复方皂矾功能洗发香波对马拉色菌体外抑菌活性的实验研究

高坤平 杨文信

（西南医科大学附属中医院皮肤科，四川 泸州 646000）

脂溢性皮炎又称为脂溢性湿疹，是发生在皮脂腺丰富部位如头皮、前胸、腋窝，的一种炎症性皮肤病。以红斑、丘疹、鳞屑为主要皮损表现，同时伴有不同程度的瘙痒，中医称为“油面风”“白屑风”等。病程日久，反复发作，形成恶性循环，甚至扩展至全身，严重影响患者生活质量［1］。马拉色菌（malassezia）是皮肤表面的常驻菌，与脂溢性皮炎的发病密切相关，是导致头皮脂溢性皮炎的重要原因［2］。治疗脂溢性皮炎的主流是抗真菌治疗，西药治疗复发率高，不良反应大。因此，寻找作用安全、疗效满意的抗马拉色菌药物的任务巨大。中医以整体观念与辨病辨证为理论基础，物美价廉，高效低毒，具有独特的优势。复方皂矾功能洗发香波为纯中药制成，使用舒适，安全性好。目前治疗脂溢性皮炎的中药或复方中药外洗剂缺乏深入系统科学的实验研究，多以个案或个别单位小样本量临床研究为主［3］。为深入研究其作用机制所以我们对复方皂矾功能洗发香波进行了体外抗马拉色菌药敏实验。

1 实验材料

1.1 菌株 （1）临床马拉色菌株：由我院微生物室分离鉴定获得。（2）标准菌株：广东微生物研究所微生物保藏中心提供糠秕马拉色菌 GIMCC编号：GIM2.181=ATCC44344。

1.2 中药 西南医科大学附属中医院制剂科用1000 mL 60%的乙醇浸润方剂（白矾2 g，苦参10 g，皂角5 g，侧柏叶10 g，地肤子5 g，苦柏10 g等取5付药材，除白矾外粉碎成粗粉末），装柱，最终药液含药量2.0 g/mL，高压灭菌冷冻存储。采乐洗剂（西安杨森制药公司，国药准字：H20000588）：2%酮康唑洗剂。

1.3 真菌培养基的主要试剂 固体培养基：成分：氯霉素50 mg、橄榄油2.7 g、吐温600.5 mL、酵母浸膏1 g等液体培养基：成分：麦芽糖20 g，橄榄油40 g，吐温600.5 mL、酵母浸膏20 g等。

2 实验方法

2.1 琼脂平板扩散法 打孔法［4］

2.1.1 固体培养基的制备 融化的固体培养基，工作台上将其倒入每个平皿中（约12 mL）。

2.1.2 菌液配制 在固体培养基上接种受试菌株，每72 h传代培养1次，放入35℃恒温孵箱孵育，传代培养2次后，制成菌悬液，菌含量大概为（1.0～2.0）×106CFU/mL。

2.1.3 抑菌活性的测定 将菌液2 mL均匀的涂布在培养基平板上，无菌打孔器在马平板上打直径为10 mm的孔，孔内加入稀释成不同浓度的药液，恒温孵箱内培养72 h，再用游标卡尺测量抑菌圈的直径。

2.1.4 结果判读 用游标卡尺测量抑菌圈直径，再分别计算出每个浓度的抑菌圈直径的平均值与标准差。

2.2 微量液基稀释法 参照NCCLS-M27A方案，以此为基础改良后采用含4%橄榄油作为作为药敏试验的液基［5］。

2.2.1 药液加样 在无菌操作台上将浓度为2 g/mL的中药贮备液用灭菌蒸馏水在无菌试管内稀释成试验浓度（见表3），再依次微量稀释板每孔中加入100 μL药液。在无菌试管内采乐洗剂也用灭菌蒸馏水稀释成试验浓度（见表4），再依次每孔100 μL加入微量稀释板。再每孔中加入100 μL的液体培养基。同时不加菌的加入同等浓度100 μL的药液作为阴性对照，不加药液的加入100 μL的灭菌蒸馏水作为生长对照。

2.2.2 加菌悬液 菌悬液制备同2.1.2，再向每个微孔板中依次加入100 μL菌液。

2.2.3 培养及结果判读 培养 72 h后将1 mL培养液点种于不含药物的无菌马拉色菌橄榄油固体培养基上，72 h后观察菌落生长情况。固体培养基无菌生长所对应的药物浓度确定为MIC值。

2.2.4 MIC值的判读 生长对照菌落生长良好同时空白对照无菌生长，为减少实验误差，判读重复5次，结果取平均值。

3 结果

3.1 琼脂平板扩散法（打孔法） 不同浓度洗发香波药物原液对马拉色菌的抑菌直径见表1。不同浓度采乐洗剂对马拉色菌的抑菌直径见表2。

表1 不同浓度复方皂矾功能洗发香波药物原液对马拉色菌的抑菌直径

表2 不同浓度采乐洗剂对马拉色菌的抑菌直径

3.2 微量液基稀释法 复方皂矾功能洗发香波药物原液的MIC值为 0.005 g/mL （见表 3～4，图 1～4）。

表3 复方皂矾功能洗发香波药物原液对马拉色菌标准菌株的MIC值

表4 采乐洗剂对马拉色菌标准菌株的MIC值

图1 琼脂平板扩散法（打孔法）培养前

图2 琼脂平板扩散法（打孔法）培养72 h后

图3 96微孔法培养72 h后

图4 临床分离马拉色菌镜下图片

4 讨论

选择采乐作为本研究的对照药，是因为它为治疗脂溢性皮炎常用洗剂。虽然采乐组体外抑制马拉色菌生长比洗发香波组效果好，但洗发香波作为纯中药制剂，无任何添加，成本低廉，高效低敏，患者乐于接受，值得应用推广。

马拉色菌（Malassezia）是人体及温血动物皮肤表面的条件致病性嗜脂性真菌，该菌可导致多种皮肤病包括花斑癣、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎等，致病病种多，治疗也因此受到重视。脂溢性皮炎抗真菌治疗为主流。因此我们要寻找安全性好、疗效好且价格低廉的抗真菌药物。从中药寻找抗真菌药物，前景广阔。中药不良反应小，耐药少可用于疾病的长期预防治疗，结合现代工艺，前景好。

马拉色菌体外实验还没有标准化方案。本实验采用琼脂平板扩散法（打孔法）和微量稀释法。琼脂平板扩散法（打孔法）虽然操作简单，结果易判，但结果易受干扰，如培养基厚度，因此本实验中只定性测定抑菌效果。药物的MIC值参照NCCLS-M27A方案，在微量孔中进行，操作简便，结果易判且准确。国内外研表明采用微量法与多量法结果一致，所得的最小抑菌浓度都在2个浓度梯度内［6］。本实验测得复方皂矾功能洗发香波药物原液的MIC值为0.005 g/mL。洗发香波糠秕马拉色菌抑菌作用，为深入探讨洗发香波对糖秕马拉色菌的抑菌机制、动物实验和临床研究提供实验依据。