金樱子多糖提取、纯化 及生理活性研究进展

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(1.华南农业大学食品学院,广东广州 510642; 2.广东省天然活性物工程技术研究中心,广东广州 510642; 3.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州 510641)

金樱子(RosalaevigataMichx.),又名金壶瓶、下山虎、糖罐子、灯笼果、白玉带等,为蔷薇科蔷薇属多年生常绿蔓性灌木[1],喜温暖干燥的气候,生于海拔100～1600 m的向阳山野、田边、溪畔灌木丛中,分布于华中、华南、华东及四川、贵州等地,为药食两用的中药材,其根、果、叶均可入药[2]。《本草正》中早有记载金樱子具有平喘止咳、活血散瘀、利尿生津、滋阴补阴等生理功效。2002年,中国卫生部正式将金樱子列入保健食品原料的行列[3]。

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金樱子的果实、茎和根中的主要活性成分均为多糖,其中以金樱子果实中多糖含量最为丰富,多糖含量范围30.5%～42.7%,不同产地金樱子之间有显著差异[4-5]。金樱子多糖的单糖组成为阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、果糖,其中葡萄糖、甘露糖、果糖和半乳糖占比例较大[6]。金樱子野生资源丰富,多糖含量很高,现代药理研究又表明,金樱子多糖在抗肿瘤[7]、降血脂[8]、免疫调节[9]、抑菌[10]等方面具有显著的生理功效,因此金樱子多糖极具开发和研究的价值。国内外目前对金樱子多糖提取工艺、分离纯化方法的研究缺乏创新,对其生理作用机制的研究不够深入,综述性文章也较少。因此,本文综述近年来金樱子多糖提取、纯化和生理活性的研究,并对其研究现状进行讨论和展望,旨在为金樱子多糖的进一步基础研究和开发提供参考。

1 金樱子多糖的提取工艺

基于效率、成本等方面的考虑,各种提取方法的开发、比较、分析是金樱子多糖研究工作的重点。目前,金樱子多糖的提取工艺主要包括热水浸提法、微波辅助提取、超声辅助提取以及酶法提取等。

家长要仔细观察孩子的病情。如果是病理性发热，必定伴有其他相关症状，家长总能找出一些蛛丝马迹，以便就诊时告知医生，帮助医生找出引起发热的病因来，利于诊断治疗。

1.1 热水浸提法

1）基础设施与资源建设方面。①成果：在资源建设和基础设施建设方面取得长足进步；教育信息化基础设施与平台在全国范围内基本建成，为后续应用提供了基础和条件，主要表现在校园网的数量、带宽、传输速率大幅增长。②问题：基础设施建设水平不高，学生与计算机的比例、教师与计算机的比例未能完全满足现实教育发展的需要；而且在普通教育与职业教育之间、基础教育与高等教育之间、城市与农村之间分布不均衡，存在较大差别。

张庭延等[11]以干燥粉碎后的金樱子为原料,用90 ℃的石油醚和80%乙醇索氏回流脱脂和除去低聚糖,再分别采用96 ℃的蒸馏水、草酸铵溶液、氢氧化钠溶液浸提,其中蒸馏水对应金樱子多糖得率最高,为13.32%。黄俞龙等[12]依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯浸提金樱子,再置于沸水中,最终多糖的得率为5.17%。王瑞兰等[13]用无水乙醇与无水乙醚(体积比为1∶1)混合液浸泡12 h,再用80 ℃左右热水浸提,Sevage法脱蛋白,95%醇沉,冻干后获得近似金黄色金樱子多糖。近年来半仿生法被用于金樱子多糖的提取,它是在热水浸提法的基础上,模拟口服给药及药物经胃肠道转运的过程,最佳工艺条件是进行3次提取,每次提取温度均为100 ℃,pH依次为5、7.5、9,时间分别为2、1、1 h,粗多糖平均含量为303.52 mg/g[14]。

在机械电气控制装置中机械控制设备占据主导地位，在应用PLC技术的过程中可以有效达到自动化控制的效果。以往的控制模式主要是采用一对一的控制方法，这种方法在控制的过程中具有一定的复杂性，而且存在的不稳定因素也是非常的多，严重影响了设备运行的安全性。经过研究发现，在机械控制设备中的应用PLC 技术可以起到一定的控制作用，可以简化控制过程，极大的降低了故障的发生率[1]。

