囊胚解冻移植临床结局相关影响因素分析

2019-06-12王小雪邹薇薇纪冬梅蒋欢欢曹云霞

安徽医科大学学报 2019年5期

王小雪，邹薇薇，纪冬梅，蒋欢欢，吴欢，曹云霞

冷冻胚胎移植(frozen embryo transfe，FET)技术是保存生育功能的成熟方法，该技术可通过试管培育技术得到胚胎或囊胚，并将其置于液氮中使其得以长时间保存，可有效降低卵巢过度刺激综合症的发生率[1]。从1994年我国第一例囊胚解冻移植(frozen blastoyst transfe， FBT)妊娠以来，FBT技术逐渐成熟，因玻璃化冷冻法操作简单，复苏率较高，而越来越受到医师的青睐，逐渐取代程序冷冻法[2]。而目前对于患者妊娠结局影响因素方面的研究较少，为探讨FBT临床结局相关影响因素，该研究回顾性分析进行囊胚移植812例患者的临床资料，采用单因素分析与多因素分析结合分析各临床因素与临床妊娠结局的关系。

1 材料与方法

1.1 病例资料选取2017年7月～2018年4月在安徽医科大学第一附属医院生殖中心进行囊胚移植的患者812例为研究对象，女方患者纳入标准：① 以人工周期或自然周期准备内膜行囊胚解冻移植；② 年龄20～38 (31.03±4.94) 岁；③ 不孕年限1～6年；④ 患者已获知情同意并签署知情同意书。排除标准：① 子宫因素：生殖道畸形、子宫腺肌病、子宫肌瘤其他内分泌疾病者；② 囊胚因素：囊胚评分BC级以下(评分标准后述)。

1.2 方法

1.2.1FBT方法 ① 囊胚的获取以及培养：不孕患者行体外受精(invitrofertilization IVF)/单精子胞浆内注射(intracytoplasmicsperminjectionICSI)-胚胎移植(embryo transfer， ET)治疗，超促排卵过程中当直径16 mm的卵泡个数在3个以上或直径17 mm的卵泡个数在两个以上或直径18 mm的卵泡个数在1个以上，则使用5 000～10 000 IU的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)作为扳机，促进卵泡成熟。在HCG使用36 h后取卵。根据取卵日男方精液的质量行IVF或ICSI。囊胚评分标准[3]根据内细胞团和滋养层细胞的细胞数及细胞间紧密程度将内细胞团和滋养层分为3级，即A级、B级、C级。选择分级BC以上第5天或者第6天优质囊胚进行玻璃化冷冻。② 囊胚的冷冻：按照由日本加藤公司提供的试剂盒说明书进行操作，将其放入液氮中套上盖子，进而在液氮罐中保存[4]。③ 囊胚的解冻：应用与囊胚冷冻相同的试剂盒，将胚胎从液氮罐中取出，按试剂盒说明书进行操作进行囊胚解冻移植。如果解冻的胚胎卵裂球50%以上都完好透亮则为囊胚存活[5]。④ 临床结局判定：囊胚移植后14 d患者自测尿HCG(+)或检验血β-HCG(+)者，继续予以黄体支持，移植后30～35 d行经阴道超声检查，发现宫内孕囊且见心管搏动为临床妊娠。

1.2.2资料收集对所有患者女方年龄、男方年龄、基础促卵泡生成激素(follicle-stimulatinghormone，FSH)、基础促黄体生成激素(luteinizing hormone ，LH)、基础雌二醇(estrsdiol，E2)、移植日内膜厚度、不孕因素、装管技师、移植医师、移植囊胚天数、移植胚胎数、移植管类型等信息进行收集。

1.3 统计学处理采用SPSS 18.0软件进行统计分析，其中计数资料进行χ2检验，计量资料进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。采用多因素Logistic回归分析进行妊娠结局的相关影响因素分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 FBT临床结局单因素分析单因素分析结果显示女方年龄、男方年龄、移植囊胚天数的不同患者囊胚解冻移植临床结局差异有统计学意义(P<0.05)。基础FSH、基础LH、基础E2、移植日内膜厚度、不孕因素、装管技师、移植医师、移植胚胎数、移植管类型患者临床结局差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 FBT临床结局多因素分析结果将单因素分析中有统计学意义的因素按以下方式进行赋值：女方年龄(0：20～30岁，1：>30岁)，男方年龄直接纳入，移植囊胚天数(0：第5天囊胚，1：第6天囊胚)，多因素结果显示：女方年龄(95%CI=4.057，95%CI:1.291～11.576)、男方年龄(95%CI=2.068，95%CI:1.611～6.059)、移植囊胚天数(95%CI=4.086，95%CI:1.015～5.942)为FBT临床结局独立性影响因素(P<0.05)。见表2。

3 讨论

自从20世纪初我国完成首例冻融胚胎移植妊娠以来，该技术在我国得到了迅速的发展。随着快速冷冻技术的应用及安全性能更高的胚胎冷冻保护剂的研制成功使冷冻胚胎移植临床妊娠率明显提高[6]。目前国内对于FBT临床结局相关影响因素方面的研究较少且多采用单因素分析，因FBT的临床结局是受多方面因素综合作用的结果，因此有必要对其进行多因素分析。

本研究在单因素分析的基础上，采用多因素Logistic分析，结果显示：① 女方年龄(95%CI=4.057，95%CI:1.291～11.576)，目前在FBT中，年龄对临床结局的影响尚未形成共识，国内有研究[7]结果显示年龄在36岁以上的妇女胚胎种植率与36岁以下的妇女胚胎种植率相当。但另外研究[8]表明，女方年龄对FBT的临床妊娠率有重要的影响，特别是年龄在40岁以上的妇女。本研究结果显示20～30岁人群临床妊娠比例高于30岁以上人群，分析原因可能与随着年龄的增长，女方卵巢功能逐步衰退，同时在35岁以后卵泡耗竭加速使卵子质量下降，卵细胞染色体非整倍率明显上升，此类卵细胞授精形成胚胎后使染色体非整倍体增加，优级胚胎量较少[9]。② 男方年龄(95%CI=2.068，95%CI:1.611～6.059)，本研究结果显示未妊娠组患者男方年龄明显较高，囊胚移植临床结局不仅受女方年龄的影响，男方年龄同样重要。年龄对男性精液质量的影响主要有以下2个方面[10]：一是随着年龄的增长，睾丸、输精管、前列腺、附睾等生殖器官均有不同程度的退化，上述器官对激素均较为敏感，随着年龄的增长，敏感度下降导致精子的产生过程受到影响。另外随着年龄的增长，吸烟、饮酒、职业暴露等不良因素暴露的概率增加，进一步使其精液质量下降。③ 移植囊胚天数(95%CI=4.086，95%CI:1.015～5.942)，第5天临床妊娠率明显高于第6天，与相关研究[11]结果相一致。Ferreux et al[12]曾对第5天、第6天的囊胚的非整倍体率进行对比，结果显示两者无显著性差异，且第6天优质囊胚的发育潜能及临床结局均与第5天优质囊胚相一致，但在非优质囊胚上第6天的临床妊娠率、胚胎种植率均明显下降，因此认为两者妊娠结局上的差异主要是非优质囊胚所致。