细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘组织中的表达

(郑州市第一人民医院，河南 郑州 450000)

妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)属于孕期特有的肝脏疾病，易引发胎儿窘迫、胎死宫内及新生儿窒息等,已被列为高危妊娠之一[1]。临床积极探究一种可评估ICP疾病严重程度的基因标志物尤为重要。长期临床实践表明细胞凋亡在妊娠期胎盘组织中发挥重要作用，妊娠晚期胎盘滋养细胞凋亡增多，其在一定程度上利于母儿间营养物质交换，但当细胞凋亡增加所致胎盘损伤超过其代偿能力时，将出现胎盘功能减退，其中p53、bax和 bcl-2均为细胞凋亡中重要的调控基因[2]。目前，临床有关ICP患者胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2在胎盘中的表达意义的研究尚在进一步探索中，本文进一步对此展开临床对照性研究，结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2015年10月～2017年12月郑州市第一人民医院收治的50例妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇为观察组，同期36例正常妊娠者为对照组。病例患者纳入标准：符合《中华妇产科学》有关ICP诊断标准；既往无肝胆疾病史、皮肤病史及其他妊娠期相关并发症；患者及其家属对本研究内容目的知晓，自愿签署书面知情同意书；均为单胎孕产妇。排除标准：妊娠期高血压疾病及妊娠期糖尿病、胆石症和急性肝炎等疾病者；合并其他产科并发症或合并症；合并严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍者。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具可比性。

1.2 方法

标本采集：两组孕妇均在胎盘娩出5min内，取胎盘母体面中央组织4 cm3，应避免梗死及钙化区，采用10%中性缓冲甲醛固定，采用石蜡包埋。实验方法：胎盘病理切片采用苏木素伊红染色，在光镜下对细胞形态变化进行观察，p53鼠抗人单克隆抗体、bax鼠抗人单克隆抗体和 bcl-2兔抗人单克隆抗体(均购自福州迈新生物技术有限公司)，免疫组织化学检测试剂盒为即用型(购自DAKO公司)，采用免疫组织化学EnVision法检测胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2的蛋白表达情况，所有操作严格按照试剂盒说明书进行；采用放射免疫法检测两组血清胆汁酸水平。细胞内出现黄色或棕黄色颗粒即为阳性信号，其中p53阳性信号位于细胞核内，bax和bcl阳性信号位于细胞膜及细胞质；采用MIQAS医学影像定量分析系统及医学图像定量分析软件(上海求为生物科技有限公司提供)测量染色后不同成分在免疫组织化学图像中显示阳性区域面积比和光密度值(OD)进行定量分析；每片在显微镜25×1O视野下随机选取三次测量显色阳性区域面积比以及OD值，计算平均值，检测免疫组织化学阳性指数=阳性面积比×OD。

1.3 观察指标

两组血清胆汁酸水平比较；p53、bax和 bcl-2在两组胎盘组织中的蛋白表达情况；p53、bax和 bcl-2与ICP胎盘凋亡发生的相关性分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组血清胆汁酸水平比

对照组血清胆汁酸水平(3.59±1.00)μmol/L，观察组为(29.46±3.76)μmol/L。两组比较差异有统计学意义(t=40.21，P<0.05)。

2.2 p53、bax和bcl-2在两组胎盘组织中的蛋白表达比较

观察组p53、bax蛋白表达较对照组明显高，而bcl-2蛋白表达较对照组低，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2；p53、bax和bcl-2在ICP患者胎盘组织中表达情况，见图1～3。

表2 p53、bax和bcl-2在两组胎盘组织中的蛋白表达比较

图1p53在ICP患者胎盘组织中表达

图2 bax在ICP患者胎盘组织中表达

图3 bcl-2在ICP患者胎盘组织中表达

2.3 p53、bax和 bcl-2与ICP胎盘凋亡发生的相关性分析

pearson相关系数分析结果显示，p53、bax与ICP胎盘凋亡发生存在明显正相关(r=0.29、0.30，P<0.05)，而bcl-2与ICP胎盘凋亡发生存在明显负相关(r=0.30，P<0.05)，年龄与ICP发生无明显相关性(P>0.05)。

3 讨论

ICP为妊娠中晚期常见并发症，患者主要表现为皮肤瘙痒和血中胆汁酸增高，易引发胎儿窘迫、死胎、新生儿窒息及死产等多种并发症，病因多与激素因素、免疫因素、遗传因素及环境因素等有关，ICP诊断主要依据患者临床表现、多参数实验室检查等手段，同时排除急性病毒性肝炎、胆石症及妊娠期急性脂肪肝、肝酶升高等[3]。现代医学研究指出，在ICP病理妊娠期间，因存在高胆汁酸血症及缺氧等致细胞凋亡因素，常导致胎盘细胞增殖和凋亡间的平衡紊乱，胎盘灌注不足，最终引发胎儿宫内缺氧等；p53、bax和 bcl-2属于细胞凋亡调控的常见基因[4]，目前有关ICP患者胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2在胎盘中的表达水平及临床意义的研究并不多见。

本研究发现观察组胆汁酸水平、p53、bax蛋白表达较对照组高，bcl-2蛋白表达较对照组低，p53、bax与ICP发生存在正相关，而bcl-2与ICP发生存在负相关，年龄与ICP发生无明显相关性，初步证实了ICP患者胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax在胎盘中的表达上调，而bcl-2表达下调，三者在ICP胎盘细胞凋亡中发挥重要作用。其中p53属于一个转录调节因子，其水平升高与细胞DNA损伤程度密切相关，在细胞凋亡调控方面发挥重要作用；Bcl-2为抑制细胞凋亡作用的基因，其在抑制组织细胞凋亡和延长细胞寿命方面积极作用明确；bax基因主要分布在细胞质中，当细胞受到凋亡信号刺激时，bax基因表达随之增多，构象发生变化，并通过其疏水性羧基端结合在线粒体膜上，从而改变线粒体膜通透性，继而诱发细胞凋亡[5]。

综上所述，ICP患者胎盘细胞凋亡调控基因p53、bax和 bcl-2在胎盘中的表达对胎盘细胞凋亡情况影响显著，临床上可据此为ICP患者制订安全、有效的治疗方案。