乙型肝炎病毒感染患者T细胞和白细胞介素-6水平的表达及临床意义*

李艳芳，杨雪梅，袁 媛

成都医学院第一附属医院 感染科(成都 610500)

乙型肝炎病毒(HBV)感染是引发多种肝脏疾病的重要因素[1]。资料[2-3]显示，HBV并不直接损伤肝细胞，而是经诱发免疫反应的路径间接导致肝细胞损伤。研究[4]证明，在HBV导致肝细胞损伤过程中，T细胞为细胞免疫的重要组成，可有效清除HBV病毒，在避免机体感染HBV过程中具有重要作用。细胞因子为进行免疫应答、参与免疫调节的生物活性蛋白[5]。研究[6]发现，白细胞介素-6(IL-6)可促进生成多种炎性介质，导致肝细胞损伤，诱发HBV感染并促进其进展。但目前缺乏HBV感染者机体T细胞、IL-6水平改变及关系的相关研究。因此，成都医学院第一附属医院针对HBV感染者展开相关研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2014年1月至2017年6月入住我院的HBV感染者286例。纳入标准：1)经病毒检测确诊为HBV感染，且符合相关诊断标准[7]者；2)知情同意者。排除标准：1)近12个月内有抗病毒治疗史者；2)合并其他肝炎患者；3)合并其他病毒感染者；4)近1年应用免疫治疗及免疫功能异常患者。本研究经医院伦理委员会同意。纳入同期体检健康者60例为对照组，按照感染程度分为急性组、慢性组、乙肝肝硬化组，各组基线资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

表1 各组基线资料比较

1.2 方法

1.2.1 血液标本采集 分别采集两组清晨空腹静脉血8 mL，取4 mL加入抗凝试管，检测T细胞；各取2 mL分别加入普通试管以检测HBV-DNA、IL-6。

1.2.2 T细胞检测 将上述血液加入三色单克隆抗体20 μL后混匀，于避光、恒温(4 °C)下静置10 min，以流式细胞仪检测T细胞分布。

1.2.3 定量检测HBV-DNA 取上述血液离心10 min，分离血清，以实时荧光定量PCR法检测HBV感染者HBV-DNA载量。阳性：≥103copy/mL,低载量组：103～104copy/mL，中载量组：104～105copy/mL，高载量组：>105copy/mL；阴性组：<103copy/mL。

1.2.4 IL-6检测 取上述血液离心，4 000 r/min，离心半径6 cm，离心10 min，分离血清，血清IL-6以酶联免疫吸附法检测。

1.3 观察指标

观察不同疾病谱HBV感染者、HBV-DNA载量不同HBV感染者的IL-6与T细胞分布，及其与HBV-DNA载量的关系。

1.4 统计学方法

以SPSS 23.0统计学软件进行统计学分析。定性资料以例数(%)表示，采用秩和检验(等级数据)或2检验(常规数据)。定量资料以均数±标准差表示，多组数据比较采用单因素方差分析，两组比较行LSD-t检验。采用Pearson相关分析HBV感染者T细胞、HBV-DNA载量与IL-6的相关性。检验水准α除特殊说明外均设定为0.05。

2 结果

2.1 各组T细胞分布

各组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+整体及组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。急性组、慢性组、乙肝肝硬化组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+低于对照组，CD8+高于对照组(P<0.05)，感染越严重，CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+越低，CD8+越高，各组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比较，差异有统计学意义((P<0.05)(表2)。

表2 各组感染者T细胞分布

注：与对照组比较，*P<0.05；与急性组比较，#P<0.05；与慢性组比较，△P<0.05

2.2 各组HBV-DNA载量及IL-6水平比较

各组HBV-DNA载量以及IL-6比较，差异有统计学意义(P<0.05)，疾病越严重HBV-DNA载量及IL-6水平越高(表3)。

2.3 不同HBV-DNA载量HBV感染者T细胞分布

低载量组、中载量组、高载量组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+较阴性组低，CD8+较阴性组高(P<0.05)；随HBV-DNA载量增加，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+逐渐降低，CD8+逐渐升高，各组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比较，差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。

表3 各组HBV-DNA载量及IL-6水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与急性组比较，#P<0.05；与慢性组比较，△P<0.05

表4 不同HBV-DNA载量HBV感染者T细胞分布

注：与阴性组比较，*P<0.05；与低载量组比较，#P<0.05；与中载量组比较，△P<0.05

2.4 不同HBV-DNA载量HBV感染者IL-6水平比较

低载量组、中载量组、高载量组IL-6较阴性组高(P<0.05)；随HBV-DNA载量增加，IL-6逐渐升高，各组IL-6比较，差异有统计学意义(P<0.05)(表5)。

