原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法

楚雪

众所周知，三聚氰胺是一种常见的工业原料，在纺织、橡胶、塑料等行业得到了广泛的应用，而且它的含氮量极高，如果添加到原料乳以及乳制品中，可以造成数据假象，让人们误以为里面含有较多的蛋白质成分。

典型的三聚氰胺检测方法

三聚氰胺是一种无色无味的晶体，低毒，微溶于乙醇，可溶于甲醇、甘油、乙酸，不溶于乙醚、苯酚。目前，三聚氰胺的主要用途是加工塑料、胶水、涂料和阻燃剂。虽然三聚氰胺毒性较低，但是对于幼儿而言，如果一次性摄入量过多，就会导致肾功能衰竭。我国明确规定婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的含量不得超过1.0mg/L，其他食品中三聚氰胺的含量不得超过2.0mg/L。

色谱检测。第一种，高效液相色谱法。这种方法简称HPLC法，适用的范围特别广，而且分析速度很快，能够实现自动化检测，是最普遍的检测方法。目前人们已经加大了研究的力度，并且对检测条件进行了优化，明显缩短了检测时间，而且高效液相色谱法日渐成熟，已经成为了人们检测三聚氰胺的首选方法，具体的检测内容会在本文的第二章节详细介绍。第二种，气相色谱质谱法。这种方法简称GC- MS法，灵敏度很高，但是由于三聚氰胺的分子质量较小，不容易挥发，所以需要进行衍生处理，提高挥发性，这一过程会造成一定的样品损失。如果使用硅烷进行衍生处理，可以降低外界环境的干扰，而结合反吹技术，可以省略固相萃取柱净化的环节，这样简化了处理流程。第三种，液相色谱-串联质谱法。这种方法使用三氯乙酸溶液对目标分析物进行提取，然后通过离子固相萃取柱净化，在对三聚氰胺进行检测时，方法检测低限为18μg/kg，与上述两种方法相比，这种方法更加便捷，并且可以使用外标法和内标法进行测量。

光谱检测。第一种，拉曼法。SERS技术可以增强金属表面附着物质的散射信号，并且搜集到具体的结构信息，所以检测人员可以建立一套拉曼光谱扫描系统，对原料乳与三聚氰胺颗粒的混合样本进行检测，就会发现拉曼强度与三聚氰胺的比例存在明显的线性关系。在具体的检测过程中，需要事先对原料乳以及乳制品的样品进行提取，使用三氯乙酸溶液，浓度在13%左右，这样能够除去样品中的氧化铝杂质，然后再进行SERS检测，这样可以极大地缩短检测时间。第二种，红外法。红外光谱技术不会对样品造成破坏，所以可以算作绿色技术，这种技术能够对样品进行定量分析，即使不断变化样品中三聚氰胺的浓度，也可以很好地识别未知样品中三聚氰胺的真实含量。第三种，荧光法。这种方法需要利用还原剂将胆酸钠合成为AuNCs，而三聚氰胺遇到AuNCs后，会增强荧光的效果，这种方法操作比较简单，人们可以用它对超市中出售的牛奶进行检测。另外，还可以使用试纸条对三聚氰胺进行检测，而且便于肉眼观察，检测时间大概15分钟左右。

免疫检测。目前，免疫检测方法不是十分常见，而且涉及到免疫反应，核心原理是抗原抗体的特异性结合，并且需要借助大孔径的微孔过滤膜。在制作三聚氰胺抗原时，要使用活化脂法，然后将三聚氰胺抗体以及HRP抗体作为检测层，这种方法耗时较短。

高效液相色谱法简析

试验。使用的材料包括甲醇、氨水、三氯乙酸、柠檬酸、辛烷磺酸钠以及乙酸铅。将50mL的甲醇注入到含有50mL水的试管中，得到甲醇水溶液。用天平称取10g的三氯乙酸，然后放入到1L的容量瓶中，之后用水将容量瓶注满，并且进行均匀的晃动，得到浓度为1%的三氯乙酸溶液。将5mL的氨水与95mL的甲醇混合在一起，得到浓度为5%的氨化甲醇溶液。将1g乙酸铅放入到100mL的容量瓶内，然后注满水，得到1%的乙酸铅溶液。这里需要注意的是离子对试剂缓冲液的配制，需要将2.05g的柠檬酸钠与2.18g的辛烷磺酸钠混合在一起，然后加入960mL的水，混合均匀后还要加水调节PH，当PH达到3.2时，停止加水。

使用的仪器包括高效液相色谱仪、天平、固相萃取装置、氮气吹干仪等，在配制三聚氰胺储备液时，需要准确称取0.09966g含量为99.98%的三聚氰胺标准品，并且与甲醇水溶液混合在一起，这样就得到了浓度为986.324μg/ mL的储备液，保存时要注意避光，同时温度控制在6℃左右。在试验过程中，分別选取0.06mL、0.15mL、3mL以及6mL的储备液，进行分组，并且放入到100mL的容量瓶中，用流动相定容，根据浓度的高低进行检测。HPLC的检测条件：色谱柱Kromasil100- 5- C18，流速1.2mL/min，柱温38℃，波长230nm。如果调节流动相PH，可以发现当PH下降时，目标峰拖尾情况出现的次数明显降低，所以可以在2.3～3.6之间合理调节PH。这里需要注意的是，试验过程会使用蛋白沉降剂，乙酸铅可以保证沉降效果符合要求，而使用其他物质，会发现储备液十分混浊，经过离心机处理后，过滤速度没有明显提升。

结论。三聚氰胺的线性回归方程为：Y= 81936.5X+36579.1，R=0.99999682，对同一样品进行8次检测后，发现三聚氰胺的含量基本一致，8次检测的结果分别是52.6、52.6、52.6、52.4、52.4、52.5、52.5、52.4，平均值52.5。当室温在28℃时，将流动相PH调节至3.2，可以发现拖尾情况不是十分明显，对不同的PH进行分组实验，可以发现当PH在2.9时，目标峰的拖尾现象完全消失，不同PH出峰时间和出峰面积如表1所示。

至于离子对缓冲液，黏度越小，阻抗就越小，所以出峰时间也越短，而且不会影响出峰的面积，流动相的比例可以是90+10，也可以是60+40，70+30，80+20，但是需要注意的是，黏度小到一定程度后，出峰时间不会继续缩短，经过试验发现，比例为75+25时，出峰迅速并且目标峰的面积稳定。这里我们还有注意一下回收率的问题，也就是将乙酸铅与乙腈相互调换，比如A、B、C三只试管注入25mL的三氯乙酸溶液和10mL的乙酸铅溶液，而D、E和F三只试管注入25mL的三氯乙酸溶液和10mL的乙腈溶液，对这6支试管进行进行检测，观察储备液沉淀情况，发现A、B和C试管中储备液的回收率平均值达到了96.29%，而D、E和F试管中储备液的回收率平均值为90.36%，所以乙酸铅作为沉淀剂的效果比较突出。

综上所述，人们的日常生活需要消耗大量的原料乳及乳制品，如果它们中含有三聚氰胺，那么就会严重威胁人们的身体健康，所以做好三聚氰胺的检测工作大有裨益。但是任何检测方法都不能保证万无一失，还需要具体情况具体分析，并且不断改进和优化。