上皮性卵巢癌PET/CT标准摄取值与增殖细胞核抗原蛋白及预后的关系

刘春喜 姚 丽 马 莉

河南省郑州人民医院(450000)

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，而上皮性卵巢癌(EOC)细胞主要来自卵巢表面与从表面上皮内陷至卵巢内的腺管和囊肿上皮组织，其发病率呈逐年上升的趋势[1]。由于EOC病因隐匿且早期症状不明显，大部分患者就诊时已处于肿瘤晚期，因而需提高早期诊断及预后的敏感性与特异性。病理学研究证实18氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)PEF/CT作为一种新型影像学技术，在肿瘤的疗效评估、肿瘤分期及诊断方面得到广泛应用[2]。对EOC的诊断、分期及疗效评价中发挥重要作用[3]。增殖细胞核抗原(PCNA)作为癌细胞的增殖活性标志物，其表达水平与癌症的病情发展密切相关[4]。关于PEF/CT与PCNA蛋白表达的研究鲜见报道。本研究主要分析EOC 行PEF诊断的最大标准摄取值(SUVmax)与PCNA蛋白表达及患者预后关系，为临床诊断与预后评估提供新的临床依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年7月—2015年3月于本院诊治的上皮性卵巢肿瘤患者137例，其中上皮性卵巢癌72例为EOC组，良性上皮性卵巢肿瘤65例为对照组。EOC组年龄(50.5±5.6)岁(20～75岁)，对照组年龄(51.3±7.4)岁(21～73岁)。两组年龄比较无差异(P>0.05)。收集两组患者临床资料包括病理类型、FIGO分期、组织分化程度等，根据2000年国际妇产联盟FIGO分期标准[5]分为Ⅰ期 20例、Ⅱ期 24例、Ⅲ期 17例、Ⅳ期 11例；病理类型为浆液性 41例、其他类型31例；组织分化程度为高分化 15例、中分化 21例、低分化36例。纳入标准：①上皮性卵巢癌患者均经手术病理证实；②未接受放化疗或激素治疗者；③患者知情且签署同意书。排除标准：①合并心脏疾病、；②肝肾功能性严重损伤、；③合并其他恶性肿瘤；④临床资料不全。

1.2 检测方法

1.2.1主要试剂与仪器鼠抗人PCNA单克隆抗体(稀释浓度1:50)购自美国Santa Cruz公司，Elivision Plus(EP)试剂盒与DAB显色试剂盒购自基因科技(上海)有限公司，SIEMENS BIOGRAPHY 16 SENSATION显像仪购自德国。

1.2.2PCNA蛋白表达检测将冻存的上皮性卵巢癌组织标本用10%甲醛液固定并石蜡包埋，5 μm连续切片。采用免疫组化(EP)法操作：①将切片在乙醇不同浓度梯度中处理并PBS洗涤3次，每次5 min；②3%过氧化氢孵育5 min，PBS洗涤3次；③加入一抗，置室温孵育2 h；④滴加二抗，室温孵育1 h；⑤PBS清洗后加入DAB显色液显色；⑥苏木素复染，经蒸馏水冲洗后置于1%盐酸中5s后清洗；⑦中性树脂封片，置显微镜下观察。根据测量结果计算阳性指数(PI)=阳性灰度值×阳性反应面积/测定面积，取平均值，PI值越高表明病情严重程度越高[6]。

1.2.3免疫组化结果判定将所有切片均在400倍显微镜下观察，随机取5个视野统计[7]。根据染色程度计数：未显色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按照阳性细胞数目：<10%为0分，10%～25%为1分，25%～50%为2分，≥50%为3分。取两组计分乘积：≤2为阴性，>2分为阳性。

1.3 18F-FDG PEF/CT全身成像

检查前所有患者均禁食水6 h以上，血糖(3.10～6.66) mmol/L。患者平静状态下按5.5 MBq/kg静脉注射显影剂，静卧40～60 min后排空膀胱做PEF/CT全身显影。CT扫描时背景为100 mA电流，120 kV电压，5 mm扫描厚度；PET扫描背景为，收集PET图像采用三维模式于相同范围并按6～7个床位采集，每个床位扫描3min。采用目测定性分析及半定量分析全部CT、PET与PEF/CT图像，观察病灶显影剂摄取情况，将高于周围组织定为阳性，应用计算机计算SUVmax。

1.4 随访

对EOC组患者进行肿瘤门诊或电话随访3年，统计患者总生存时间即患者初次治疗结束至因疾病死亡时间或至随访截止时间。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 SUVmax值、PCNA蛋白表达及PI值

SUVmax值EOC组(8.28±1.24)高于对照组(4.23±0.35)(t=25.426，P=0.000)；免疫组化结果显示PCNA主要表达于细胞核，染色呈黄色、棕黄色、棕褐色；PCNA蛋白表达率(76.4%，55/72)及其PI值(62.45±15.47)高于对照组(35.4%，23/66)(42.34±12.05)(χ2=23.425，t=8.423,P=0.000)。

2.2 SUVmax值、PCNA蛋白表达与患者临床病理参数的关系

观察并比较SUVmax值、PCNA蛋白表达与患者临床病理参数的关系，结果显示SUVmax值与FIGO分期、组织分化程度有关，PCNA蛋白表达与病理类型、组织分化程度有关(P<0.05)，见表1。

