咽喉宁口服液抗菌、镇痛、止痒作用及对急性细菌性咽炎的治疗作用研究

孙静，陆赛卫，高英杰，赵荣华，郭姗姗，时宇静，曲天歌，玄振玉*，崔晓兰*

(1.中国中医科学院中药研究所，北京 100700；2.苏州玉森新药开发有限公司，江苏 苏州 215001； 3.北京中医药大学东直门医院，北京 100700)

急性细菌性咽炎是由细菌感染引起的咽部黏膜、黏膜下组织及其淋巴组织的急性炎症，是耳鼻喉科常见病、多发病，主要表现为咽喉红肿疼痛等症状[1]。西医多采用抗生素类药物治疗急性细菌性咽炎，但药物毒副作用大，且易产生耐药性[2]。中药治疗急性细菌性咽炎具有毒副作用小、药效持久，辨证论治，标本兼治等特点。咽喉宁口服液功能主治为清热解毒，清利咽喉，临床用于急性咽炎的治疗。本研究采用乙型溶血性链球菌感染致大鼠急性细菌性咽炎模型及体内外抗菌、镇痛、止痒模型，评价咽喉宁口服液治疗急性细菌性咽炎的药效。

1 实验材料

1.1 药物及试剂

咽喉宁口服液干膏粉(批号：141101)，由苏州玉森新药开发有限公司提供；咽炎片(批号：1312030Z)，华润三九(黄石)药业有限公司产品；阿莫西林胶囊(批号：A1406029)，哈药集团制药总厂产品；阿司匹林肠溶片(批号：BJ09503)，拜耳公司产品；醋酸泼尼松片(批号：1409157)，浙江仙琚制药股份有限公司产品；组织胺磷酸(批号：51-74-1)，杭州大阳化工有限公司。

1.2 实验动物

ICR小鼠(SPF/VAF级)，体质量13～15 g，18～20 g，SD大鼠(SPF/VAF级)，体质量140～160 g，雌雄各半，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证：SCXK(京)2012-0001；豚鼠，体质量250～350 g，雌雄各半，普通级，由北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司提供，动物许可证：SCXK(京)2015-0005。

1.3 实验仪器

电子天平(YP1002)，上海越平科学仪器有限公司；电子天平(BSA3202S-CW)，赛多利斯科学仪器北京有限公司；恒温水浴箱(DK-660B)，上海森信实验仪器有限公司；咽喉喷雾器，贵州宏宇药业有限公司产品。

2 实验方法及结果

2.1 对乙型溶血性链球菌致大鼠急性细菌性咽炎模型的影响

取SD大鼠60只，体质量140～160 g，雌雄各半，随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、咽炎片对照组、咽喉宁口服液干膏粉1.16 g/(kg·d)、0.58 g/(kg·d)、0.29 g/(kg·d)3个剂量组，每组10只。除正常对照组外，使用灭菌镊子翻开大鼠口腔，暴露上颌黏膜，用注射器将吸有1×109cfu/mL浓度乙型溶血性链球菌菌液水平方向点刺鼻咽部黏膜，并注射菌液，操作程度以略有点状出血为度，每只0.1 mL，连续感染2 d。第1天感染后1 h各动物按10 mL/kg灌胃给药，每天1次，连续3 d，正常对照组和模型对照组在同等条件下给蒸馏水。第4天观察大鼠咽部黏膜病变程度，进行咽部体征评分。咽部体征评分标准：4分：软腭、软腭弓、咽后壁均出现红色瘀血点，可见覆有白色脓点；3分：软腭、软腭弓、咽后壁出现红色瘀血点；2分：软腭、软腭弓或咽后壁有充血红肿；1分：软腭有红肿；0分：上颚无红肿表现[3]。