1.2 微波辅助提取

微波作为一种超高速电磁波,穿透作用强,在多糖提取过程中,可以使金樱子细胞中的极性物质尤其是水分迅速升温升压,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁穿孔,细胞内部的多糖溶出[15]。也有研究表明,当微波辅助用于提取多糖时,有两种机制同时发挥作用。其一,温度的快速升高,使提取体系的黏度降低,植物原料的外膜被破坏,提取率得到提高;其二,微波引起的分子转动可中和电势,使分子周围的电荷重新分布,离子迁移运动加强,提取率提高[16]。

朱叶等[17]优化金樱子多糖的微波提取工艺,料液比为1∶45 g/mL,提取时间45 s,提取功率320 W,金樱子多糖的平均提取率为31.01%。曾庆华等[18]得到金樱子多糖的最佳提取工艺条件为微波时间3.5 min,微波功率438 W,料液比为1∶27 g/mL,浸提1次,金樱子多糖实际提取率可达52.0%。利用微波辅助提取时,相比于单纯的热水浸提,多糖的提取率显著提高2～4倍,一般能超过30%,提取的时间也显著缩短,由热水浸提的1～2 d减少至10 min以内。这些突出的优势得益于微波可以使金樱子细胞更快的升温破裂,溶出多糖。但该法对设备的要求高,因为当样品在密闭式萃取罐中处理时,高温高压条件对制作样品罐材料要求很高,而且还需要高强度的外罐保护。该法也存在微波泄露对人体健康的安全隐患,在设计与加工时必须采取保证安全的屏蔽措施。

2.2 两组苏醒期PAED评分及躁动发生率比较 研究组PAED评分及躁动发生率均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

1.3 超声波辅助提取

超声波是一种弹性机械波,具有强烈的空化效应、机械振动作用及热学作用,其中最重要的是空化效应。用超声波处理金樱子可以破坏其细胞壁,从而使多糖溶出。同时形成高温和高压的环境,增加多糖分子运动的频率和速度,提升提取溶剂的穿透力,从而加速多糖分子进入溶剂,提高提取率[19]。

周恩红等[20]筛选出最佳的超声提取工艺条件为超声温度80 ℃,原料液比1∶20 g/mL,超声功率180 W,超声时间20 min,对应测得多糖含量为30.56%,并且证明超声波提取金樱子多糖具有稳定性好的特点。另有研究得出最佳超声提取工艺为提取温度74 ℃,超声时间49 min,液料比25∶1 mL/g,平均提取率为15.084%[21]。两项研究中前者多糖的得率明显高于后者,比较两者的工艺条件,温度、料液比相近,后者的提取时间甚至更长,但后者未探究合适的超声功率。由此可见,除金樱子原料来源的不同,超声功率在很大程度上会影响超声提取金樱子多糖的得率。金樱根中同样富含多糖类活性物质,最佳超声提取条件是提取温度70 ℃,料液比1∶50 g/mL,提取时间60 min,提取次数4次,测得多糖含量为127.75 mg/g[22],该提取率也较低,原因可能也是没有选定合适的超声功率。超声波提取为金樱子多糖的提取及其工业化生产提供了新手段,具有缩短提取时间,提高提取率,避免高温长时间影响的优势,且与高温热水提取相比,超声提取可以更完整的保留多糖分子的三螺旋结构[23]。但值得注意的是,超声波技术目前也用于多糖分子的降解,多糖降解率与超声时间呈指数函数关系[24],因此超声波辅助提取的时间不宜过长,否则会引起多糖分子的断裂,导致提取率降低。

1.4 酶法提取

金樱子多糖的各种提取方法均有优劣,有待进一步研究改善:热水浸提法适用于工业化大规模提取,但时间长、温度高,多糖提取效率低[30];微波、超声辅助可显著缩短提取时间,但均对设备技术有较高的要求;酶法提取温和高效,却需要对工艺过程中的温度、pH严格控制。综上,目前金樱子多糖提取在传统热水浸提法的基础上,借助微波、超声和酶辅助提取等高新技术,实现多糖提取率的提高和品质的改善。但这些高新提取技术还处于实验室对最佳工艺条件的探索阶段,没能普遍运用于多糖的工业化提取,导致如今金樱子多糖的工业化提取方法仍旧比较落后粗放,原料和能源不能被充分利用。

