终末期肾病患者腹膜透析和血液透析对自然杀伤细胞和T细胞亚群的影响

梁辑

(海口市第三人民医院肾内科，海南 海口 571100)

终末期肾病指各种慢性肾脏疾病的终末阶段，已成为危害我国人类身体健康的重要疾病之一，发病率较高。肾脏移植手术是治疗该病的有效方法，但受多种因素(如治疗费用、病情恶化程度、器官来源等)影响，大部分患者无法及时接受治疗。血液透析、腹膜透析是目前临床治疗该病的主要方法，通过不同的透析原理，清除体内的毒素，能缓解患者病情进展，但随之带来的是患者免疫功能的下降。为探讨不同透析方式对患者细胞免疫功能的影响，选取本院确诊的终末期肾病患者100例进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取海口市第三人民医院2014年1月至2017年2月确诊的终末期肾病患者100例，按随机数字表法分为对照组和观察组，每组各50例。两组一般资料如性别构成、年龄、体重指数、血肌酐、尿素氮、24 h尿量、血清白蛋白、肾小球滤过率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。所选患者均签署知情同意书，经医院委员会批准。

纳入标准[1]：符合美国肾脏病基金会制定的终末期肾脏病诊断标准：肾小球滤过率<15 mL/min；年龄>18岁；经血常规、肝功能检查均正常，近1个月内未见感染。排除标准：合并严重肝功能损伤者；合并心血管疾病或免疫系统疾病者；近3个月内使用激素药物治疗者；精神疾病者；资料不全者。

1.2 方法

1.2.1 对照组 采取血液透析方案，选用金宝AK-95型血液透析机(Gambro Lundia AB)，选用碳酸氢盐溶液作为透析液，透析量500 mL/min，血液量250～300 mL/min，透析器有效膜面积1.6 m2，每次透析持续4 h，每周透析3次。

1.2.2 观察组 采取腹膜透析方案，选用双涤纶透析管(Baxter公司)，选用1.5%乳酸盐双联腹透液作为透析液，置入透析管后，采取间断性透析方式。术后4 d，患者不卧床进行持续性腹膜透析，每日交换4袋。两组治疗期间均给予叶酸、钙离子拮抗剂、维生素等对症支持治疗。

1.3 观察指标

治疗前、治疗6个月后，两组患者均于清晨空腹静脉抽血8～10 mL，置于抗凝试管中，加入红细胞裂解液，300 g离心处理5 min，丢弃上清血液，待检测。

采取流式细胞术，测定T细胞亚群变化，将所得血样本分为4份，300 g离心处理5 min后，丢弃上清液，取沉淀，分别加入20 μL CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8荧光抗体，在4℃条件下孵育1 h后，用PBS溶液冲洗2～3次，最后上机分析。

采取MTT比色法，选用1640培养基，培养K562细胞至指数生长期，将其作为靶细胞，细胞浓度为1×105个/mL，随后从患者外周血中分离出的NK细胞浓度调整为2×105个/mL，将其作为效应细胞。按体积比1:1，将100 μL靶细胞和100 μL效应细胞分别加入96孔板中，并设立对照孔，经培养20 h后，加入100 μL MTT溶液，在37 ℃条件下培养4 h后，加入5%二氧化碳少，丢弃上清液，在孔板中加入100 μL二甲基亚砜溶液，充分混匀后，用酶标仪进行OD值检测。计算公式：NK细胞活性(%)=[1-(实验孔OD值-效应对照组孔OD值)/靶细胞对照组孔OD值]×100%[2]。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 T细胞亚群

治疗后，两组CD3+、CD8+水平均有所升高，CD4+、CD4/CD8水平均有所降低，差异有统计学意义(P<0.05)；但观察组治疗后的CD3+、CD8+水平上升幅度低于对照组，CD4+、CD4/CD8水平下降幅度低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.2 自然杀伤细胞

治疗后，两组NK细胞比例、NK细胞活性均降低，差异有统计学意义(P<0.05)；但观察组治疗后的NK细胞比例、NK细胞活性下降幅度低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 两组一般资料比较

表2 两组治疗前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8比较

**P<0.05，与组内治疗前比较。

表3 两组治疗前后NK细胞比例、NK细胞活性比较

3 讨论

终末期肾病往往病情危重，易诱发感染，主要与患者免疫功能缺陷有关，从而增加死亡的风险[3-4]。T淋巴细胞是人体重要的免疫细胞，具有调节和介导细胞免疫的作用，常见的细胞免疫指标有CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8。近年来，大量研究[5-6]证实，终末期肾病患者存在CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8等T细胞亚群比例失调的现象。

针对终末期肾病的治疗，临床多采取血液透析、腹膜透析两种方式。其中，血液透析的作用原理是利用半透膜原理，经扩散、对流，清除血液中代谢产物及水分，维持水电解质及酸碱平衡，并将净化的血液回输至体内。腹膜透析的作用原理是利用人体自身的腹膜作为透析膜，灌入透析液后，与腹膜另一侧毛细血管内的血浆成分进行溶质和水分的交换，清除体内代谢产物，通过不断更新腹透液，以达到肾脏替代治疗的目的。两种透析方式均可获得良好疗效，但临床关于两种透析方式对细胞免疫功能的影响报道相对较少。有研究[7]表明，经实验室检查终末期肾病患者体液免疫系统基本正常，但往往存在不同程度的细胞免疫功能障碍。免疫功能失调的患者的CD3+水平可升高，CD4+水平可降低，CD8+而水平可升高，故CD4/CD8比值可作为临床评价终末期肾病患者细胞免疫功能的指标。NK细胞属于第三类淋巴细胞，主要由骨髓造血干细胞分化而来，具有细胞体积大的特点，可诱导靶细胞NDA裂解，从而促进细胞凋亡[8]。因此，通过判断NK细胞活性及所占比例，可对终末期肾病患者细胞免疫进行判断。本研究发现，无论采取血液透析方式还是腹膜透析方式，两组患者治疗后CD3+、CD8+水平较治疗前均有所升高，CD4+、CD4/CD8水平均有所降低，NK细胞比例、NK细胞活性均降低，但观察组治疗后的CD3+、CD8+水平上升幅度明显低于对照组，CD4+、CD4/CD8、NK细胞比例、NK细胞活性下降幅度也明显低于对照组，这与孙建洁等[9]报道结果基本相似。汪晶华等[10]研究报道，血液透析和腹膜透析两种治疗方案均可一定程度上改善终末期肾病患者细胞免疫功能，但腹膜透析方案治疗效果更为显著。因此，在调节终末期肾病患者细胞免疫功能方面，腹膜透析方案相对于血液透析方案治疗效果更好。原因在于采取腹膜透析的方式能持续清除血液中的有毒物质，且治疗期间不会出现慢性失血的现象，在改善患者贫血状态方面效果更好[11-12]。本研究认为，无论采取何种透析方式，对终末期肾病患者细胞免疫系统的影响，主要体现在以下几个方面：(1)经血液置换后，能有效清除血液中的有毒物质，降低血液中淋巴细胞抑制物浓度；(2)透析治疗后，改善血液循环，改善体内钙磷代谢紊乱，从而减少其对体内吞噬细胞聚集抑制作用；(3)透析治疗可改善患者肾性贫血状态，增加体内红细胞数目，并参与细胞免疫调节，从而改善患者细胞免疫功能[13-15]。

综上所述，血液透析、腹膜透析是临床治疗终末期肾病的主要方法，两种透析方式均可改善终末期肾病患者的细胞免疫功能，但腹膜透析较血液透析方式更为显著。