2.2 体外抗菌作用

试验前将咽喉宁口服液及咽炎片用蒸馏水配制成50 mg/mL的原药液；阿莫西林胶囊配制成浓度为5 mg/mL的原药液，过滤除菌备用。菌液制备：试验前取保存的各菌液，每种20 μL加入到肉汤培养基2 mL中，置入振荡培养箱中培养18 h。试验时将培养好的菌液用肉汤培养基逐步稀释成3×105个菌/mL浓度。试验时用营养肉汤培养基将各原药液做1:2～1:64倍倍比稀释后，加至96孔培养板中，每孔150 μL，再加入3×105个菌/mL的各种菌液10 μL，每个浓度做2个复孔同时设细菌对照组和正常对照组。置振荡培养箱，36 ℃培养24 h后观察各孔中细菌生长情况，确定无细菌生长的最低药物浓度(MIC)。

2.3 对金黄色葡萄球菌感染致小鼠死亡的保护作用

取ICR小鼠120只，体质量13～15 g，雌雄各半，按体质量等级随机分为6组，分别为模型对照组、阿莫西林对照组、咽炎片对照组，咽喉宁口服液高、中、低3个剂量组，每组20只。各给药组灌胃给药，0.02 mL/g，每日1次，连续5 d，感染对照组在同等情况下给蒸馏水。第3天给药1 h后各组动物腹腔注射9×108cfu/mL金黄色葡萄球菌菌液，0.2 mL/只。感染后每日观察动物的死亡情况，连续7 d，记录死亡数，计算死亡率、保护率、平均存活天数及生命延长率。

2.4 对热板致小鼠疼痛模型的影响

调节恒温水浴：先将水浴槽加满水，使水面接触热板，调节恒温装置，使水温控制在(55.0±0.5)℃，热板需预热10 min。

筛选合格小鼠：取ICR小鼠，体质量18～20 g，雌雄各半，每次1只放在热板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间(s)，作为该鼠的痛阈值，凡舔后足时间小于5 s或大于30 s或跳跃者弃之不用。

观察药物作用：取合格小鼠60只，按体质量等级分为模型对照组、阿司匹林对照组、咽炎片对照组，咽喉宁口服液高、中、低3个剂量组，每组10只。各组小鼠重复测其正常痛阈值2次，取2次平均值，作为该鼠给药前痛阈值。各给药组小鼠灌胃给药，0.02 mL/g，模型对照组在同等情况下给蒸馏水。给药后1 h、2 h、3 h分别测小鼠痛阈值，如60 s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值以60 s计算。

根据痛阈值计算镇痛率，以镇痛率来比较各组的镇痛效果。

镇痛率%=(用药后痛阈值-用药前平均痛阈值)×100%/用药前平均痛阈值

2.5 对组胺致豚鼠皮肤瘙痒模型的影响

取豚鼠70只，体质量250～350 g，雌性各半，随机分为7组，分别为正常对照组，模型对照组，咽炎片对照组，醋酸泼尼松对照组、咽喉宁口服液高、中、低剂量组。各给药组灌胃给药，每日1次，连续3 d，正常对照组及模型对照组在同等情况下灌胃蒸馏水。第3天给药2 h后将各组豚鼠右后足背脱毛，用砂纸擦伤豚鼠右后足背脱毛处，面积约1 cm2，除正常对照组外其余动物在创面处滴0.1%组胺磷酸液0.05 mL/足，以后每隔3 min将组胺磷酸液滴在创面上，直至豚鼠回头舔右后足为止，以此时所给的组胺磷酸总量为致痒阈。若滴加10次，豚鼠仍没回头舔后足，则以10次所给的组胺磷酸量为致痒阈。正常对照组同等情况下滴蒸馏水。

2.6 统计方法

结果采用组间比较t检验进行统计学处理。

3 实验结果

3.1 对乙型溶血性链球菌致大鼠急性细菌性咽炎模型的影响

表1结果显示：肉眼观察模型组大鼠咽部出现红色瘀血点并附有白色脓点，咽部体征评分显著增高，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)；咽喉宁口服液3个剂量组大鼠咽部病变均明显减轻，咽部体征评分下降，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05、P<0.01)。

