基于多媒体显微诊断技术评价养生健身方干预亚健康状态的临床研究※

张 磊 刘迎迎 于 杰 郭伟星 李运伦

（1 山东中医药大学第一临床医学院，山东 济南 250355；2 山东中医药大学附属医院心病科，山东 济南 250014；3 山东中医药大学附属医院肾病科，山东 济南 250014；4 山东省医学科学院，山东 济南 250355）

亚健康状态是指机体虽无明显的疾病诊断，却过早表现出活力降低、反应能力减弱、适应性减退，是介于健康与疾病之间的一类生理功能低下状态［1］。根据世界卫生组织（WHO）的健康评估标准分析20 000例样本，其中真正健康的只占8%，亚健康占 85%，不健康为7%［2］。我国目前有70%的人不同程度地处于亚健康状态，在高级知识分子、企业管理者中发生率可高达85%以上［3］。随着生活水平的提高和人们对健康的重视，“亚健康”状态己经成为当今不容忽视的健康问题，成为国内外专家关注和研究的热点。如果亚健康状态不及时加以干预，它有可能进一步发展为疾病，当然也可通过积极的干预使机体恢复到健康状态，这种认识恰好与中医学“治未病”的思想不谋而合。根据亚健康状态的中医病机，结合多年的临床经验，课题组提出“调阴阳，和气血，充形养神”的治则治法，藉此组方——养生健身方，治疗亚健康状态，取得了满意的疗效。超高倍多媒体显微诊断仪（THMMDI）是应用先进的氧自由基理论、全息胚学说、细胞形态学论，可检测人体潜在疾病，对人体健康状态一目了然，是一种直观、全面、准确和简便的健康检测手段［4］。本研究拟通过THMMDI仪器筛选特征性指标，以此评价养生健身方干预亚健康状态的临床疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年7月1日—2018年5月31日，项目组成员按照亚健康的纳入和排除标准，在山东中医药大学附属医院心病科病房、保健科病房及门诊的患者中选取亚健康状态人群60例纳入试验组，采用随机数字表的完全随机设计方法分为中药试验组和模拟剂试验组各30例。同时按照健康人群的纳入和排除标准，深入济南市历下区平安苑社区、环山社区等开展义诊活动，选取健康人群60例纳入对照组。2组患者的年龄构成、平均年龄、体质量、身高、体质量指数、工作性质构成等方面差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 纳入标准 根据2006年中华中医药学会发布的《亚健康中医临床指南》的相关标准［5］，制定试验组纳入标准：符合亚健康状态诊断标准；曾有持续3个月及以上，出现不适或社会适应能力减退，持续1个月以上症状不能缓解者；经体检证实，相关症状实验室指标未见异常，或轻度改变但从诊断角度不能达到疾病的诊断标准者；无相关器质性病变或精神类疾病者；存在某类疾病，但经诊断无需用药物维持或改善症状者；年龄18～65岁（包括18岁和65岁）；知情同意并签署知情同意书。对照组纳入标准：体检证实实验室指标皆处于正常范围内，且不符合亚健康诊断标准者。

1.3 排除标准 18岁以下或65岁以上者；患有疾病需要治疗的人群；相关症状实验室指标异常者，达到相关疾病的诊断标准者；既往患有精神疾患病史者；过敏体质或对各种药物过敏者；妊娠，或准备妊娠，或哺乳期妇女；近3个月内接受过其它新药临床试验者；过敏体质或多种药物过敏者。

1.4 治疗方法 中药试验组给予养生健身方干预，其组成为：太子参12 g，麦冬9 g，北五味子6 g，黄芪12 g，丹参9 g，淫羊藿9 g，炒酸枣仁12 g。由山东中医药大学附属医院制剂室制备成片剂，0.5 g/片，口服，一次5片，1 d 3次，12周为1个疗程。为排除药物因素的干扰，在治疗期间停用其它药物和干预措施。模拟剂试验组给予模拟剂干预，其组成为：淀粉占90%、原处方成分10%，以增加模拟效果；约含有10%原处方剂量（以主成分计），其有效性可忽略，相当于安慰剂，服用方法同上。对照组不进行任何药物干预。

1.5 观察指标 消毒被检者右手小拇指后，采血针快速刺入皮肤1 mm左右。最好血液能自动涌出，血珠能粘于指尖上。以拇指与食指持玻片两端，靠玻片自身重量垂直向下连续沾取约6～7滴血。此玻片放于柜内，让血滴自动干燥，这为干血片。以消毒棉球擦去指尖血，再挤出血滴，用玻片沾血珠，加盖玻片，使血液充分扩散至整个涂片，这为活血片。以THMMDI的诊断方法、标准对每人作出健康状态的描述。其中，活血片的评估主要观察是否存在红细胞变形情况、红细胞聚集、血小板聚集现象，血中是否有乳糜微粒、胆固醇结晶、血小板针状体等。干血片的评估主要观察Rots块及其比例，Rots块是自由基损伤后的轨迹，形状为白色多形体，并可有少量内含物的块状结构，Rots块分级：0级：健康级，无Rots块；Ⅰ级：低于10%的红细胞团块被Rots团块取代；Ⅱ级：10%～30%的红细胞团块被Rots团块取代；Ⅲ级：30%以上红细胞团块被Rots团块取代［6］。将以上指标经Logistic回归分析、判别分析筛选出亚健康状态的特征性指标；然后通过对照特征性指标干预前后的变化，评价养生健身方调治亚健康状态的疗效。

