SPE-UPLC测定裱花蛋糕中的8种合成色素

2019-05-18周刚

质量安全与检验检测 2019年2期

周刚

（邢台市食品药品检验所河北邢台 054000）

1 前言

目前，合成色素的检测主要依据国标GB 5009.35—2016《食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》[1]、GB 5009.141—2016《食品安全国家标准食品中诱惑红的测定》[2]以及SN/T 1743—2006《食品中的诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测高效液相色谱法》[3]，完成对8种合成色素的检测需采用多个液相系统。UPLC 法比传统液相色谱法大幅度地改善了分析速度、分离度以及灵敏度，文献中提及的检测方法多是针对合成色素中的一种或几种，样品前处理一般都采用聚酰胺吸附法或是液液萃取法(赤藓红)等，这些前处理方法回收率低、操作费时繁琐、重现性差[4,5]。关于柠檬黄、新红、胭脂红、苋菜红、日落黄、亮蓝、赤藓红、诱惑红这8种合成色素在裱花蛋糕中同时检测的报道尚未出现。本实验采用Pro ElutPWA 固相萃取柱对样品进行前处理，利用UPLC 分离技术，对8种常见的合成色素进行检测。

2 设备及方法

2.1 仪器和试剂

H-Class UPLC 仪（PDA 检测器，沃特世，美国）；Pro ElutPWA-2 SPE 柱（迪马科技，中国）；新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝、赤藓红、诱惑红等色素标准溶液均购自中国计量科学研究院；甲醇、乙腈（均为色谱纯，美国Fisher 公司）；裱花蛋糕样品均购自本地蛋糕店。

2.2 方法

2.2.1 色谱条件

2.2.2 标准溶液的配制与曲线绘制

分别准确称量8种色素标准品各100.0 mg，置于100 mL 容量瓶中，用纯水溶解稀释至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备液。将8种标准储备液配制成适当浓度的混合标准系列工作溶液，过0.22 μm 尼龙滤膜后，按 2.2.1 中色谱条件进 UPLC上机。以标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3 样品的前处理

处理方法(SPE 法)：取 2 g 样品（精确到 0.001 g）与20 mL 提取剂 [乙醇-乙腈-甲醇-氨水（30:30:30:10）]混合，涡旋 2 min，超声提取 10 min，6 000 r/min 离心3 min，收集上清液；将下层残留物依次用10 mL 提取剂重复提取2 次，合并上清液；将上清液在45℃ 水浴条件下，减压蒸馏6 mL，再加入80 μL 甲酸，混匀，待净化。SPE 柱（使用前先用5 mL 甲醇和5 mL 水预淋洗并保持柱体湿润，待用），待测样品以1.0 mL/min的速度过柱，弃去流出液；待样品液全部流出后，再用4 mL 水淋洗，将SPE 柱抽干；加入6 mL 2%氨水甲醇溶液，收集流出液；将洗脱液在45℃下氮气吹至约 0.5 mL，再用水定容至 1 mL，过 0.22 μm 尼龙滤膜后，上UPLC 分析。

2.2.4 样品上机分析

在相同的色谱条件下，将经上述处理后样品溶液上机，以保留时间定性，峰面积进行定量。

3 结果与分析

3.1 色谱条件的优化

以 A（0.02 mol/L 乙酸铵溶液），B（乙腈）为流动相，流速0.3 mL/min。调整有机相的比例，优化梯度洗脱的条件，保证8种色素能够完全分离并有尖锐的峰形，在相同的色谱条件下，用各对应色素单一标准溶液确定8种色素的出峰顺序和保留时间。梯度洗脱程序：5%B（0～1 min），90%B（2.3～3.3 min），5%B（3.5～7.0 min）。其中，柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、赤藓红、诱惑红在240 nm 波长左右响应信号值最高，而亮蓝在307 nm 波长左右才有较好响应信号值。因此，仪器设定采集时间段如下：0～2.8 min 采集 240 nm 图谱，2.8～3.2 min 采集 307 nm 图谱（亮蓝出峰位置），3.2～4.0 min 采集 240 nm 图谱，可在 7 min 内对8 合成色素进行完全分离，见图1。