除纤维素外,金樱子果实中的淀粉、果胶等也会降低活性多糖提取率,但目前几乎没有关于利用淀粉酶和果胶酶等其他酶类提取金樱子活性多糖的研究。其他植物多糖的酶提取工艺,可为金樱子多糖的提取提供借鉴:纤维素酶、果胶酶和胰酶组成的混合酶系提取的灰树花多糖具有很强的抗氧化活性[28]。芦笋老茎中的可溶性膳食纤维可依次用脂肪酶、淀粉酶和糖化酶、蛋白酶、纤维素酶进行酶解提取[29]。

在体外实验和动物实验中,金樱子多糖能显著消除超氧阴离子自由基,抑制羟自由基破坏细胞膜而引起的溶血和脂质过氧化产物的形成[40]。韦玉兰等[41]也通过实验证明金樱子多糖对羟自由基、超氧阴离子及DPPH自由基具有较强的清除能力,但对各自由基的敏感程度不同。在不同种类的自由基中,羟自由基和超氧阴离子自由基对细胞的危害最大,可直接损伤各种生物大分子和生物膜,金樱子多糖对这两种自由基有显著的清除能力,抗氧化能力优良。金樱子多糖对植物油和动物油的保护率为50%时的质量浓度分别为2.8、5.9 ng/mL,对羟基自由基的清除能力为50%时的浓度为4.7 ng/mL,同浓度的金樱子多糖对超氧阴离子自由基清除率为23%。此外,金樱子多糖能较好地还原三价铁离子[42],进一步说明其可以作为优良的抗氧化剂。

纤维素是由β-D-葡萄糖以1,4-β-葡萄糖苷键连接而成的直链聚合物[25],是金樱子细胞壁的主要成分。采用纤维素酶处理可以促进β-D-葡萄糖苷键的裂解,在温和的条件下快速破坏细胞壁结构,有利于活性多糖物质的溶出。全文泰等[26]采用正交试验确定金樱子多糖的最佳酶提取工艺:pH为6,100 U/mL纤维素酶悬浮液用量6.0 mL,反应温度60 ℃,酶解时间2.0 h,金樱子多糖的平均提取率为24.48%。而周晔等[27]采用响应面分析法优化结果是提取温度65 ℃,纤维素酶用量594 U/g,提取时间140 min,pH5.0,金樱子多糖的平均提取率为14.49%。两项研究得到的最佳提取工艺条件相近,多糖提取率的差异可能源于优化方法、原料本身和纤维素酶的活性不同。酶法提取操作简单,化学污染小,设备投资成本较低,与热水浸提法相比条件温和,且提取速率更快。但酶维持活性的最佳温度及最佳pH范围小,因此提取过程中必须严格控制反应温度和pH,尽量避免波动。

热水浸提法为传统的多糖提取方法,但从上述研究中可见其对金樱子多糖的提取率并不高,与金樱子中实际的多糖含量有较大差距,采用该法提取并测定多糖含量,其结果并不能反映金樱子中真实的多糖含量。为了脱除金樱子原料中的脂质、低聚糖等物质以提高多糖的提取率,普遍会在热水浸提前先用不同极性的有机溶剂对原料进行提取,导致该法溶剂使用量大,提取时间长,高温对活性物质产生不良影响。此外,国内外关于金樱子多糖热水浸提法工艺条件优化的研究较少,间接说明目前工业上采用热水浸提来生产金樱子多糖的工艺比较粗放,并没有将多糖从原料中充分提取,导致资源能源的浪费。

