慢性乙型肝炎和乙型肝炎肝硬化患者血清高尔基体蛋白73、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白水平及其临床意义▲

申文晓 赵永忠 秦 韬 叶 亮 王雪梅 曹 杰 覃桂金 郑清华

(桂林医学院附属医院1 消化内科，2 检验科，3 耳鼻咽喉头颈外科，广西桂林市 541001，电子邮箱：1654568436@qq.com)

HBV感染是现今人类传播量最大的传染性疾病，具有反复发作、病程迁延、难治愈等特点[1]。HBV感染是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)、肝硬化及肝细胞癌的始动因素，已成为全球关注的公共卫生问题[2-3]。肝纤维化是机体对各种病因所致肝脏慢性损伤的修复过程，是慢性HBV感染后的常见表现，表现为以胶原纤维为主的细胞外基质弥漫性增生、沉积，且增加的胶原组织会由汇管区域进行扩展和延伸，直到中央静脉，形成纤维间隔，使肝小叶进行重新分割终导致肝硬化的形成[4]。肝纤维化具有一定的可逆性，而早期肝硬化也可以防治[5]。因此，及早准确地诊断肝纤维化及肝硬化，以及评估疾病程度，对病情预测和治疗至关重要。

目前，肝穿刺活组织检查是评估肝脏病变情况的金标准，但其属于有创性操作且风险高，患者难于接受，而血清学指标的检测简便易行，寻找可以评估肝脏病变的血清标志物，对临床诊治肝脏疾病有重要意义。目前，层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagen type Ⅲ,PCⅢ)及Ⅳ型胶原已成为评估慢性肝病发生发展情况，衡量机体炎症活动度和肝纤维化程度，以及判断患者疗效的重要指标[6]。临床上，还可结合ALT和HBV-DNA水平来指导慢性HBV感染的抗病毒治疗[7]。但上述指标诊断肝纤维化或肝硬化的灵敏度和特异性均不高。高尔基体蛋白 73(Golgi protein 73，GP73)又称为Ⅱ型高尔基体膜蛋白，是Kladney等[8]研究巨细胞肝炎病原时，在肝脏cDNA文库中克隆筛选出来的一种相对分子质量为73的跨膜糖蛋白。近年来研究表明，GP73在正常肝脏的胆管上皮细胞中稳定表达，在正常肝细胞中很少或不表达，但肝细胞患者血清GP73水平明显升高，因此其被认为是一种潜在的新型血清肿瘤标志物[9]。但目前发现GP73在肝细胞癌的诊断中特异性不高[10]，而其与肝纤维化、肝硬化密切相关，且血清 GP73水平可随着纤维化程度的加重而升高[11]。本研究探讨CHB和乙型肝炎肝硬化患者血清GP73、LN、PCⅢ、Ⅳ型胶原水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年7～12月在我院治疗的CHB患者(CHB组)30例，乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组)36例，同期选取31例健康体检者作为对照组。纳入标准：CHB、肝硬化组患者均符合2015年中华医学会肝病学分会和感染病学分会联合修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中的诊断标准；健康对照者均无肝炎病史，超声及肝功能检查均正常，HBsAg均为阴性。排除标准：(1)合并其他类型肝炎病毒感染及HIV感染者；(2)酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病等非HBV所致慢性肝病者;(3)肝癌及其他系统严重疾病的患者。对照组中男12例、女19例，年龄(45.6±11.9)岁；CHB组中男20例、女10例，年龄(44.8±12.5)岁；肝硬化组男26例，女10例，年龄(48.5±12.8)岁。3组研究对象一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。研究对象对本研究知情同意并签署知情同意书，本研究已通过桂林医学院附属医院伦理学委员会审查。

1.2 方法 治疗前采集CHB组及肝硬化组患者空腹静脉血5 mL，体检当日采集对照组研究对象静脉血5 mL，20℃下以3 000 r/min离心10 min血清后-80℃保存备用。

1.2.1 血清GP73水平的检测：取冻存血清，解冻后采用酶联免疫吸附测定法检测血清GP73水平。试剂盒由武汉华美生物工程有限公司提供(批号：L60613040)，严格按照试剂盒说明书进行操作，在ELx800型美国伯腾酶标仪上读取450 nm处数据。

1.2.2 血清PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平的检测：取冻存血清，解冻后采用磁微粒化学发光法检测血清PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平，试剂盒由郑州安图生物工程股份有限公司提供(批号：20180102、20180110、20180110)，严格按照试剂盒说明书进行操作，在安图A2000化学发光分析仪上读取450 nm处数据。

