吸烟对肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表达的影响观察*

李伟坚 林常青 陈中红

惠州市中心人民医院，广东 惠州 516000

肺癌是常见的恶性肿瘤之一，近年来，随着我国工业化速度加快和环境污染日益严重，我国肺癌发病率及死亡率均呈上升趋势[1]。预计到2025年，我国肺癌人数将达到100万，成为世界上肺癌患病人数最多的国家[2]。肺腺癌是肺癌常见的组织学类型，约占肺癌的50%，不同分型的肺腺癌在临床、影像学、遗传学及病理学上都有较大的差异[3]。肺腺癌的发病年龄较小，且多见于女性，临床治疗效果不如鳞癌，通常术后5年生存率小于10%[4]。目前，大众对吸烟和肺癌之间的关联均有所了解，越来越多的人通过戒烟来保护自己的身体健康，但与吸烟密切相关的鳞癌的患病率明显低于与吸烟相关性不高的腺癌。有研究发现戒烟可延长肺腺癌患者的生存期，对患者的预后具有极其重要的意义[2]。因此，本研究探究吸烟对肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表达的影响，旨在研究吸烟对肺腺癌患者的影响，为临床提供更多的科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年2月—2017年2月于我院就诊并确诊为肺腺癌患者86例，所有患者均经组织病理学或细胞学检查确诊为肺腺癌，根据患者是否吸烟将其分为吸烟组(n=48)和非吸烟组(n=38)。吸烟组男21例，女27例，年龄32～81岁，平均年龄(56.87±15.35)岁，按最新国际肺癌TNM分期标准(第八版)分为Ⅰ期3例，Ⅱ期5例，Ⅲa期14例，Ⅲb期12例，Ⅳ期14例；非吸烟组男16例，女22例，年龄31～81岁，平均年龄(57.29±16.04)岁，按最新国际肺癌TNM分期标准(第八版)分为Ⅰ期2例，Ⅱ期5例，Ⅲa期11例，Ⅲb期9例，Ⅳ期11例。两组患者的年龄、性别和TNM分期等一般资料无明显差异(P<0.05)，具有可比性。

1.2 方法

采用肺功能仪(型号：Masterscreen系列，德国耶格公司制备)对两组患者进行肺功能测定。检测指标包括：肺活量(VC)、第一秒用力呼出量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼出量/用力肺活量(FEV1/FVC)、最大呼气流速(PEF)、最大通气量(MVV)、残气量/肺总量(RV/TLC)、一氧化碳弥散量(DLCO)及弥散系数(DLCO/VA)，测试前输入患者身高、体重、性别、年龄等指标，由电脑自动生成预测值，结果由实际值/预测值×100%表示。以电话随访的方式统计患者生存期，生存期截止统计至2018年4月30日。分别统计生存期≤6个月，6～12个月，及>12个月的患者例数。取患者癌组织，样品储存于-80℃。样品冰上研磨成粉末状后加入Trizol提取总RNA，应用Prime Script? miRNA cDNA Synthesis Kit(宝生物工程有限公司制备)将microRNA反转录成cDNA，采用RT-PCR法测定miR-373和BRF2的相对表达水平。miR-373的引物为：5’-GTAGCAGGATGGCCCTAGAC-3’(正向)；5’-CGCCCTCTGAACCTTCTCTT-3’(反向)。BRF2的引物为：5’-GTGAAGCTCCTGGGACTGGAT-3’(正向)；5’-GTATTTGGCTGGCACAGAAGG-3’(反向)。PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳分析。

1.3 观察指标

对比两组患者的肺功能情况；对比两组患者生存期；对比两组患者病变组织的miR-373和BRF2表达水平。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 两组患者肺功能对比

吸烟组的肺通气功能指标RV及RV/TCL均明显高于非吸烟组，且差异具有统计学意义(P<0.05)；吸烟组的小气道功能指标V25、V25%、V50及V50%均明显低于非吸烟组，且差异具有统计学意义(P<0.05)；吸烟组的肺弥散功能指标DLCO、DLCO/VA、DLCO%及DLCO/VA%均低于非吸烟组，其中DLCO、DLCO/VA及DLCO%指标与非吸烟组对比，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 两组患者生存期对比

吸烟组生存期>12个月有8例(16.67%)，非吸烟组生存期>12个月有8例(36.84%)，吸烟组>12个月生存率明显低于非吸烟组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3 两组患者病变组织的miR-373和BRF2表达水平对比