2 金樱子多糖的分离纯化

2.1 金樱子粗多糖脱色

色素是多糖提取过程中的主要杂质,会给多糖后续的分离纯化过程带来极大困难。多糖脱色工艺一般有:大孔树脂脱色、双氧水脱色、活性炭脱色和聚酰胺脱色等。陈传平等[31]采用双氧水脱色工艺,按照金樱子多糖浸提液∶H2O2=5∶1,50 ℃保温2 h对金樱子多糖进行脱色处理。张庭延等[11]将金樱子粗多糖水溶液于活性炭中回流1 h,进而实现多糖脱色。目前,实际运用于金樱子多糖脱色的方法比较粗放和单一,为提高金樱子多糖的脱色率和多糖保留率,同时节省工艺成本,可以对双氧水、活性炭脱色法进行条件优化,探索最佳双氧水或活性炭用量、脱色温度以及脱色时间等。此外,可以尝试采用大孔树脂对金樱子多糖进行脱色,既能避免活性炭和粗多糖形成粘稠胶状物质,又可防止双氧水对多糖的氧化分解[32]。

2.2 金樱子粗多糖脱蛋白

纯化金樱子粗多糖提取物的一个重要步骤就是脱除蛋白质,这可以有效提高多糖产品的生物活性,从而提升产品的经济价值。

从粗多糖提取物中脱除蛋白质的方法主要有:Sevag法、三氯乙酸法、三氯三氟乙烷法、酶法等,但为了最大限度提升蛋白质脱除率和降低多糖损失率,通常将几种方法联合使用。在比较Sevag法、酶法、酶法与Sevag法相结合对脱除金樱子粗多糖中蛋白质效果的研究中,酶法与Sevag法结合效果最佳,木瓜蛋白酶用量为底物浓度的1%、pH为6.0、60 ℃水浴3 h,再加入占总体积1/5的氯仿-正丁醇(5∶1)溶液,重复操作5次,此时蛋白脱除率为80.5%,多糖含量为84.3%[33]。张庭延等[11]将Sevag法和三氯乙酸法有机地结合起来,交替使用,操作6次时,金樱子粗多糖中蛋白质的含量已经低于5%,蛋白脱除率约为87%。将Sevag法与其他方法结合,操作次数较少时即可达到超过80%的较高的蛋白脱除率,从而避免多糖的过多损失,减少溶剂使用量,简化操作。

2.3 金樱子多糖的纯化

2.3.1 离子交换柱层析 周苗苗等[34]对脱蛋白后的金樱子多糖进行DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析,使用pH7.6 tris-HCl buffer进行洗脱处理,分别收集两个明显洗脱峰对应的多糖洗脱液。再用CM-Sepharose Fast Flow对两组分分别进行柱层析,用pH5.4 tris-HCl buffer进行洗脱处理,均得单一洗脱峰即一种多糖,说明原金樱子多糖共有两种多糖组分。王瑞兰等[13]采用相同的实验流程及检测方法对金樱子多糖进行纯化,得到相同的实验结果。张庭延等[11]采用DEAE-纤维素(氯型)柱层析对脱蛋白后的多糖提取物进行纯化分级,结果获得3个组分,即金樱子原料中的多糖包含3种不同类型的聚合分子,其中有1种葡聚糖和2种杂多糖。各研究中金樱子多糖组分存在差异主要是因为金樱子原料来源不同。

2.3.2 甲醇分级沉淀 多糖的分级沉淀是指分离不同分子质量多糖的一种沉淀方法,甲醇就是一种常用的沉淀剂,利用不同浓度的甲醇溶液可以得到不同分子质量的多糖沉淀,从而实现纯化。张庭延等[11]采用甲醇分级沉淀金樱子多糖,其纯化结果与采用DEAE-纤维素(氯型)柱层析相近,即金樱子多糖中包含三个组分:1种葡聚糖和2种杂多糖,但2种杂多糖的单糖构成与柱层析法纯化的结果不同。除甲醇之外,乙醇、丙酮等也可用于多糖的分级沉淀,但在金樱子多糖的纯化中运用较少,而在其它植物多糖中已有相关研究。例如,用90%、70%、40%的乙醇将鸡骨草多糖进行分级沉淀,可以得到三个质量不等的组分,且多糖沉淀质量与所用的乙醇浓度呈一定的正相关性[35]。不同浓度乙醇沉淀获得的樟芝多糖对急性肝损伤小鼠有保肝作用,其中90%乙醇沉淀获得多糖的保肝作用优于其他浓度[36]。

