2 方 法

2.1 单味中药药敏片试纸条的制备

取黄芩、黄连、穿心莲、大青叶、厚朴、秦皮、金银花、白术、木香、甘草、黄芪、黄柏、茯苓、白芍、当归、马齿苋、鱼腥草、栀子、大黄、赤芍、白头翁、知母、苍术、葛根、石榴皮、板蓝根、蒲公英和苦参采用水煎煮法进行提取，制成含生药量为1 g/mL 的药敏片试纸条，4 ℃冰箱中保存备用。

2.2 培养基的制备

将60 ℃无菌麦康凯琼脂倒入无菌平皿中，制成平板，然后将平皿置121 ℃蒸汽高压20 min 灭菌，4 ℃冰箱中保存备用。

2.3 单味中药对大肠杆菌的体外抑制活性试验

取直径为0.5 cm 的灭菌滤纸片在单味中药的原药液中浸泡1 h，取出备用。在已制备好的平板中，用划线法分别将3 种菌株均匀涂在营养琼脂上，每种菌株涂14 个平皿，无菌操作放置制备的中药药敏纸片，每种中药药敏片贴3 片，每个平皿贴2 种中药药敏片，然后将平皿置37 ℃温箱中培养24 h 后测定抑菌圈的大小，取平均值。参照《微生物和检验技术》判定结果：抑菌圈直径＜10 mm 为钝敏、抑菌圈直径10～19 mm 为中敏、抑菌圈直径≥20 mm 为高敏。

3 结 果

28 种中草药对4 株大肠杆菌都具有不同的抑菌作用，其中黄柏、黄芪、赤芍、茯苓、苍术、白芍、木香、大黄、葛根、当归和栀子对O24菌株不敏感；秦皮、苦参、穿心莲、马齿苋和大青叶高敏；其他为中敏。黄芪、苍术、木香、大黄、当归和栀子对O41不敏感；秦皮、厚朴、黄芩、穿心莲、马齿苋、白头翁和大青叶高敏；其他为中敏。黄柏、黄芪、赤芍、茯苓、苍术、木香、大黄、葛根、当归、苍术、白芍、金银花和栀子对O78不敏感；黄连、秦皮、黄芩、马齿苋、白头翁、大青叶和鱼腥草高敏；其他为中敏。黄柏、黄芪、赤芍、茯苓、苍术、甘草、白芍、木香、大黄、当归、白术、蒲公英、栀子和知母对O1+O148不敏感；黄连、秦皮、穿心莲、马齿苋、大青叶和鱼腥草高敏；其他为中敏（表1）。

表1 中草药对大肠杆菌的体外抑菌圈的直径 mm

4 讨 论

体外抑菌结果表明，不同中草药对不同血清型的大肠杆菌菌株具有不同的抑菌效果，秦皮和马齿苋对O24菌株的抑菌活性最强，抑菌圈直径达到24.6 mm；马齿苋对O41和O78的抑菌活性最强，抑菌圈直径分别达到31.2、26.5 mm；黄连对O1+O148的抑菌活性最强，抑菌圈直径达到28.6 mm。

我国具有丰富的中草药资源，并有丰富的中药临床使用经验。其提炼的成分种类繁多，大都属于天然有机化合物，从结构上分有苯丙素类、黄酮类、生物碱类、萜类、脂肪类等。本试验中，不同的中草药对不同血清型菌株的抑菌活性与报道有所差异，可能与中草药成分的提取工艺有关，也有可能与高温、高压处理有关。同时，本课题组先前研究发现，中草药提取物的抑菌效果与菌株对抗生素耐药程度不一定成平行关系，这可能是由于中草药提取物含有多种成分，而各成分的活性强度各不相同，以及中草药提取物的抑菌机制与抗生素不同所致。通过对28 种中草药的体外抑菌试验，筛选出抑菌效果较好的中草药10 种，分别是秦皮、厚朴、黄芩、苦参、黄连、穿心莲、马齿苋、鱼腥草、白头翁和大青叶。