注：与正常对照组比较，##P<0.01,#P<0.05；与模型对照组比较，**P<0.01,*P<0.05

3.2 体外抗菌作用

表2结果显示：经24 h培养后，细菌对照组均有菌株生长。咽喉宁口服液对所试的6株菌株均有不同程度的抑制作用，MIC在6.25～25 mg/mL之间。

3.3 对金黄色葡萄球菌感染致小鼠死亡的保护作用

表3结果显示：咽喉宁口服液3个剂量组均可降低金黄色葡萄球菌感染所致小鼠死亡数，其中中剂量组死亡保护率为38.89%，并延长平均存活天数，中、小剂量组生命延长率分别为139.39%和103.03%，与模型对照组比较有显著性差异，(P<0.05，P<0.01)。

3.4 对热板致小鼠疼痛模型的影响

表4结果显示：咽喉宁口服液3个剂量组给药后1 h、2 h、3 h均可提高热板致小鼠疼痛的镇痛率，其中高、中剂量组给药后3 h与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。

表2 咽喉宁口服液体外抑菌试验

注：“-”表示无细菌生长，“ +”表示有细菌生长

表3 咽喉宁口服液对金黄色葡萄球菌致小鼠死亡的保护作用

注：与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05

表4 咽喉宁口服液对热板所致小鼠疼痛模型的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3.5 对组胺致豚鼠皮肤瘙痒模型的影响

表5结果显示：咽喉宁口服液3个剂量组均可提高组胺致豚鼠的致痒阈，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。

表5 咽喉宁口服液对组胺所致豚鼠皮肤瘙痒模型的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

4 讨论

急性细菌性咽炎是细菌感染引起的咽部黏膜，并波及黏膜下及淋巴组织的急性炎症，常继发于急性鼻炎或急性扁桃体炎之后或为上呼吸道感染之一部分[4-5]。亦常为全身疾病的局部表现或为急性传染病之前驱症状。常因受凉，过度疲劳，烟酒过度等致全身及局部抵抗力下降，病原菌乘虚而入而引发本病。引起急性细菌性咽炎的致病菌包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌及白色念珠菌等，其中乙型溶血性链球菌是临床最易引起儿童及成人上呼吸道感染，从而引发咽喉炎、扁桃体炎的致病力较强的病原菌[6-8]。当前，临床治疗急性细菌性咽炎的药物仍以抗生素为主，但抗生素耐药及毒副作用问题日益严重，因此，医学界越来越偏重于发展中医药治疗。中药复方因化学成分复杂、治疗面广，对于恢复人体微生态平衡、调节免疫、预防感染、干预抗药性形成都具有较好的作用[9-10]。

咽喉宁口服液由山豆根、龙葵、射干、黄芪、甘草组成，具有清热解毒，清利咽喉的功效，临床治疗各种急、慢性咽炎，疗效显著。方中山豆根性寒、味苦；有清热解毒，消肿利咽之功效，为君药；龙葵性寒、味苦，有清热解毒，活血消肿之功效；射干性寒、味苦，有清热解毒、散结消炎、消肿止痛、止咳化痰之功效，与龙葵共为臣药；黄芪性温、味甘，有补气固表、利水退肿之功效，能减缓山豆根、射干的苦寒之性，为佐药。甘草为使药，具有补脾益气，袪痰止咳，调和诸药之功效。本研究结果表明咽喉宁口服液3个剂量组对乙型溶血性链球菌感染引起的大鼠急性咽炎均具显著的疗效，给药组大鼠咽部体征评分与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。体内外抗菌试验、热板实验和组胺致豚鼠皮肤瘙痒实验结果显示咽喉宁口服液3个剂量组均具有不同程度的体内外抗菌、镇痛、止痒作用。