在生物体中,自由基是维持正常生理状态的关键因素,但过高浓度的自由基会对不同等级的生物大分子造成损害[39],导致机体衰老。

3 金樱子多糖的生理活性

与其它植物多糖一样,多项研究已经表明金樱子多糖也具有广泛的生理活性,主要包括抗氧化、降血脂、抑菌抗炎、免疫调节和抗癌等作用。

3.1 抗氧化

目前关于金樱子多糖纯化方法的研究较少,且已有的研究都集中在特定的几种方法上,可以考虑借鉴其它多糖纯化的新途径、新思路,以便更高效地获取纯化的金樱子多糖。例如膜分离技术也常用于天然产物中活性多糖的纯化:超滤膜技术分离纯化米糠多糖,可得到3个组分[37];而李启燕等[38]用中空纤维超滤实验装置分离获得3个不同分子质量的党参多糖组分。

“就丁主任长这样，他老婆能好看到哪儿去？就赖你，玩什么不好，玩结婚？你要不结，我还有词拒他们，我哥都没结呢，我着什么急呵？”

表1中其余研究实例同样证实金樱子多糖的抗氧化活性。金樱子多糖抗氧化与抗衰老活性之间存在必然的联系,相关试验中,金樱子多糖可以使衰老小鼠胸腺指数、脾脏指数显著增加,MDA、NO含量显著降低,氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力显著提高,并表现良好剂量依赖关系[43]。这间接说明金樱子多糖可以提高机体免疫力,增强清除自由基能力,减少不良氧化反应的发生从而发挥其延缓衰老的作用。

金樱子多糖易溶于热水中,不溶于正丁醇、丙酮等有机溶剂[11],利用这一性质,能将多糖从金樱子中提取出来。

表1 金樱子多糖抗氧化活性研究实例Table 1 Antioxidant activity of polysaccharides from Rosa laevigata Michx.

3.2 降血脂

药用植物多糖在降血脂方面表现出独特活性和低毒效应,目前也有关于金樱子多糖的降血脂功效研究。张庭延等[8]研究指出:金樱子多糖对小鼠的高胆固醇血症具有明显的预防和治疗作用,可能的机制主要是多糖在肠道抑制了胆固醇的吸收。金樱子多糖能降低CCl4所致肝损伤小鼠血浆中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,而提高高密度脂蛋白胆固醇含量,肝损伤小鼠的血脂代谢得以修正[47]。除了肝损伤,肝免疫功能的降低也会影响脂质代谢。高剂量地塞米松抑制小鼠肝的免疫活性,而金樱子多糖干预后的免疫抑制小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量都有不同程度的降低,而高密度脂蛋白胆固醇含量有一定的升高[48]。从肝损伤和肝免疫活性降低的研究中可以看出,金樱子多糖降血脂功效的发挥很可能是通过调节肝的代谢功能进而调整血浆中各类脂质的水平。

3.3 抑菌抗炎

研究表明,多糖可能是通过作用于细菌的细胞壁、细胞膜以及DNA来发挥抑菌活性,使细菌细胞壁破裂,细胞膜通透性增加,DNA分解成碎片,细胞最终崩解死亡[49]。金樱子多糖对大肠杆菌、副伤寒杆菌、白葡萄球菌以及金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用[50]。除了金樱子果实,金樱子的根和茎中的多糖也有显著的抑菌活性。金樱子根、茎多糖对白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、痢疾杆菌有抑制作用,并有剂量依赖关系[10]。上述研究都说明,金樱子多糖在体外对球菌和杆菌类的致病菌和非致病菌均有抑制作用,其抑制的致病菌一般能引起肠道疾病和机体的炎症反应,因此金樱子多糖在对抗炎症方面也会有一定的功效。但目前未有报道金樱子多糖通过抑制细菌来抑制炎症反应,而是通过动物实验来验证其抗炎活性,例如金樱子多糖能抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀炎症[50]。

