一种快速取大鼠膝关节滑膜的方法

邓 超 孔立红

(湖北中医药大学,武汉 430060)

类风湿性关节炎是一种常见的免疫性疾病，该病以关节滑膜组织破坏为主要病理特征。在有关类风湿性关节炎的实验研究中，常常需要取大鼠的滑膜组织，如何快速准确地取出大鼠的滑膜组织是实验成败的关键之一[1]。取大鼠膝关节滑膜的传统方法[2-3]是：将大鼠仰位固定，沿后肢膝关节正中纵行切开直至暴露出以膝关节为中心约3 cm×3 cm的区域，沿髌骨上沿向下切割至髌骨，再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨，此时即打开膝关节腔，见由髌骨下极向下延续的一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。用眼科镊钝性分离关节囊的滑膜层和纤维层，完整剥离滑膜组织，最后以眼科镊轻轻夹住其中央，用眼科剪完整剪下滑膜组织。这种方法效率比较低，通过大量的实践我们总结出一种更加快速可行的取大鼠膝关节滑膜的方法，现介绍如下：

1 材料与方法

1.1 材料

泡沫板，注射器针头，手术剪，手术刀柄，15号手术刀，眼科剪，眼科镊。

1.2 实验动物

Wistar大鼠，来源于湖北省实验动物中心，体质量200～220 g，许可证号：SCXK(鄂)2008-0005。

1.3 操作方法

1.3.1将大鼠用颈椎脱臼法处死，用注射器针头仰位固定于泡沫板子上，后肢外展外旋屈膝固定。

1.3.2用镊子捏起膝关节周围皮毛，用手术剪剪开皮毛、切开皮下筋膜，暴露出大鼠膝关节周围肌肉(如图1所示)。

1.3.3用15号手术刀剥离大鼠膝关节周围肌肉，此时以髌韧带为标志，剥离髌韧带上方及两侧的肌肉群(如图2所示)。

1.3.4小心横向切开髌韧带下方止点(胫骨结节处)，用镊子从下向上捏起髌韧带，此时即可看到髌下脂肪垫，小心剥离髌下脂肪垫，此时即可看到以髌骨为中心的关节囊(如图3所示)。

1.3.5用眼科镊钝性分离表面的纤维层，即暴露出滑膜层。用眼科镊捏起髌韧带，即可看到以髌骨为中心的滑膜组织。用眼科剪小心剪下滑膜组织即可(如图4所示)。

图1 显露大鼠膝关节周围肌肉过程Fig.1 The process ofexposing musclearoundknee joint of rat

图2 剥离大鼠膝关节周围肌肉过程Fig.2 The process ofstripping muscle aroundknee joint of rat

图3 剥离大鼠膝关节髌下脂肪垫过程Fig.3 The process of strippingsubpatellar pad ofkeen joint of rat

图4 大鼠膝关节滑膜组织Fig.4 Synovial tissueof rat knee joint

2 讨论

2.1 此方法较传统方法的优势

(1)先剥离周围的肌肉，能为后面暴露关节打好基础，较传统方法先纵行切开再向两侧分离可行性更高。而且肌肉在关节外，在没切到髌骨之前可以髌韧带为标志切除周围肌肉，操作时也可以粗糙一些，只要不切到髌韧带并不会破坏关节内的滑膜组织，因此既快速又能为后面操作带来便利；(2)横行切断髌韧带下方止点处，用镊子提起髌韧带，以髌韧带为着力点向上分离，能更好地将滑膜组织完整地分离。

2.2 此方法的局限性

此方法是一种快速可行获取大鼠滑膜组织的方法，但须要注意的是，取得的滑膜组织可能会有其他组织附着(如：脂肪组织，肌肉组织)，可满足一般实验要求，如做滑膜组织的病理切片，生化(ELISA)，蛋白、基因分析(western blot、PCR)等，需在无菌的条件下做滑膜细胞原代培养后进一步提取。