APP下载

白芷和金银花提取物的抗氧化研究

2019-05-23曾英男顾宇航

农产品加工 2019年9期
关键词:白芷绿原光度

曾英男,顾宇航,刘 佳

(吉林农业科技学院食品工程学院,吉林吉林 132101)

0 引言

天然提取物抗氧化的机理在于其含有的R-OH可以形成氢自由基,并且可以通过消除一些自由基的活性[1],起到良好的抗氧化作用。

近年来,研究人员逐渐从白芷中发现了新结构的香豆素类化合物[2],香豆素类成分主要存在白芷的根部,主要有欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、白当归素等。金银花中含有丰富的绿原酸等活性物质。从金银花和白芷提取活性成分并研究抗氧化性,为进一步开发新型食品抗氧化剂提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

白芷、金银花,当地超市购买;DPPH·,福州飞净生物科技有限公司提供;欧前胡素标准品(纯度98%)、绿原酸标准品(纯度98%)、ABTS+,合肥博美生物科技有限责任公司提供。

1.2 仪器

KQ-100DE型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司产品;GFL-45型电热鼓风干燥箱,天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司产品;Cary 60型紫外可见分光光度计,安捷伦科技有限公司产品;A-88型组织粉碎机,常州市金坛晨阳电子仪器厂产品;YRE-2000A型旋转蒸发仪,海亚荣生化仪器厂产品。

2 试验方法

2.1 欧前胡素标准曲线的测定

精密称取欧前胡素标准品8.0 mg,甲醇溶解后定容至100 mL。摇匀后配制质量浓度为0.002,0.004,0.008,0.012,0.016,0.020 mg/mL[3]。以甲醇作为空白对照,利用紫外分光光度计于波长200~400 nm处进行扫描,其标准品溶液于波长300 nm处有最大峰值,所以于波长300 nm处测定吸光度,记录吸光度并计算与欧前胡素含量间的关系。

2.2 白芷提取物

白芷干燥根切片粉碎后过40目筛,准确称取50.00 g,按料液比1∶20(g∶mL),乙醇体积分数70%,在超声功率100 W,超声时间20 min,常温条件下,进行超声提取。过滤后减压浓缩除去乙醇有机溶剂,提取液适当稀释用于测定香豆素的含量。最后在45℃恒温烘箱中进行干燥,制得白芷提取物。

式中:C——测定白芷提取液中欧前胡素质量浓度,mg/mL;

V——提取液的体积,mL;

m——白芷粉末的质量,g。

2.3 绿原酸标准曲线的测定

准确称取绿原酸标准品20.0 mg,用适量体积分数70%乙醇溶解后定容至100 mL。取0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL(相当于 0.004,0.008,0.016,0.024,0.032,0.040 mg/mL) 溶液到 25 mL容量瓶,用70%乙醇定容后摇匀[4]。以体积分数70%乙醇作为空白对照,利用紫外分光光度计在波长200~400 nm处进行扫描,其标准品溶液在330 nm处有最大峰值,所以于波长330nm处测定吸光度,记录吸光度并计算其与绿原酸含量间的关系。

式中:C——测定金银花提取液中绿原酸质量浓度,mg/mL;

V——提取液的体积,mL;

m——金银花粉末质量,g。

2.4 金银花提取物

金银花粉碎后过40目筛,准确称取50.00 g按料液比为1∶30(g∶mL),乙醇体积分数为60%,在浸提温度为50℃,超声时间为60 min,超声功率为600 W的条件下进行超声提取。过滤后减压浓缩除去乙醇有机溶剂,提取液适当稀释用于测定绿原酸的含量。最后在45℃恒温烘箱中进行干燥,制得金银花提取物。

2.5 DPPH·清除能力的测定

参考文献[5],准确称取DPPH·20 mg,用无水乙醇溶解定容至50 mL,此时浓度为1.014 4 mmol/L。干燥后的白芷、金银花提取物取0.01 g用水溶解后适当稀释制得样品液;将0.01 g维C用水溶解适当稀释制得对照液,取样品液与2 mL DPPH·溶液混合后避光反应20 min,利用紫外分光光度计于波长517 nm处测定吸光度为Ai;取2 mL样品液与2 mL水混合后避光反应,同样条件下测定吸光度为Aj;2 mL DPPH·溶液和水混合后避光反应,测定吸光度为Ac,同样条件下重复3次,计算平均值。