1.6 统计学方法 对有效病例进行总结、整理、统计，资料须客观、全面、准确，对资料数据不得随意舍取，全部数据均应用SPSS 16.0统计软件作统计学处理，根据观察指标和数据的不同，分别采用卡方检验、Logistic回归分析、判别分析等相应的统计处理方法；所有计量资料平均数±标准差（）表示。以P＜0.05为差异具有统计学意义，P＜0.01差异具有显著性统计学意义，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2组人群活血片状况比较 2组人群活血片状况比较，经 х2检验可知： х2值分别为 4.126、7.033、9.187、18.502、 14.803， P 值 分 别 为 0.042、 0.008、 0.002、0.000、0.000。与对照组相比，除红细胞聚集率方面P＜0.05，差异有统计学意义外；其余皆小于0.01，有显著性统计学意义差异。统计结论显示：试验组（亚健康人群）的活血片中红细胞聚集率、血小板聚集率、乳糜微粒出现率、胆固醇结晶形成率、血小板针状体形成率均大于对照组（健康人群），差异有统计学意义。见表1。

表1 2组人群活血片状况比较 [例(%)]

2.2 2组人群干血片中Rots团块出现率比较 2组人群干血片状况比较，经 х2检验可知： х2值为80.333，自由度df为3，近似P值为0.000，差异有显著性统计学意义。统计结论显示：试验组（亚健康人群）Rots团块出现率高于对照组（健康人群），差异有统计学意义。见表2。

表2 2组人群干血片中Rots团块出现率比较 [例(%)]

2.3 THMMDI微观指标对亚健康状态影响强度的两分类Logistic多元逐步回归分析 设定Y是因变量，其中1为试验组（亚健康人群），2为对照组（健康人群），以2为参照，1与2进行对比。X1、X2……X6为自变量分别代表THMMDI的6项微观指标；由于以上指标皆属于相关率的评价，无法作为一种维度纳入条目池，故需要对以上指标进行赋值量化。其中，红细胞聚集正常赋值为1，红细胞聚集亢进赋值为2；血小板聚集正常赋值为1，血小板聚集亢进赋值为2；乳糜微粒数量正常赋值为1；乳糜微粒数量增多赋值为2；胆固醇结晶正常赋值为1，胆固醇结晶过多赋值为2；血小板针状体正常赋值为1，血小板针状体异常赋值为2；Rots块正常赋值为1，Rots块增多赋值为2。应用两分类Logistic回归分析，α=0.05，以健康人群作为对照。

结果显示：试验组的各影响因素中X1、X3、X4、X6的 P＜0.05，P＜0.05的因素有统计学差异，说明THMMDI的6项微观指标中以上4项指标是亚健康人群的主要影响因素，对亚健康状态的评价具有较好的诊断价值。

2.4 THMMDI微观指标对亚健康状态影响强度的判别分析 Y是因变量，1为试验组（亚健康人群），2为对照组（健康人群）。X1、X3、X4、X6为自变量分别代表THMMDI的4个微观指标，应用判别分析法进行分析，α=0.05，判别分析过程采用非标准化典则判别和Fisher线性判别2种判别分析方法，经过层层筛选最后将对亚健康人群影响最大的X1、X3、X4、X6纳入判别函数，非标准化典则判别可以得到非标准化的规范判别函数值＞0判为1类（亚健康人群），＜0判为2类（正常人群），Y=-9.167+0.915×X1+1.470×X3+1.636×X4+2.248×X，见表3；Fisher线性判别可以得到Fisher线性判别函数值Y1＞Y2为1类，Y1＜Y2为2类，即Y1（亚健康人群） =-52.105+10.977×X1+16.393×X3+14.383×X4+22.785×X6，Y2（正常人群） =-35.727+9.342×X1+13.767×X3+11.460×X4+19.768×X6，见表4。2种判别结果都提示：THMMDI的微观指标中可以区分亚健康人群和健康人群的特征性微观指标为：X1（红细胞聚集）、X3（乳糜微粒）、X4（胆固醇结晶）、X6（Rots团块）。

