胃癌患者化疗前后血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平及 T淋巴细胞亚群的变化及临床意义

李亚芹，闫勇，张倡誌，田季平，王媛媛，郝青，张炳昌

山东大学附属省立医院1检验科，2输血科，济南250021

胃癌是常见的恶性肿瘤，据统计，胃癌在中国中小城市的发生率仅次于肺癌，对中国居民的生命健康构成严重威胁[1]。化疗是胃癌的重要治疗手段，在根治性手术前给予新辅助化疗可以缩小肿块，杀灭隐匿的肿瘤细胞，提高手术治疗效果，延长患者的生存期[2]。但化疗药物可能给胃癌患者带来不同程度的肾脏不良反应，监测血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平变化可提示胃癌患者化疗后早期肾功能不全程度，为临床干预提供依据。此外，胃癌的发生与机体的免疫功能紧密相关，其中T淋巴细胞亚群是肿瘤免疫的重要调节细胞，化疗后T淋巴细胞亚群的变化对胃癌患者的预后具有一定的提示作用[3]。本研究通过检测胃癌患者和健康体检者的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy及T淋巴细胞亚群水平，分析其临床意义，旨在为临床治疗提供依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年4月至2017年4月山东大学附属省立医院收治的89例胃癌患者。纳入标准：①根据《现代肿瘤学》[4]中的相关标准确诊为胃癌；②根据美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）胃癌TNM分期标准，患者的TNM分期为Ⅲ期；③接受根治性手术+辅助化疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②发生远处转移者；③既往有胃部手术史或化疗史者；④接受过免疫治疗者；⑤肝肾功能异常者；⑥严重营养不良者；⑦合并急慢性感染者；⑧无法耐受化疗者。89例胃癌患者中，男69例，女20例；年龄44～68岁，平均（56.37±12.42）岁；TNM分期：Ⅲa期52例，Ⅲb期37例；肿瘤部位：胃上部24例，胃中部30例，胃下部35例。根据TNM分期不同，将胃癌患者分为Ⅲa期组和Ⅲb期组。选择同期50例健康体检者为对照组，其中，男36例，女14例；年龄40～70岁，平均（55.11±12.02）岁。胃癌患者和健康体检者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经山东大学附属省立医院医学伦理委员会审批通过，所有研究对象均对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 治疗方法

所有患者均采用表柔比星+顺铂+氟尿嘧啶（EFC）方案进行治疗，第1天给予表柔比星50 mg/m2，静脉滴注；第1天给予顺铂60 mg/m2，静脉滴注；第1天给予氟尿嘧啶200 mg/m2，静脉滴注。每3周为1个周期，共化疗6个周期。

1.3 疗效评估

依据实体瘤疗效评价标准（response evaluation criteria in solid tumor，RECIST）[5]对患者的临床疗效进行评价：完全缓解（complete response，CR），病灶全部消失，至少维持4周；部分缓解（partial response，PR），病灶最长径之和减少≥30%，至少维持4周；疾病稳定（stable disease，SD），病灶最长径之和减少＜30%，或增加＜20%；疾病进展（progressive disease，PD），病灶最长径之和增加≥20%，或出现新病灶。将CR和PR患者纳入有效组，SD和PD患者纳入无效组。

1.4 检测方法

于化疗前和化疗2个周期后采集胃癌患者的空腹肘静脉血3 ml，对照组于体检时采集静脉血3 ml，置于含乙二胺四乙酸的采血管中，3000 r/min离心15 min，留取上清液，保存于-20℃冰箱。采用免疫比浊法检测血清β2微球蛋白和视黄醇结合蛋白水平，采用循环酶法检测血清Hcy水平，试剂盒均购自浙江东瓯诊断产品有限公司。采用FACSCantoⅡ流式细胞仪（购自美国BD公司）检测T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）水平，计算CD4+/CD8+值。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，两组内比较采用配对样本t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 化疗前不同分期胃癌患者与对照组血清 β 2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平的比较

化疗前Ⅲa期组、Ⅲb期组胃癌患者和对照组的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 化疗前Ⅲ a期组、Ⅲ b期组胃癌患者与对照组的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平（± s）

表1 化疗前Ⅲ a期组、Ⅲ b期组胃癌患者与对照组的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平（± s）

组别Ⅲa期组（n=5 2）Ⅲb期组（n=3 7）对照组（n=5 0）1.7 7±0.3 9 1.8 1±0.4 0 1.6 6±0.3 6 3 8.1 1±8.3 8 3 7.6 4±8.2 7 4 0.2 3±8.8 5 8.7 9±1.9 4 9.0 2±1.9 9 8.3 0±1.8 3 β 2微球蛋白（m g/L）视黄醇结合蛋白（m g/L）H c y（μ m o l/L）