组别nIL-6阴性组6053.34±5.40低载量组8082.31±8.32∗中载量组133190.52±21.77∗#高载量组73238.11±24.28∗#△F1 738.732P<0.001

注：与阴性组比较，*P<0.05；与低载量组比较，#P<0.05；与中载量组比较，△P<0.05

2.5 HBV感染者T细胞、HBV-DNA载量与IL-6的相关性

经Pearson相关分析，HBV感染者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、HBV-DNA载量与IL-6呈正相关(r=0.483、0.552、0.631、0.587，P=0.008、<0.001、<0.001、<0.001)，IL-6与CD8+呈负相关(r=-0.493，P=0.007)。

3 讨论

HBV为双链DNA病毒，对人体肝脏有亲和性[8]。当机体感染HBV后会启动免疫应答，以清除进入体内的HBV[9]。研究[10]表明，肝细胞与机体免疫细胞、病毒的相互作用是导致乙型肝炎预后不同的关键。目前，尚不明确HBV导致免疫功能改变的机制。通常研究[11]认为，抗HBV过程中，细胞免疫和体液免疫均发挥重要作用，其中，细胞免疫较体液免疫清除HBV的能力更强。在免疫应答过程中，不同种类的T细胞相互作用，共同发挥清除病毒的作用[12]。IL-6由上皮细胞和淋巴细胞生成并分泌，参与免疫反应[13]。近年来研究[14]发现，IL-6可以通过激活多种信号通路促进细胞释放炎症介质，并产生级联放大效应，导致肝功能受损，促进HBV感染。IL-6可经复合物p-STAT3-HNF-3和HBV Enh1共同作用路径促进HBV再激活[15]。IL-6也可提高部分信号通道活性，激活HBV增强子1，干预表达HBX及HBV复制[16]。IL-6具有细胞毒性，可导致免疫损伤，致使T细胞等免疫因子失衡，促进HBV感染[17]。

本研究中，急性组、慢性组、乙肝肝硬化组CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+较对照组低，CD8+较对照组高，与顾利江等[18]报道一致，表明不同类型的HBV感染者均会出现CD3+、CD4+和CD4+/CD8+异常降低，CD8+异常升高。其中，CD4+细胞又被称为辅助T细胞，主要起到识别抗原的作用[19]。CD8+被称为细胞毒性T细胞，起到杀伤病毒的作用[20]。CD3+被认为在T细胞信号转导中起到重要作用[21]。推测机体在感染HBV后，各种T细胞相互作用，共同发挥杀伤病毒的作用。同时HBV可影响T细胞生成，致使CD4+/CD8+降低，导致细胞免疫应答紊乱。因此，T细胞尽管能够识别HBV，但因HBV可抑制T细胞功能，故其杀伤HBV的效率较低[22]。本研究中，疾病越严重患者，T细胞紊乱程度越严重，说明HBV感染者免疫状态可以影响疾病的进展和预后。同时，随疾病进展，HBV-DNA载量及IL-6的水平逐渐升高，且HBV-DNA载量越高，IL-6水平越高。这说明乙型肝炎的进展可能与肝细胞、免疫细胞、病毒间的相互作用存在一定关系。随疾病进展，HBV大量生成，产生免疫应答，刺激IL-6水平逐渐升高[23]。从不同HBV-DNA载量HBV感染者IL-6、T细胞水平比较来看，低、中、高载量组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+低于阴性组，CD8+、IL-6明显高于阴性组，随HBV-DNA载量增加，CD8+、IL-6升高，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+降低。提示HBV感染者T细胞分布、IL-6水平和HBV-DNA载量有密切关系。

研究[24]认为，IL-6可通过激活JAKS和STAT信号通路起到增强HBV活性的作用。Lin等[25]研究发现，机体感染HBV后可以激活单核、巨噬细胞，产生大量IL-6，有助于HBV感染和持续应答，促进HBV-DNA复制。本研究表明，IL-6可经干预T细胞分布，推动HBV感染者乙型肝炎的进展。IL-6与HBV-DNA复制情况密切相关，HBV感染后可以产生大量的IL-6，促进HBV-DNA复制。

综上所述，HBV感染者存在IL-6、T细胞水平异常改变，表现为CD3+、CD4+和CD4+/CD8+降低，CD8+、IL-6升高。T细胞及IL-6水平与疾病类型和HBV-DNA载量关系密切，说明乙型肝炎的进展可能与肝细胞、免疫细胞、病毒间的相互作用有关。T细胞及IL-6水平的改变是影响乙型肝炎预后的重要因素之一。