2.6 ABTS+清除能力的测定

参考文献[5],配制浓度为7 mmol/L ABTS+溶液:准确称取ABTS+38.41 mg用水溶解后定容10 mL;浓度为140 mmol/L过硫酸钾溶液的配制:过硫酸钾378.45 mg用水溶解后定容至10 mL。取10 mL将ABTS+溶液和179μL过硫酸钾溶液混合,避光保存12~16 h,再用pH值7.4 PBS溶液稀释至适当浓度,使其于波长734 nm处的吸光度为0.70±0.02,即为ABTS+工作液。

干燥后的白芷、金银花提取物取0.01 g用水溶解后适当稀释制得样品液;将0.01 g维C用水溶解适当稀释制得对照液。PBS溶液调零,取样品1 mL与ABTS+工作液4 mL室温避光反应6 min,于波长734 nm处测定吸光度为As,PBS 1 mL和以ABTS+溶液4 mL室温避光反应6 min测定吸光度为A0,同样条件下重复3次,计算平均值。

2.7 数据处理与分析

采用软件Prism 7.0对试验数据进行分析、绘图。

3 结果与分析

3.1 欧前胡素标准曲线的测定

欧前胡素标准曲线见图1。

图1 欧前胡素标准曲线

由图1可知,欧前胡素的标准曲线为Y=56.298X+0.066 8,R2=0.991 9,在 0.002~0.020 mg/mL 质量浓度范围内线性良好。其中,横坐标X为欧前胡素标准品溶液质量浓度,纵坐标Y为吸光度。

样品通过测定吸光度后,计算出白芷提取香豆素得率为3.4 mg/g。

3.2 绿原酸标准曲线的测定

绿原酸标准曲线见图2。

图2 绿原酸标准曲线

由图2可知,绿原酸标准曲线为Y=40.135X+ 0.009 5,R2=0.999 8,在0.004~0.040 mg/mL质量浓度范围内线性良好。其中横坐标X为绿原酸标准品溶液浓度,纵坐标Y为吸光度。样品通过测定吸光度后,计算出金银花提取的绿原酸得率为70.2 mg/g。

3.3 白芷和金银花提取物对DPPH·的清除能力

白芷和金银花提取物对DPPH·清除能力见图3。

由图4可知,白芷提取物和金银花提取物在质量浓度为0.2 mg/mL和0.5 mg/mL时,清除ABTS+自由基均高于同质量浓度的维C,且金银花清除自由基能力优于白芷提取物。另外,提取物的质量浓度在0.5 mg/mL时ABTS+清除率高于0.2 mg/mL,说明在这个范围内,提取物的抗氧化作用与提取物的质量浓度呈正相关,与清除DPPH·的试验结论一致。

图3 白芷和金银花提取物对DPPH·清除能力

4 结论

由图3可知,在白芷提取物DPPH·清除能力在0.2 mg/mL较弱,与维C较为相近,但是当质量浓度在0.4,0.6 mg/mL时清除效果优于维C。金银花提取物的抗氧化效果均优于维C和白芷提取物。同时,金银花和白芷提取物随着质量浓度升高清除作用增加,说明抗氧化作用与提取物的质量浓度呈正相关。

3.4 白芷和金银花提取物对ABTS+的清除能力

在食品中抗氧化剂的应用十分重要,而天然抗氧化剂与化学合成抗氧化剂相比,具有安全、低毒的优点,甚至是可以作为功能性的添加剂。以白芷、金银花为原料,分别用超声方法以乙醇作为溶剂提取天然活性成分,其中白芷中的香豆素得率为3.4 mg/g,金银花中的绿原酸得率为70.2 mg/g,提取液经过浓缩后干燥并研磨为粉末,用水溶解后测定DPPH·,ABTS+的清除能力,发现在白芷提取物在质量浓度为0.4,0.6 mg/mL清除DPPH·能力高于同质量浓度的维C,而金银花清除DPPH·能力较高。白芷提取物和金银花提取物的质量浓度分别在0.2 mg/mL和0.5 mg/mL时清除ABTS+能力均高于维C。以上试验结果均证明,白芷和金银花的提取物均具有较强的清除自由基的能力,抗氧化性较强,可作为天然的抗氧化剂。

图4 白芷和金银花提取物对ABTS+的清除能力

猜你喜欢

白芷绿原光度
一种基于SOM神经网络中药材分类识别系统
五类栽培白芷与兴安白芷的挥发油成分及其化学亲缘关系
白芷药食同源研究进展
不同银花类药材提取的绿原酸含量研究
白芷善治头痛
HPLC法同时测定细叶亚菊中绿原酸和异绿原酸A的含量
不同甜叶菊品种叶中绿原酸类成分的比较研究
乘用车后回复反射器光度性能试验研究
皎皎月光
小心跳舞