RNPC1、S100A6蛋白在肺腺癌中的表达及与临床病理特征的关系

赵 璞，杨军峰，董冠中，何 苡

(河南省人民医院 胸外一科,河南 郑州450003)

长期的流行病学研究证实，2010-2017年我国肺腺癌平均发病率可达2384-2483/10万人左右[1]。肺腺癌患者的五年生存率不足45%，中位生存时间不超过38个月[2]。在对于肺腺癌相关基因或者蛋白水平的研究中发现，不同肿瘤调控蛋白的表达，能够通过影响肺部腺体上皮细胞的侵袭和增殖过程，进而参与肺腺癌的发生发展。RNA结合蛋白(RNPC1)的表达能够通过结合微RNA，进而参与到肿瘤细胞的增殖调控、转录及癌细胞的分化诱导过程中。RNPC1的表达上升能够导致上皮细胞DNA扩增风险的显著增加，并诱导其浸润临近的正常上皮组织[3]；S100A6蛋白是钙结合蛋白家族的成员，能够通过结合钙离子进而促进上皮细胞间质成分的分解，提高癌细胞的变形和扩散的能力[4]。部分研究者报道了S100A6蛋白在卵巢癌或者宫颈患者中的表达情况[5]，认为S100A6蛋白的表达上升能够显著促进宫颈癌的临床分期进展和临床预后的恶化[6]，但在肺腺癌患者中的研究不足。为了深入揭示RNPC1、S100A6蛋白的表达与肺腺癌的关系，本研究选取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌组织标本81例，探讨RNPC1、S100A6蛋白的表达与肺腺癌的临床病理特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用回顾性方法，选取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌组织标本81例，其中男性55例，女性26例，年龄40-70岁，中位年龄57岁。纳入标准：(1)均经病理组织学确诊；(2)临床病理资料保存完整；(3)患者及家属知情同意。排除标准：(1)术前已行放化疗等抗肿瘤治疗；(2)合并其他恶性肿瘤。同时选取癌旁组织(距癌边缘>5 cm)作为对照。

1.2 实验方法

所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4 mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法 (strep avidin—biotin complex，SABC法)染色，二氨基联苯胺(diamionben zidene，DAB)显色。PNPC1、S100A6蛋白通用型二抗、SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性和阴性对照，在高倍显微镜下观察PNPC1、S100A6蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

1.3 结果判断

PNPC1、S100A6蛋白表达以胞内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性，采用半定量积分法，随机选取5个高倍镜下视野，每个视野计数200个细胞，对阳性细胞比例和染色强度进行评价。阳性细胞比例：<10%为0分，10%-49%为1分，50%-69%为2分，≥70%为3分；染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分。根据阳性细胞比例和染色强度评分之和，总分≥4分为阳性表达，<4分为阴性表达。

1.4 统计学方法

统计分析采用SPSS 19.0软件对研究数据进行统计处理，计数资料比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺腺癌组织和癌旁组织RNPC1、S100A6蛋白阳性表达

肺腺癌组织RNPC1和S100A6蛋白阳性表达率分别为70.37%和81.49%，明显高于癌旁组织的16.05%和27.17%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1、图1。

表1 肺腺癌组织和癌旁组织RNPC1、S100A6蛋白阳性表达 例(%)

2.2 RNPC1、S100A6蛋白表达与肺腺癌临床病理特征的关系

RNPC1表达与肺腺癌患者吸烟、TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)；S100A6蛋白表达与肺腺癌患者吸烟、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，见表2。

2.3 相关性分析

RNPC1与S100A6蛋白表达双阳性55例，双阴性13例，经Spearman秩相关分析，RNPC1与S100A6蛋白表达呈正相关(rs=0.595，P<0.05)，见表3。

3 讨论

在长期吸烟的人群中，肺泡上皮细胞的癌变风险可显著的上升。长期外在的病理性刺激因素及内在的遗传易感基因的携带等，均能够导致肺癌发生风险的上升[7,8]。治疗随访研究显示，现阶段临床上肺癌手术治疗后的病情缓解率较低，同时综合性措施治疗后的患者5年内的病死率并无显著的下降[9,10]。而免疫靶向治疗能够在辅助治疗肺癌的过程中发挥一定的作用，本次研究对于肺癌病灶组织中的肿瘤相关蛋白的分析，能够为临床上肺癌患者的免疫靶向治疗提供理论作用靶点，并能够为肺癌患者的临床病情评估提供免疫组化分析指标。