两组患者的miR-373表达见图1a-b，BRF2表达见图1c-d，吸烟组患者病变组织中的miR-373和BRF2表达水平均高于非吸烟组，且差异具有统计学意义(miR-373：t=10.392，P=0.000<0.05，BRF2：t=7.258，P=0.000<0.05)。

表1 两组患者肺功能对比

表2 两组患者生存期对比[n(%)]

a)miR-373 RT-PCR电泳图

b)miR-373相对表达量

c)BRF2 RT-PCR电泳图

d)BRF2相对表达量

3 讨 论

肺癌属于恶性呼吸系统肿瘤，且近年来发病率呈上升趋势，肺癌的治愈率较低，主要原因为大多数肺癌患者发现时肺癌已发展为中晚期，仅有15%患者诊断为早期，且肺癌的五年生存率仅为20%左右[6]。肺癌可非为鳞癌、腺癌、未分化癌及肺泡细胞癌，其中，肺腺癌约占肺癌的50%[7]，腺癌起源于支气管粘膜上皮，也有少数起源于大支气管的粘液腺，腺癌的发病年龄较小，女性发病率高[8]，早期一般没有明显的临床症状。1912年，Adler提出吸烟与肺癌之间存在密切关系，现研究发现，吸烟易导致肺鳞癌和小细胞肺癌[9]，但腺癌多发于不吸烟女性[10]，有探究提示女性肺腺癌发病可能与厨房油烟及被动吸烟有关[11-12]。尹惠敏等[2]研究发现，戒烟可延长肺腺癌患者的生存期，对患者的预后具有极其重要的意义。因此，本研究探究吸烟对肺腺癌患者肺功能和生存期的影响，旨在研究吸烟对肺腺癌患者的影响，为临床提供更多的科学依据。研究发现，吸烟组的肺通气功能指标RV及RV/TCL均明显高于非吸烟组(P<0.05)；小气道功能指标V25、V25%、V50及V50%均明显低于非吸烟组(P<0.05)。由此提示，吸烟会进一步影响肺癌患者的肺通气功能，加重肺癌患者肺通气功能障碍。肺弥散功能是指氧气和二氧化碳通过肺泡和肺毛细血管进行气体交换的过程，评价肺泡和肺毛细血管进行气体交换的效率，是肺换气功能组成的重要部分[13]。正常情况下，人的实际肺弥散功能/预测值>80%。本研究结果显示，两组患者的实际肺弥散功能/预测值均小于80%，吸烟组的肺弥散功能指标DLCO、DLCO/VA、DLCO%及DLCO/VA%均低于非吸烟组，其中DLCO、DLCO/VA及DLCO%指标与非吸烟组对比，差异具有统计学意义(P<0.05)。提示，肺腺癌会导致患者的肺弥散功能下降，且吸烟会进一步导致患者的肺弥散功能下降。本研究还发现，吸烟组生存期>12个月有8例(16.67%)，非吸烟组生存期>12个月有8例(36.84%)，吸烟组>12个月生存率明显低于非吸烟组(P<0.05)，与尹惠敏等[2]研究相一致，由此可得，吸烟不利于肺腺癌患者，可能会缩短患者的生存期。

研究发现，miRNA与癌症发生密切相关[14]，在肿瘤发生中起重要的作用，现已在卵巢癌[15]、胃癌[16]、宫颈癌[17]及肺癌[18]等肿瘤中被证实。研究发现，miR-373与肿瘤发生具有关联性，在人胃癌细胞系MKN-45细胞中发现miR-373表达水平明显升高，miR-373还对肿瘤细胞周期具有调节性，能促进肿瘤细胞繁殖[19]。TFⅡB相关因子2(BRF2)为编码BRF2蛋白的基因，在miRNA产生的过程中起重要作用。因此，本研究还探究了吸烟对肺腺癌患者miR-373和BRF2基因表达的影响，研究发现，吸烟组患者病变组织中的miR-373和BRF2基因表达水平均高于非吸烟组(P<0.05)。由此说明，吸烟能使miR-373和BRF2基因水平升高，不利于肺腺癌患者。

综上所述，吸烟会影响肺腺癌患者的肺功能，会缩短肺腺癌患者的生存期，不利于患者预后，应鼓励吸烟的肺腺癌患者戒烟。