2.2 化疗前不同分期胃癌患者与对照组 T淋巴细胞亚群水平的比较

化疗前Ⅲa期组、Ⅲb期胃癌患者和对照组的CD3+、CD4+水平和 CD4+/CD8+比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。化疗前Ⅲa期组与Ⅲb期组胃癌患者的 CD3+、CD4+水平和 CD4+/CD8+比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；化疗前Ⅲa期组与Ⅲb期组胃癌患者的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表 2）

表2 化疗前Ⅲ a期组、Ⅲ b期组胃癌患者与对照组 T淋巴细胞亚群水平的比较（± s）

表2 化疗前Ⅲ a期组、Ⅲ b期组胃癌患者与对照组 T淋巴细胞亚群水平的比较（± s）

注：*与对照组比较，P＜0.05

组别Ⅲa期组（n=5 2）Ⅲb期组（n=3 7）对照组（n=5 0）F值P值6 7.1 8±1 2.0 9*6 5.2 5±1 1.7 4*7 4.7 6±1 3.4 5 7.4 4 5 0.0 0 0 3 5.4 2±6.3 8*3 4.5 9±6.2 2*4 1.6 5±7.5 0 1 5.2 8 1 0.0 0 0 1.3 0±0.2 4*1.2 6±0.2*1.5 2±0.2 6 1 5.2 3 7 0.0 0 0 C D 3+（%）C D 4+（%）C D 4+/C D 8+

2.3 化疗前后胃癌患者血清 β 2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平的比较

89例胃癌患者化疗后的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平均明显高于化疗前，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表3）

表3 胃癌患者化疗前后血清 β 2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平的比较（ n=89，± s）

表3 胃癌患者化疗前后血清 β 2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平的比较（ n=89，± s）

时间化疗前化疗后t值P值1.7 8±0.4 5 2.2 6±0.5 6 8.9 6 7 0.0 0 0 3 7.9 2±9.4 8 4 5.3 4±1 1.3 3 6.7 2 8 0.0 0 0 8.8 8±2.2 3 1 3.4 9±3.6 0 1 4.9 2 0 0.0 0 0 β 2微球蛋白（m g/L）视黄醇结合蛋白（m g/L）H c y（μ m o l/L）

2.4 化疗后的临床疗效

化疗2个周期后，CR患者6例，PR患者64例，SD患者14例，PD患者5例。有效组患者共70例，无效组患者共19例。

2.5 有效组胃癌患者化疗前后 T淋巴细胞亚群水平的比较

有效组胃癌患者化疗后的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均明显高于化疗前，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表4）

表4 有效组胃癌患者化疗前后 T淋巴细胞亚群水平的比较（ n=70，± s）

表4 有效组胃癌患者化疗前后 T淋巴细胞亚群水平的比较（ n=70，± s）

时间化疗前化疗后t值P值6 6.7 1±1 4.6 8 7 2.5 8±1 5.9 7 3.2 0 5 0.0 0 3 3 5.0 9±7.7 2 3 9.6 0±8.7 1 4.5 9 3 0.0 0 0 1.2 8±0.2 8 1.4 5±0.3 2 4.7 4 1 0.0 0 0 C D 3+（%）C D 4+（%）C D 4+/C D 8+

2.6 无效组胃癌患者化疗前后 T淋巴细胞亚群水平的比较

无效组胃癌患者化疗前后的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表5）

表5 无效组胃癌患者化疗前后的 T淋巴细胞亚群水平（ n=19，± s）

表5 无效组胃癌患者化疗前后的 T淋巴细胞亚群水平（ n=19，± s）

时间化疗前化疗后CD3+（%）66.34±14.59 70.29±15.46 CD4+（%）34.81±7.66 36.35±7.99 CD4+/CD8+1.27±0.28 1.33±0.29

3 讨论

化疗是胃癌的重要治疗手段，可以控制或缩小肿瘤病灶，改善根治性手术的疗效，延长患者的生存期。然而化疗会对机体造成一定的不良反应，其中铂类化疗药物需由肾脏代谢排出，多次化疗可能对肾小管造成损伤，甚至部分患者出现肾功能衰竭[6-7]。本研究通过监测胃癌患者化疗前后的血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy水平，观察胃癌患者化疗过程中的肾功能变化情况，以便尽早进行临床干预，减轻化疗造成的肾功能不全。