表1 不同临床病理参数患者SUVmax、PCNA蛋白表达比较

2.3 EOC组SUVmax值与PCNA蛋白表达

Pearson法分析上皮性卵巢癌PCNA蛋白的PI值与SUVmax值呈正相关(r=0.627,P=0.000)，见图1。

2.4 SUVmax值、PCNA蛋白表达与EOC组预后

检测SUVmax值中位值为6.23±1.04，将大于中位值作为阳性组，小于中位值作为阴性组，应用Kaplan-Meier生存分析SUVmax值、PCNA蛋白表达水平与EOC组预后的相关性。结果显示SUVmax值阴性组总生存率(40.1%)高于阳性组(20.3%)，PCNA蛋白阴性表达组(41.1%)总生存率高于阳性表达组(23.2%)(P<0.05)。见图2。

图1 EOC组SUVmax值与PCNA蛋白表达的相关性分析

图2 SUVmax、PCNA蛋白表达与EOC组患者预后关系

2.5 上皮性卵巢癌预后因素

COX比例风险回归模式单因素分析结果显示，SUVmax值、PCNA、组织分化程度与EOC组患者总生存时间相关(P<0.05)，见表2。进一步应用COX比例风险回归模式进行多因素分析，结果显示组织分化程度、SUVmax值、PCNA均是影响上皮性卵巢癌患者总生存预后的独立危险因素，见表3。

表2 影响上皮性卵巢癌总生存单因素分析

表3 影响上皮性卵巢癌总生存多因素分析

3 讨论

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，上皮性卵巢癌是卵巢癌最主要的组织学类型[8]。以往研究表明，EOC来源于卵巢表面上皮并通过形成皮质包涵囊肿而发生转化，形成肿瘤或者由小囊肿增大代替周围卵巢组织并形成类似卵巢的原发性肿瘤[9]。早期诊断、准确分期并及时进行疗效评价对疾病治疗与预测预后均具有重要意义。目前临床主要采用手术辅以化疗治疗手段，但大部分患者的治疗效果不佳且预后较差[10]。因此，早期准确诊断EOC发生对提高治疗效果与改善患者预后具有重要价值。

PCNA蛋白是一种酸性蛋白在DNA合成与增殖过程中发挥重要调节作用[11]。PCNA表达量变化趋势与DNA合成一致，表达量可作为细胞增殖状态的重要检测指标[12]。相关研究发现，肿瘤组织高表达PCNA蛋白可表明癌组织处于高度增殖状态，并与肿瘤细胞增殖分化及浸润深度相关[13]。关于PCNA在EOC发生过程的相关性研究尚未见报道。本研究免疫组化法检测，EOC组PCNA阳性表达率与PI值均高于对照组，说明EOC癌组织中PCNA呈高表达，提示PCNA表达升高可能参与了EOC癌细胞的恶性转化过程；PCNA蛋白表达与病理类型、组织分化程度有关，说明PCNA可反映EOC病情进展并可作为反映癌细胞增殖活动的重要指标。EOC转移途径包括局部直接蔓延、淋巴道转移等，且部分病灶沿肠管壁生长，由于这些小病灶具有难辨别、分布广、位置移动等特点，普通影学检查很难发现或低估病灶范围。有研究表明，EOC癌细胞存在FDG高代谢且18F-FDG PEF/CT在卵巢癌的诊断、分期、疗效评价中发挥重要作用[14]。本研究采用PEF/CT对上皮性卵巢肿瘤患者进行检查并得到SUVmax值，EOC组患者SUVmax值高于对照组，且随着FIGO分期与组织分化程度的变化SUVmax值发生显著改变，说明SUVmax值升高可反映EOC肿瘤的恶性程度、增殖能力及癌细胞分化程度。

18F-FDG作为一种葡萄糖类似物在引入体内后可被细胞摄取并产生示踪作用，研究表明肿瘤组织耗能增加与局部缺氧均可导致糖酵解增加，常以SUV衡量病灶部位18F-FDG摄取程度进而判断病情进展[15]。18F-FDG PEF/CT是通过肿瘤对18F-FDG摄取的程度进行功能成像。目前在EOC诊断中，掌握肿瘤细胞增殖水平、微血管密度等对确定治疗方案具有重要意义。有研究发现，PEF/CT可有效反映肿瘤代谢和功能等特征，且具有极高的诊断性能和临床应用价值[16]。相关报道指出，PCNA在慢性炎症、感染性疾病等疾病中表达水平明显升高，结合临床症状及影像学检查，可为早期诊断疾病发生提供检测依据[17]。关于上皮性卵巢肿瘤中PEF/CT与PCNA表达的相关研究报道较少，本研究将PEF/CT SUVmax值与PCNA PI值进行相关性分析，结果显示SUVmax值与PCNA蛋白表达呈显著正相关，提示EOC患者PCNA表达与肿瘤的恶性程度有关，可作为早期诊断与复查的参考指标。同时本研究分析SUVmax、PCNA蛋白表达水平与EOC患者总生存时间的相关性，结果显示SUVmax阴性组及PCNA蛋白阴性表达组总生存率均高于阳性组，两项指标均是影响EOC患者总生存预后的独立危险因素，说明PEF/CT与PCNA可有效监测EOC患者预后情况。

综上所述，本研究结果揭示了EOC患者的预后与PEF/CT的SUV值、PCNA蛋白表达水平密切相关，两指标均可反映肿瘤恶性程度及癌细胞增殖、分化程度。二者在EOC预后判断及早期诊疗中可发挥重要作用。