瑶族抗癫痫药物皮肤不良反应患者的HLA-B*1502基因分析及其护理策略研究

成丽英

广东省连南瑶族自治县人民医院，广东连南 513300

人类白细胞抗原B基因（HLA-B）被认为是最复杂的遗产性多态性系统，随着医疗技术的不断发展，有关研究表明引起移植物排斥反应的主要抗原为异体HLA，自身HLA可以激发T细胞分化发育、免疫应答[1]。HLA-B是属于hLA- I类抗原中的一类，其编码基因位于人类第6号染色体的区域内，通过糖蛋白的形式，在大多数有核细胞的膜表面表达[2]。HLA在不同民族、不同人种的分布存在差异，我院选取100名广东瑶族人采用测序技术对人类白细胞抗原B基因进行研究，探究广东瑶族人群HLA-B基因多态性研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2017年6月～2018年8月我院4例服用抗癫痫药物后出现皮肤不良反应的瑶族癫痫患者，年龄29～80岁，平均（52.2±2.6）岁；男3例，女1例；所有患者均告知相关事项并知情同意，留取其抗凝血2mL，进行HLA-B*1502基因检测。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 试验仪器 全血人基因组核酸提取纯化采用Lab-Aid 824核酸提取仪及其配套的Lab-Aid 824核酸提取Mini试剂盒，两者均由厦门致善生物科技股份有限公司提供[4]；NanoDrop 2000 超微量紫外分光光度计由美国Thermo公司提供；“人类白细胞抗原 B 位点 1502 基因检测试剂盒”由台湾世基生物医学股份有限公司提供；CFX-96荧光定量PCR仪由美国Bio-Rad公司提供。

1.2.2 HLA-B*1502基因检测 采用Lab-Aid 824核酸提取仪进行全血DNA提取，用NanoDrop 2000超微量紫外分光光度计进行DNA浓度及纯度分析，确保DNA含量＞10ng/μL，OD260/280在1.8～2.0。所提取的DNA如非当日使用，置于-20℃保存；使用完毕后剩余的DNA保存于-80℃备查。

每一样本同时进行内部质控及样本检测两个独立的PCR反应，其配置如下。内部质控： PCR混合液12.5μL +内部控制基因混合液2.5μL +去核酸纯水8μL +待测DNA2μL；标本检测：PCR混合液12.5μL +PG1502混合液2.5μL +去核酸纯水8μL+待测DNA2μL。加好的PCR管瞬时离心后转移至CFX-96荧光定量PCR仪上按以下条件进行扩增：95℃ 10min预变性，然后按95℃ 15秒 →71℃ 60秒35循环进行扩增；荧光通道设置为SYBR，荧光信号收集设置在71℃ 60秒结束时。结果判读：内部质控管CT值≤27，标本检测管CT值≤35，且标本检测管CT值-内部质控管CT值≤7时，判读为1502阳性；而标本检测管CT值-内部质控管CT值＞7时，或标本检测管CT值＞35时，则判读为1502阴性。

选择检测呈现阳性患者采取针对型护理的具体方案包括，由我院选取3～4名有丰富临床经验的护士组成医疗小组，对患者的病情状况进行分析，同时制定优质的护理方案。（1）对于皮疹较重、伴有发热等症状者应卧床休息。关注患者饮食，避免辛辣刺激性食物。密切关注患者的生命体征、皮疹变化、数量、部位等。（2）病室保证清洁，定时通风，对空气消毒。叮嘱患者保持皮肤清洁，每日用温水轻擦皮肤，禁用肥皂水、酒精等物质。（3）若患者皮肤痛痒，应避免搔抓，进而造成的皮肤感染。若患者皮肤剧痒，可涂5%碳酸氢钠或炉甘石洗剂等进行缓解。（4）当皮肤结痂后，保证其自行脱落，不要强行撕脱，翘起的痂皮使用消毒剪刀剪去。（5）有系统的组织研究组患者开设有关疾病的健康知识讲座，讲座开设的时间从在院期间到出院后，对患者进行长时间的宣教，耐心解决患者的相关疑问[9]。

1.3 观察指标

调查统计562例广东瑶族志愿者的HLA-B等位基因频率分布。统计分析广东瑶族人的HLA-B基因频率与抗原频率的分布之间的关系。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS20.0进行分析，其中计数资料进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HLA-B等位基因中基因数以及抗原数最多的为B*1401（P＜0.05），其他基因中的基因频率与抗原频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 HLA-B基因频率与抗原频率的分布

3 讨论

人类白细胞抗原（HLA）位于第6染色体短臂上，属于HLA基因复合体的编码产物。HLA为重要抗原物质，起到构成移植排斥反应的作用，其本质属于人类组织复合体的表达产物[10]。HLA的研究与器官移植的发展有直接关系，因此人类白细胞抗原又称移植抗原[11]。

HLA在临床上的主要作用为器官移植、输血、疾病的诊断等三个方面，HLA在器官移植中主要对脏器或骨髓移植起作用，为成功进行移植选择相对应的的供、受者[14-15]。在肾移植中，供受双方共有的DR错配抗原数的多少，决定了移植存活率的高低[16]。在疾病诊断方面HLA可以对某些与遗传因素相关的疾病进行筛选，HLA与免疫病理学具有联系，对T细胞表面进行抗原鉴定。通过HLA之间的配对，与相互作用的免疫效应细胞之间构成通讯等，扩展HLA在生物学方面的应用，如感染、自身免疫、移植物抗肿瘤等的抗原识别等[17]。本研究中，对检测呈现阳性患者采取针对型护理，选择专门的护理人员，对其制定专门的护理方案，研究结果表明，患者的康复状况得到显著改善。4例患者中，HLA-B*1502基因检测结果为阳性的有1例，阴性的为3例。采取针对型的护理措施后，HLAB*1502基因阳性与阴性的患者间，其护理效果比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

对HLA位点的数据进行统计分析时，临床上多选择采用血清学方法。HLA编码系统中的B位点是最复杂，且多态性最多的部分。B位点的高变区以及各等位基因的差异主要体现在几个碱基的排序之间，且某些等位基因的特别高变区具有自身独特的碱基序列，因而该部位交叉反应较多[18]。因血清学中B位点通常会出现错检、漏检或定型困难等各类问题，本研究的DNA的来源主要为：从血液中提取出的，此类DNA的特点为含有人类遗传信息的，化学性质较为稳定。通过利用序列特异性引物聚合酶的链反应，对目的带进行特异性扩增，进而得到位点分型[19]。本研究采用的PCR SSP方法，被称为照相分型，该方法具有重复性良好、准确性高的优势。有关研究表明，采用该方法进行实验以DNA为基础的11428例HLA-B分型的错误率较低且仅为1.9%。HLA为同种异体抗原，具有高度多态性，其化学本质为一类糖蛋白，它的组成为一条被糖基化的α重链和一条β轻链[20]。本研究中，对比广东地区HLA-B基因频率与抗原频率的分布，研究结果表明，HLA-B等位基因中基因数以及抗原数最多的为B*1401（P＜0.05），其他基因中的基因频率与抗原频率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HLA-B *1401的基因分布频率与抗原频率分别为0.0106、0.1011，其他基因中的基因频率与抗原频率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HLA-B*071的抗原频率与基因频率最少分别为0.0001、0.0001。

综上所述，采用测序技术对用药出现不良反应的广东瑶族人群HLA-B基因进行研究，采用针对型护理方案，有效地缓解患者的不良反应，为遗传学以及相关研究提供资料。