病理技术HE染色改进前后组织质谱结果分析

吴玉戈

病理诊断作为现代医学中一种权威性诊断方式，在疾病诊断方法中有重要地位，可为疾病后续治疗方案的制定提供重要依据[1]。然而，病理诊断也存在一定局限性，即病理诊断准确性会受到病理检查医师操作技术水平、染色效果、组织病理切片处理质量等因素的影响，加上标本脱水不彻底、标本固定时间过长以及试剂浓度变化等现代病理因素影响，导致切片质量也受到巨大影响，增加准确诊断的难度系数[2]。鉴于此，有必要进一步改进病理技术HE染色方法，但改进后效果如何，是否能进一步提高病理诊断准确性，相关报道鲜见，应作进一步分析。本研究旨在明确病理技术HE染色应用在病理诊断中的效果，以病理技术HE染色处理一组石蜡切片，对病理技术改进前后染色标准组织学质谱差异作比较，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择某院2016年9月至2017年9月病理科接收的石蜡切片300例作为研究样本，主要包括骨石蜡切片、脂肪石蜡切片、胆石蜡切片、胃肠石蜡切片，严格依据相关规范予以操作，进行HE染色。其中，病理诊断技术改进前和改进后的诊断样本以及例数均150例，均为：骨石蜡切片58例、脂肪石蜡切片44例、胆石蜡切片27例、胃肠石蜡切片21例。

1.2 检查方法 病理技术HE染色方法：自手术室中获得本研究所需的组织或器官标本，在超声等影像学工具引导下穿刺所获得的标本作为实验所用穿刺小标本。医师在取材中保证准确、快速。在选材、制片期间应根据不同组织选取相应固定和脱水时间以及制片染色方法，以确保组织病理制片质量，比如：小标本的固定与脱水时间均缩短，脂肪组织固定、脱水时间延长，对于破碎组织以及软组织均应选择已用过的旧刀片予以制片处理。病理诊断HE染色方法具体操作如下：①经三次二甲苯进行去蜡处理，时间是5～10 min。②脱蜡水洗3 min，其中无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇各占1 min。③应用苏木紫液进行染色处理，时间是3～5 min，而染色时间应针对实际情况进行增减。④使用1%浓度酸性乙醇与1%浓度盐酸分化予以水洗。⑤流水浸洗的时间应在15 min以上，直到细胞核改为蓝色。如果染色深度欠佳，无法判断，则重染。⑥以伊红液染色，时间是0.5～1 min，随后使用85%乙醇、95%乙醇和无水乙醇予以水洗，各两次，每次时间是1～2 min。⑦应用二甲苯进行透明处理，共3次，3～5 min/次。⑧以中性树胶完成盖片封片操作，并贴上标签。

病理技术改进方法：对不同标本应依据不同组织特性进行制片、固定、脱水、染色。其中，在苏木精染色下，细胞核应为鲜明蓝色、黏液呈灰蓝色、软骨基底和钙盐颗粒为深蓝色。在伊红染色下，细胞间质为不同层次的红色，比如胞浆中嗜酸性颗粒细胞为鲜红色，而胶原纤维淡粉红色、弹力纤维亮粉红色。因组织的着色程度、组织与细胞种类之间存在密切关系，并能根据病理变化与生活周期变化而改善。比如大部分细胞胞浆经伊红染色，在新生时期较淡，进入衰老期会逐渐加深。

1.3 观察指标 比较病理诊断技术改变前、改变后的染色结果，包括骨石蜡切片、脂肪石蜡切片、胆石蜡切片、胃肠石蜡切片。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件包进行数据分析，计数资料用率表示，行X2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

与病理诊断技术改进前比较，改进后的骨石蜡切片、脂肪石蜡切片、胆石蜡切片、胃肠石蜡切片病理诊断准确率均明显升高，并与改进前相比差异有统计学意义(均P＜0.05，表1)。

表1 病理诊断技术改进前、改进后的染色结果比较[n(%)]

3 讨论

病理检查，即通过明确人体组织、器官、细胞内病理变化进行诊断的病理形态学方法，从而发现对应部位发生或者可能发生的病变，最终了解病变发生原因、机制、过程等，因而在诸多疾病诊断中被称之为“金标准”[2-3]。现阶段，病理诊断已经大量用于各个学科疾病诊断工作以及科学研究中，作出了较大医学贡献[4-6]。然而，经既往临床实践发现，病理诊断依赖于临床对于组织细胞的取材、固定、脱水以及切片各个操作质量，最终所获组织染色质量水平可直接影响疾病诊断结果[7-8]。

临床医师在病理诊断中强调，针对不同标本，取材要求应随之变化，同时还包括取材方法、范围、工具，预防标本组织受挤压，导致其组织结构变异。细胞、组织HE染色质量在较大程度上会受上述各个措施影响，因而在诊断中应考虑各个类型不同，酌情选取相应方法、工具完成。病理技术HE染色(苏木精-伊红染色法)中苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。它作为临床病理检查中常见染色方法，也是病理技术中常见方法之一，病理学切片均需接受一种及以上的染料，从而显现切片中各个物质，经光学显微镜仔细观察各个结构，从而准确判断，帮助临床医师获得可靠证据[9-10]。因此，临床医师应不断提高病理诊断技术，以免切片染色错误，致使结构不明、层次不清，影响诊断准确性。经本次研究发现，病理诊断技术改进后，染色结果显著优化，对于骨石蜡切片、脂肪石蜡切片、胆石蜡切片、胃肠石蜡切片的病理诊断准确率均升高，从60%～70%升高到90%以上，充分证明了在病理诊断中改进病理技术HE染色方法的临床意义。

综上所述，病理技术HE染色方法在病理诊断中的临床价值显著，而持续改进病理技术HE染色方法，有助于提高诊断准确率，值得借鉴。