秦皮薄层鉴别方法的改进△

姜巧方，王小平，白吉庆

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

·基础研究·

秦皮薄层鉴别方法的改进△

姜巧方，王小平，白吉庆*

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

目的：对秦皮薄层鉴别的展开系统进行改进。方法：改进了原标准的展开系统，采用硅胶G板，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)为展开剂，置紫外光灯(365 nm)下检视秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素。结果：在供试品色谱中，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素斑点清晰，分离度好，重现性好。结论：该方法的展开系统减少了对环境的污染和对人体的伤害，可替代原标准用于秦皮的鉴别。

秦皮；薄层鉴别；秦皮甲素；秦皮乙素；秦皮素

秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树FraxinusrhynchophyllaHance、白蜡树FraxinuschinensisRoxb.、尖叶白蜡树FraxinusszaboanaLingelsh.或宿柱白蜡树Fraxinusstylosalingelsh.的干燥枝皮或干皮[1]。秦皮具有清热燥湿，收涩止痢，止带，明目之功能，用于治疗热痢，泄泻，赤白带下，目赤肿痛等症[2-3]。研究表明，秦皮具有抗炎、止痛、抗氧化和降低血尿酸等功能，治疗痛风效果极佳[3-4]。秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素是秦皮的主要有效成分，具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等作用[5-6]。《中华人民共和国药典》2010年版一部中以秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素3种成分作为秦皮定性鉴别的标识成分，采用硅胶G薄层色谱法，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)为展开剂，对秦皮进行鉴别，但由于展开剂中使用了毒性较大的三氯甲烷，对环境和人体有一定的危害[7]。本试验对秦皮薄层色谱鉴别的展开系统进行了改进，用二氯甲烷替代三氯甲烷，以减少对人体的危害和对环境的污染。通过研究，建立了一种较为理想的薄层鉴别展开系统，样品中所鉴别的成分斑点清晰，分离度好，重现性好。该方法可以替代原标准用于秦皮的鉴别。

1 仪器与材料

1.1 仪器

200 g多功能粉碎机(上海树立仪表有限公司)；BT125D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司，d=0.1 mg；d=0.01 mg)；2F-90多功能暗箱式紫外透射仪(上海宝山顾材电光仪器厂)；HH-2A型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)。

1.2 试药

秦皮甲素对照品、秦皮乙素对照品、秦皮素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为0740-200104，110741-200506，111731-200501)；甲酸、甲醇、三氯甲烷等均为分析纯；秦皮药材经陕西中医学院白吉庆副教授鉴定为苦枥白蜡树FraxinusrhynchophyllaHance、白蜡树FraxinuschinensisRoxb.的干燥枝皮或干皮。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 供试品溶液的制备 取秦皮粉末1 g，置圆底烧瓶中，加入甲醇10 mL，置水浴加热回流10 min，取出，放冷，滤过，滤液置蒸发皿中，于水浴上挥干，残渣加入5 mL甲醇溶解，即得供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素对照品适量，置于量瓶中，分别加甲醇溶解，并以甲醇稀释至刻度，制成质量浓度分别为0.115、0.98、0.18 mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液

2.2 结果

2.2.1 改进方法 吸取上述3种对照品溶液各2 μL和供试品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶>0.5∶>0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果见图1。

注：1、2、6、7：秦皮供试品；3.秦皮甲素对照品；4.秦皮乙素对照品；5.秦皮素对照品。下同。图1 秦皮薄层色谱鉴别(改进方法)

2.2.2 原方法 照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录薄层色谱法试验[8]，吸取上述3种对照品溶液各2 μL和供试品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶>1∶>0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外光灯(365 nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果见图2。

图2 秦皮薄层色谱鉴别(2010版药典方法)

3 讨论

温度和湿度也是薄层色谱鉴别的影响因素，本试验对展开环境的温度进行考察，结果在15～25 ℃，供试品色谱中主要斑点的分离度较好。同时对展开环境的相对湿度进行考察，分别考察了相对湿度为20%、30%、60%、75%，结果在20%～60%，供试品色谱中主要斑点的分离度较好。

本试验对不同来源的秦皮和同一来源不同产地的秦皮，用改进后展开系统进行了鉴别，结果显示，均能鉴别出秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素，只是不同基源、不同产地的秦皮中，秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素斑点的大小和颜色的深浅略有不同，说明基源和产地对秦皮中的主要成分秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的含量有一定的影响。

原标准秦皮薄层鉴别中使用三氯甲烷为展开剂的主要组分，该试剂毒性较大。而本试验通过研究用毒性较小的二氯甲烷代替三氯甲烷，不仅不会影响秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素的鉴别，而且还会减少对人体的危害和对环境的污染。采用改进后的TLC 鉴别方法鉴别秦皮中的秦皮甲素、秦皮乙素和秦皮素，方法简单，专属性强，重复性好，可替代原标准用于秦皮的鉴别。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：254.

[2] 付珊.秦皮质量控制方法研究[D].石家庄：河北医科大学，2014.

[3] 张林，张梦琪，傅延龄.秦皮历代临床用量分析[J].中药材，2014，55(22)：1957-1960.

[4] 翁远超，刘静雯，崔璨.秦皮中化学成分的分离鉴定及其体外抑菌活性[J].西北国防医学杂志，2012，24(1)：40-47.

[5] 刘爽，谢鲲鹏，邹丹.秦皮素对大肠埃希菌作用机制的初步研究[J].中国微生态学杂志，2014，26(10)：1123-1126.

[6] 向小四.秦皮甲素提取纯化工艺及降尿酸作用研究[D].长沙：中南大学.2013.

[7] 王海兰.三氯甲烷的职业危害与防护[J].现代职业安全，2014，(5)：110-112.

[8] 罗进斌，林惠芬，黄方取.一起急性三氯甲烷中毒事故的调查[J].环境与职业医学，2014，31(6)：462-466.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录34-35.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFraxiniCortex

JIANGQiaofang，WANGXiaoping，BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM，Xianyang712046，Shaanxi，China)

Objective：To improve the TLC identification method of Fraxini CortexMethods：TLC developing system of the original quality standard was improved.Using silica gel G thin layer plate，aesculin，aesculetin and fraxetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(7∶>0.5∶>0.5)，and detected under the uv lamp(365 nm).Results：In the chromatogram，the spots of aesculin，aesculetin and fraxetin were clear.The method was repeatable．Conclusion：The method is simple and environment friendly，could replace the original standard to identify Fraxini Cortex.

Fraxini Cortex；TLC；aesculin；aesculetin；fraxetin

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.008

2015-01-28)

陕西省中医药管理局科研项目(13-ZY049)

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白吉庆，副教授，硕士生导师，研究方向：中药资源开发与利用；Email：baijiqing323@126.com