×400；A：肺腺癌组织RNPC1阳性表达；B：肺腺癌组织S100A6蛋白阳性表达；C：癌旁组织RNPC1阳性表达；D：癌旁组织S100A6蛋白阳性表达

表2 RNPC1、S100A6蛋白表达与肺腺癌临床病理特征的关系 例(%)

表3 相关性分析

RNPC1对于RNA的结合作用，能够交错式激活患者体内的癌细胞转录调控因子，提高癌细胞DNA的扩增速度。RNPC1对于微小RNA的调控作用，能够促进癌细胞膜表面糖蛋白配体的激活，促进癌细胞细胞周期调控依赖性蛋白激活的转录及翻译，增加G1/S期比例[11]；S100A6蛋白能够通过结合钙离子，提高胶原蛋白酶的激活，促进细胞间质成分的分解。S100A6蛋白的表达还能够提高癌细胞的突破基底膜的能力，导致癌细胞对于间质细胞、血管内皮细胞的粘附能力的显著增强。同时基础领域的研究也证实，S100A6蛋白的上升能够影响上皮细胞的分化成熟过程，导致癌细胞低分化和中度分化比例的上升[12]。部分研究者报道了S100A6蛋白在肺癌患者中的表达情况，认为S100A6蛋白的表达上升能够显著促进肺癌的病情进展，导致患者放化疗敏感性的下降[4]，但在肺腺癌患者中的研究较少。

本次研究通过对于肺腺癌患者免疫组化的分析研究提示，RNPC1、S100A6蛋白在肺腺癌病灶组织中的表达阳性率明显的上升，高于癌旁组织，差异较为明显，提示了RNPC1、S100A6蛋白的高表达均能够影响到肺腺癌的病情进展过程。通过汇集不同的相关文献，笔者认为这主要由于RNPC1、S100A6蛋白的下列的作用有关[13,14]：(1)RNPC1的表达上升，能够影响到转录RNA的调控水平，导致下游肺泡上皮细胞的转录和增殖活性明显的增强；(2)S100A6的表达上升，能够通过促进上皮-间质转化过程，进而提高了肺泡上皮细胞的浸润能力。南岩东等[15]研究者在探讨了不同病情的肺腺癌患者免疫组化资料的过程中发现，在肺腺癌患者中，S100A6的表达阳性率可平均上升30%以上，特别是在短期内病情进展速度较快或者高肿瘤负荷较高的患者中，S100A6蛋白的表达阳性率可进一步的升高。免疫组化染色分析可见，在细胞异型性较为明显的区域，RNPC1、S100A6蛋白的染色强度较深，推测二者可能在影响到癌细胞的形态学改变方面发挥了重要作用。在探讨RNPC1、S100A6蛋白的表达与肺腺癌患者临床病理特征的过程中发现，发生了淋巴结转移、癌细胞分化程度较差或者临床分期较晚的患者中，RNPC1蛋白的表达阳性率可显著的上升，提示了RNPC1蛋白对于肺腺癌临床病理特征进展的影响，这主要由于RNPC1的表达能够提高癌细胞粘附淋巴结内皮细胞的能力，促进癌细胞对于临近正常肺泡上皮组织的浸润过程；而在临床分期较晚或者发生淋巴结转移的患者中，S100A6蛋白的表达也明显的上升，但并未发现S100A6蛋白的表达与癌细胞分化程度的关系，提示S100A6蛋白并不能诱导癌细胞分化成熟过程。相关关系分析也可见，RNPC1与S100A6蛋白表达呈正相关，提示RNPC1、S100A6在促进肺腺癌的病情进展过程中可能发挥了一定协同作用。

综上所述，RNPC1、S100A6在肺腺癌患者中的表达阳性率明显的上升，RNPC1、S100A6的表达与肺腺癌患者临床病理特征的进展密切相关。后续临床相关研究可以深入探讨RNPC1、S100A6的表达与肺腺癌患者的临床转归的关系。