高效液相色谱法测定酚类化合物

2012-01-29林芳

环境科学导刊 2012年4期

林芳

(昆明市城市排水监测站，云南昆明 650031)

1 引言

高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。高效液相色谱的特点:高压，高速，高效，高灵敏度。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:速度快，分辨率高，灵敏度高，色谱柱可反复使用，样品量少，容易回收。

酚类化合物是造成环境污染的重要工业化学品，不但有毒，而且它可使水带有讨厌的气味和颜色，因而水中酚类物质测定具有重要意义［1］。目前水质分析中常用4－氨基安替比林萃取光度法测定挥发酚［2，3］，而用高效液相色谱测对苯酚、间甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚等酚类的测定不常用。

测定中影响高相液相色谱仪测定酚类化合物出峰因素较多，本文主要通过不同梯度淋洗来研究4种酚的出峰时间，从而找到最合适的测定淋洗梯度。

2 实验部分

2.1 主要仪器和试剂

美国Waters公司高相液相色谱仪，包括2690Alliance分离系统 (四元泵及自动进样器)，2487紫外检测器。乙腈:高效液相色谱专用 (fisher公司)。甲醇:色谱纯，无酚高纯水。苯酚、间甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚标准物质。

2.2 色谱条件

色谱柱:Waters spherisorb C－18(4.6×250mm，5μm);流动相:A乙腈，B无酚高纯水。进样量:10μl。检测器:UV －280nm［4］。

2.3 标准溶液配制

苯酚、间甲酚、2，4－二氯酚、2，4，6－三氯酚标准物质浓度均为1000mg/L，将1000mg/L的标准物质用甲醇稀释成所需的混合标准工作曲线。所有标准溶液在0～4℃下保存。

2.4 定性与定量方法

采用标准物质的保留时间、色谱图定性，依次配制不同浓度的混合标准工作液进样分析，以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，外标法定量。

3 结果与讨论

3.1 淋洗梯度

梯度淋洗1:开始 (30%A+70%B)，15min(80%A+20%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗2:开始 (30%A+70%B)，15min(80%A+20%B)，16min(30%A+70%B)，20min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗3:开始 (30%A+70%B)，20min(80%A+20%B)，21min(30%A+70%B)，25min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

梯度淋洗4:开始 (30%A+70%B)，25min(80%A+20%B)，26min(30%A+70%B)，30min(30%A+70%B)，流速:1.00ml/min。

3.2 不同梯度出峰时间

梯度1出峰时间:苯酚:3.830;间甲酚:5.443;2，4－二氯酚:10.108;2，4，6－三氯酚:13.417。

梯度2出峰时间:苯酚:5.037;间甲酚:6.228;2，4－二氯酚:9.423;2，4，6－三氯酚:11.02。

梯度3出峰时间:苯酚:5.566;间甲酚:6.889;2，4－二氯酚:10.647;2，4，6－三氯酚:12.561。

梯度4出峰时间:苯酚:6.154;间甲酚:7.659;2，4－二氯酚:11.047;2，4，6－三氯酚:13.261。

从图1可以看出梯度1中4个酚类所用的出峰时间最长，虽然梯度1只用15min所有峰就分离完全，但该梯度经15min后未经缓冲就直接进入下一个样品梯度，即80%A+20%B直接就进入开始(30%A+70%B)，4个峰之间间隔时间太长，单个酚峰重叠性不好。

梯度2的出峰时间是4个梯度最少的，各个峰分离度最好，每一个样品所用时间是4个梯度中最少，所用流动相也是4个梯度中最少的。该梯度15min后经缓冲才进入下一个样品梯度，单个酚峰重叠性最好。苯酚出峰时间RSD为1.23%，间甲酚出峰时间RSD为0.07%，2，4－二氯酚出峰时间RSD为0.07%，2，4，6－三氯出峰时间RSD为0.05%。苯酚峰面积RSD为0.13%，间甲酚峰面积RSD为0.16%，2，4－二氯酚峰面积RSD为0.03%，2，4，6－三氯峰面积RSD为0.18%。苯酚峰高RSD为0.82%，间甲酚峰高RSD为1.39%，2，4－二氯酚峰高RSD为0.87%，2，4，6－三氯峰高RSD为0.42%。

梯度3和梯度4的出峰时间没有梯度2少，各个峰分离度虽然好，但是每一个样品所用时间都比梯度2长。