3.4 免疫调节

植物多糖可以通过多条信号转导途径调节免疫细胞的功能和代谢,包括激活巨噬细胞、T/B淋巴细胞的信号通路,从而促使巨噬细胞分泌细胞因子,淋巴细胞分泌抗体[51]。皮建辉等[52]就发现金樱子多糖能提高一氧化氮合酶与蛋白激酶G的表达,从而促进淋巴细胞的体外增殖和IL-2、NO等细胞因子的产生,还能促进腹腔巨噬细胞分泌TNF-α。上述研究表明金樱子多糖确实可参与调节免疫细胞代谢,那么必定也能使机体表现出相应的免疫反应,例如血液中刚果红得以清除,溶血素的生成增加,免疫能力低下时的迟发型超敏反应恢复,血中转氨酶活性降低[53]。免疫调节活性也是金樱子多糖实现抗病毒功效的根源,但目前没有通过动物或人体的免疫系统来证明金樱子多糖的这一生理活性。而在体外细胞实验中,金樱子多糖已被证明可以直接杀灭呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒和手足口病病毒[21]。

实验中采用纯净的SF6与空气混合成不同浓度SF6的气体，以50mg/m3为步长，分别配置了从0到1000mg/m3时的不同气体样品，然后分别注入SF6气体传感器内，通过测量透射光强度与红外光源输出光强的比值，即可得到不同气体样品透过率的值，其结果如表1所示：

3.5 抗肿瘤

多糖可以作为免疫治疗或生物反应的调节剂,从而提高机体对抗肿瘤的能力[54],也可能具有非免疫抗癌活性,即对癌细胞的直接杀伤作用[55]。从相关实验研究中得知,金樱子多糖类化合物发挥抗肿瘤作用可以通过非免疫的途径,其对体外培养、无免疫系统干预的人肝癌细胞BEL-7402的增殖具有一定抑制作用,但对人正常肝细胞HL-7702的毒性较低[12]。金樱子多糖与党参多糖、仙茅多糖、绞股蓝多糖等其他植物多糖一样,对小鼠S180实体瘤有抑制作用[56],其机理则是缓解白细胞水平的减少,提高机体的免疫能力。

表2列举了其余研究实例,从多方面证明金樱子多糖的抗肿瘤活性。可见,金樱子多糖可以通过多种机制实现对癌细胞的抑制作用,因此能够达到良好的抗癌效果。通过硫酸化和羟甲基化化学改性后的金樱子多糖,其抗癌活性可以显著提高[57]。此外,天然的金樱子多糖运用于抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药物,与化学药品相比,具有毒副作用小的优势。

表2 金樱子多糖抗肿瘤活性研究实例Table 2 Study on anti-tumor activity of polysaccharides from Rosa laevigata Michx.

4 展望

金樱子多糖具有良好的生理活性,需经工业化的提取、分离纯化和加工才能运用于功能性食品中。金樱子多糖通过一系列复杂的机制于机体内发挥显著的生理活性,与其分子结构密切相关。

某股份制商业银行分行行长侯磊说，2017年起，该行存款只有210亿元，贷款却高达252亿元，除去准备金后，借差高达100多亿元，利率3%以上，这块资金成本非常高。另一家股份制银行分行负责人说，2017年起，银行业资金流动性普遍趋紧、利率市场化竞争激烈，银行自身的资金成本压力加大，间接抬高了企业融资成本。

因此,关于金樱子多糖往后的研究可以从以下几方面入手:将微波、超声和酶等辅助提取技术引入金樱子多糖的工业化提取中,着力解决设备和操控技术难题,从实验室阶段进入中试阶段;借鉴同类植物多糖分离纯化的方法,将膜分离与柱层析技术有效结合[61],以获得纯度更高的金樱子多糖,分离纯化主要是利用多糖与蛋白、色素等杂质物化性质的差异,因此可以探寻更加便捷经济的纯化方法;中药指纹图谱技术、相似度分析和聚类分析法可能可用于研究金樱子多糖的结构特征[62],解决多糖产品结构复杂,难以使用传统检测方法的弊端,此外,也可通过UV、FT-IR分析分离纯化后各金樱子多糖组分的结构,并与体外活性评价相结合,以明确具有显著生理活性的金樱子多糖结构[63];开展金樱子多糖生理活性的人体临床试验,例如探究其对肿瘤病人存活率的影响[64],同时也需要从基因调控、蛋白表达等层次深入研究金樱子发挥各项生理活性的机理。