表3 非标准化典则判别分析结果

表4 Fisher线性判别分析结果

2.5 养生健身方干预亚健康状态的疗效评价 将对亚健康状态有重要贡献（解释能力）的4项特征性微观指标纳入养生健身方的临床疗效评价。中药试验组与模拟剂试验组治疗前比较，经成组资料秩和检验，各特征性指标的P均＞0.05，差异无统计学意义。中药试验组经养生健身方治疗前后活血片状况比较，经 х2检验可知：х2值分别为4.444、4.593、7.177、4.344，P值分别为0.035、0.032、0.007、0.037。与对照组相比，除胆固醇结晶方面P＜0.01，有非常著性统计学差异外；其余P均＜0.05，差异有统计学意义；统计结论显示：经养生健身方干预后中药试验组的活血片中红细胞聚集率、乳糜微粒出现率、胆固醇结晶形成率、Rots团块形成率有明显下降，有统计学意义。中药试验组与模拟剂试验组治疗后比较，经 х2检验可知， х2值分别为 4.444、5.711、5.711、5.455，P值分别为0.035、0.017、0.017、0.020，皆小于0.05，差异有统计学意义；统计结论显示：中药试验组与模拟剂试验组治疗后比较，在红细胞聚集率、乳糜微粒出现率、胆固醇结晶形成率、Rots团块形成率方面有明显差异，说明经养生健身方可以有效降低活血片中红细胞聚集率、乳糜微粒出现率、胆固醇结晶形成率、Rots团块形成率，差异有统计学意义，见表5。

表5 2试验组干预前后亚健康状态人群的特征性指标变化比较[例(%)]

3 讨论

亚健康是是介于健康与疾病之间的一种灰色状态；它既能向疾病状态发展，又可朝健康状态转化，具有双向性的特点［7］，目前仍没有行之有效的预防和治疗方法。如果亚健康状态不及时加以干预，它有可能进一步发展为疾病，当然也可通过积极的干预使机体恢复到健康状态，这种认识恰好与中医学“治未病”的思想不谋而合。中医学中虽未明确提出“亚健康状态”的病名，但根据其临床所表现的主要证候，应归属于“未病”的范畴，正如《素问·四气调神大论》云［8］：“是故圣人不治已病治未病，不治已乱治未乱，此之谓也”。治未病就是要预先采取措施，防止疾病的发生、发展，体现了中医重视预防的思想。中医学认为，亚健康状态虽然临床症状表现复杂多样，但其病机实质是阴阳失衡、气血失和、形神失养，表现为脏腑功能的失常，人体进入“欲病”的亚健康状态，此时如果不能以偏纠偏、及时调养，久而久之则进入疾病状态。中医药干预亚健康状态是通过药物调理处于偏颇体质，以偏纠偏，以达到气血调和、阴阳平衡的健康状态。基于此，课题组提出“调阴阳，和气血，充形养神”的治则治法，组养生健身方（太子参、麦冬、北五味子、黄芪、丹参、淫羊藿、炒酸枣仁），治疗亚健康状态，效如桴鼓；方中太子参、麦冬益气养阴、生津除烦为君药；黄芪、五味子、炒酸枣仁补益虚损、宁心安神，增强君药之力为臣药；淫羊藿补肾壮阳，在益气养阴之品中辅以温阳，可奏阴阳互生之意，为佐药；丹参活血化瘀，可助上药直达病所，补而不滞，以为使药；诸药相合，共奏益气养阴、滋补强壮的作用，为补通兼施以补为主之良剂。

众所周知，血液是流经全身各个器官、组织运输养料和废料的，所以在血液循环过程中，它必然携带着全身脏器的疾病信息，由于脏器的损伤早期就有各种生化改变，这为亚健康状态的早期诊断提供了物质基础［9］。超高倍多媒体显微诊断仪（THMMDI）通过“活血检查”和“干血检查”，无需染色，即可观察到血液中各种有形成分的形态和活力，从而获得细胞水平的真实原始信息，通过对自由基轨迹的检查，对疾病的早期诊断做出重要提示，是一种简便而有效地诊断方法，在人群的亚健康调查中有整体评估作用［10］。钱锦康等［2］采用多媒体显微诊断仪对86名志愿者采12小指尖血制成血涂片，以THMMDI进行检测，并将所得结果与临床检测结果进行比较，THMMDI的诊断符合率为78.1%，诊断阳性符合率为90%。因此，可采用THMMDI来对亚健康状态进行评估，进而对养生健身方的疗效进行系统评价。

本研究结果显示：通过对亚健康状态人群与健康人群活血片状况比较，亚健康状态人群的活血片中红细胞聚集率、血小板聚集率、乳糜微粒出现率、胆固醇结晶形成率、血小板针状体形成率均大于健康人群（P＜0.05），有统计学意义；为了进一步优选区分度较好的特征性微观指标，先后应用Logistic回归分析及判别分析，最终筛选出4项高区分度的指标，包括X1（红细胞聚集）、X3（乳糜微粒）、X4（胆固醇结晶）、X6（Rots团块）；最后采用以上4种特征性指标对养生健身方进行疗效评价，研究结果证实养生健身方与模拟剂比较可以显著改善亚健康状态人群的以上4项特征性指标（P＜0.05），差异有统计学意义，疗效显著。

本研究不仅为亚健康状态寻找特效的新的调治方法提供了新的思路，而且为临床应用养生健身方论治亚健康状态提供了坚实的理论基础，给中医学“治未病”的思想赋予新的内涵，必将促进整个预防医学的进步与发展，从而为人民群众的健康做出新的贡献。