1.3 统计学分析 采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以(x±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，非正态分布的计量资料以[M(P25，P75)]表示，比较采用秩和检验；计数资料以例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关性检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组研究对象GP73、PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平比较 对照组、CHB组、肝硬化组GP73、Ⅳ型胶原、LN水平均依次升高(均P<0.05)，CHB组与肝硬化组患者PCⅢ水平均高于对照组(均P<0.05)，但CHB组与肝硬化组患者PCⅢ水平差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 3组GP73、PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平比较[M(P25，P75)]

注：与对照组对比，aP<0.05；与CHB组对比，bP<0.05。

2.2 CHB组、肝硬化组患者血清GP73水平与PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平的相关性 CHB组患者血清GP73水平与PCⅢ及Ⅳ型胶原水平呈正相关(均P<0.05)，见表2。肝硬化组患者血清GP73水平与Ⅳ型胶原水平呈正相关(P<0.05)，见表3。

表2 CHB组患者血清GP73水平与PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平的相关性

表3 肝硬化组患者血清GP73水平与PCⅢ、Ⅳ型胶原、LN水平的相关性

3 讨 论

HBV感染者的早期临床症状不明显，容易被忽视，若不采取积极治疗措施，可发展至肝硬化，进而出现严重的并发症，甚至导致肝细胞癌[12]。许正锯等[13]对100例慢性HBV携带者进行肝活检，发现29.0%患者存在肝脏炎症，33.0%患者存在肝纤维化。但如未进行相关病理活检，按照CHB防治指南，这部分患者则不会接受抗病毒治疗，这将导致其错失抗病毒治疗的机会[7]。目前诊断肝纤维化及肝硬化的金标准是肝穿刺活检，但其为侵入性操作，具有创伤性，因此寻找敏感性和特异性高的血清学指标监测肝脏病变进程，对早期诊治肝纤维化及肝硬化具有重要意义。

研究表明，在各种急性和慢性肝脏疾病患者中GP73蛋白表达上调，尤其是急性肝炎和进行性肝硬化患者[14-15]，推测原因可能为发生急慢性肝脏疾病后，机体出现急性肝细胞损伤、慢性肝病纤维化和组织重塑，这些过程均可以促进肝脏GP73的表达上调。许正锯等[16]的研究结果显示，GP73主要在肝细胞浆内表达，慢性HBV感染者肝组织中GP73的表达随着病情进展而升高。还有研究证实，急慢性肝脏疾病者血清GP73水平与肝脏炎性反应和纤维化程度密切相关，且在肝纤维化及肝硬化中其水平明显升高，其是反映肝纤维化严重程度的潜在血清学指标，可能也是诊断早期肝纤维化和早期肝硬化的敏感指标[17-18]，而对于乙型肝炎肝硬化患者，血清GP73水平有助于评估乙型肝炎肝硬化患者是否处于失代偿期[19]。

LN来源于星状细胞，是细胞外基质糖蛋白的成分之一，血清LN水平与肝纤维化程度和门脉高压呈正相关[20]。PCⅢ是细胞外基质中Ⅲ型胶原的前体，能够反映肝脏Ⅲ型胶原的代谢速度。在肝纤维化早期，PCⅢ合成较为活跃，晚期合成减慢，可作为评估活动性肝纤维化的指标，但其他器官出现纤维化时，PCⅢ水平也升高，因此缺乏特异性[21]。Ⅳ型胶原为基底膜的主要组成成分，肝纤维化时，Ⅳ型胶原和LN可促进基底膜形成，LN联合Ⅳ型胶原常被用于评估肝脏纤维化的进程，且敏感性较高[22]。

本研究结果显示，对照组、CHB组、肝硬化组GP73、Ⅳ型胶原、LN水平均依次升高(均P<0.05)，与相关研究结果相似[18，23-24]，提示GP73、Ⅳ型胶原、LN可能与CHB及乙型肝炎肝硬化的发生有关。而Pearson相关性分析结果显示，CHB组患者血清GP73水平与PCⅢ及Ⅳ型胶原水平呈正相关；肝硬化组患者血清GP73水平与Ⅳ型胶原水平呈正相关(均P<0.05)，提示血清GP73联合PCⅢ或Ⅳ型胶原可能有助于提高诊断CHB、乙型肝炎肝硬化的敏感性和准确性。

综上所述，GP73、Ⅳ型胶原、LN可能与CHB、乙型肝炎肝硬化的发生有关，GP73联合PCⅢ或Ⅳ型胶原可能有助于提高其对CHB、乙型肝炎肝硬化的诊断效能。