β2微球蛋白是一种小分子蛋白，由肝脏合成和分泌，分子量为11.8 kD，由100个氨基酸组成，可自由通过肾小球滤过膜，经肾脏分解代谢[8]。人体内β2微球蛋白水平相对稳定，当肾小球功能受损后，β2微球蛋白的分解速率与排出量降低，造成血清β2微球蛋白水平升高。由于β2微球蛋白对肾小球的轻微损伤较敏感，因此在临床中常作为早期肾功能不全的评估指标。冯雪凤等[9]研究发现，血清β2微球蛋白随糖尿病肾病的病情加重而升高。本研究结果显示，89例胃癌患者化疗后的血清β2微球蛋白水平明显高于化疗前（P＜0.01），提示化疗药物可能对胃癌患者的肾功能造成一定损伤。

视黄醇结合蛋白是一种小分子亲脂载体蛋白，由肝脏合成，分子量为21.2 kD，经肾小球滤出后被肾小管重吸收，由于肾小管功能变化对小分子蛋白再吸收的影响显著，因此视黄醇结合蛋白被认为是肾小管早期损伤的敏感指标。胡晓静和孙立强[10]的研究指出，肾小管重吸收功能受损后，视黄醇结合蛋白在血液中蓄积，血清视黄醇结合蛋白升高。本研究结果显示，89例胃癌患者化疗后的血清视黄醇结合蛋白水平明显高于化疗前（P＜0.01），可能与化疗导致的肾小管损伤有关。应当注意的是，胃癌患者化疗过程中营养状况的变化可能对血清视黄醇结合蛋白水平产生影响。有研究显示，视黄醇结合蛋白在血液中负责维生素转运，受全反式视黄醇刺激分泌入血，对机体的营养状况较敏感，可反映早期营养不良[11]。化疗可造成不同程度的肠道不良反应，导致营养摄入、吸收减少，部分胃癌患者出现营养不良症状。因此视黄醇结合蛋白在反映化疗引起的肾脏不良反应方面存在一定争议，不宜作为独立监测指标，可辅助β2微球蛋白等指标评估胃癌化疗患者的早期肾功能不全。

Hcy是人体内的一种含硫氨基酸，通过甲硫氨酸循环途径产生，肝肾均为其主要代谢器官，血清Hcy水平可反映细胞内Hcy代谢平衡状况。Hcy对血管内皮细胞具有一定损害，近年来作为心脑血管疾病的独立危险因子受到越来越多的关注。但也有研究发现，Hcy与慢性肾功能不全存在一定联系[12]。董霞等[13]研究发现，Hcy可通过氧化应激反应，刺激肾脏微血管收缩，损伤肾小球功能。刘倩等[14]研究发现，血清Hcy与尿白蛋白水平呈正相关，可反映糖尿病肾病的早期病理改变。本研究结果显示，89例胃癌患者化疗后的血清Hcy水平明显高于化疗前（P＜0.01），提示化疗造成胃癌患者肾功能发生改变。

胃癌的发生、发展与机体免疫功能存在紧密联系，有学者指出细胞免疫受损是肿瘤发生的病理基础，当细胞免疫功能较低时，机体不仅易发生癌变，同时肿瘤转移、浸润风险上升[15]。在肿瘤免疫中T淋巴细胞亚群具有极其重要的地位，其中CD3+代表总T细胞数量，是机体免疫的基础；CD4+为辅助性T细胞，负责上调免疫功能；CD8+为抑制性T细胞，具有负向调节作用。胃癌患者的免疫系统受到抑制在T淋巴细胞亚群中表现为CD3+、CD4+、CD8+数量改变与比例失衡[16]。本研究结果显示，化疗前Ⅲa期组和Ⅲb期组胃癌患者的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均低于对照组（P＜0.05），提示胃癌患者较健康人群可能存在不同程度的细胞免疫损伤。化疗可通过杀伤肿瘤细胞，解除肿瘤造成的免疫抑制，促使T淋巴细胞免疫功能恢复。本研究结果显示，有效组胃癌患者化疗后的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均明显高于化疗前（P＜0.01）；无效组胃癌患者化疗前后的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。提示T淋巴细胞亚群变化对评价胃癌患者化疗疗效具有一定意义。

综上所述，血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、Hcy可为胃癌化疗患者早期肾功能的损伤提供一定参考。T淋巴细胞亚群可作为化疗疗效的评估指标，监测其变化有利于了解胃癌患者的免疫功能。