猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗在非典型猪瘟病例中的控制效果

韩永刚，刘 浩

（1.陕西省汉中市汉台区畜牧兽医技术推广中心，陕西 汉中 723000；2.陕西省动物卫生与屠宰管理站，西安 710000）

猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病，最早发现于美国俄亥俄州。世界动物卫生组织（OIE）将其列入OIE疫病名录，为必须申报的（Notifiable）动物传染病，我国也将其列为一类动物传染病[1]。该病在世界范围内流行，以流行范围广、发病率和致死率高为主要特征，给世界养猪业造成严重危害。近年来，猪瘟在亚洲、欧洲、南美洲等地区呈现复发的趋势，一些已宣布消灭了猪瘟的国家（如法国、荷兰、德国等）又见猪瘟复发的报道[2]。王琴等对我国流行的不同临床致病力和不同基因亚型的9株猪瘟病毒流行毒株进行了免疫保护效力研究，结果表明，以C株疫苗种毒生产的猪瘟活疫苗（传代细胞源）对我国目前流行的猪瘟高、中、低致病力毒株及不同基因亚型（1.1、2.1、2.2）流行毒株均具有很强的保护力，且免疫猪接种不同流行毒株后不排毒[3]，研究结果为我国继续使用猪瘟兔化弱毒活疫苗进行全面免疫提供了重要科学依据。但是，C株疫苗具有一定局限性，不能区分免疫和自然感染动物，为了净化、消灭猪瘟，新型猪瘟标记疫苗将发挥重要作用[4]。随着CSFV病毒学的发展研究者们逐渐认识到CSFV在感染中诱导产生的抗体主要是与结构蛋白Erns、E2和非结构蛋白NS3结合的。由于NS3所含有的抗原表位在瘟病毒属具有很高的保守性[5]，使得Erns和E2成为进行标记疫苗候选毒株构建的首选。中国台湾研究者利用巴斯德比赤酵母系统成功表达了重组E2蛋白，并在其后的动物试验中取得成功[6]。中国大陆对亚单位疫苗的研究比较深入，已有一个杆状病毒表达的E2亚单位疫苗被注册使用，还有正在研究的如CHO表达E2等。

为准确了解、把握猪瘟E2蛋白灭活疫苗免疫对临床猪瘟病毒感染的控制效果，在某规模猪场发生的非典型猪瘟病例中，笔者使用已在国内上市的该疫苗进行了疫苗临床免疫保护试验，取得了良好的控制效果。现将该猪场发病、诊断及免疫保护试验结果整理如下，供临床兽医技术人员参考，为今后规模猪场非典型猪瘟病例的防控提供技术支撑。

1 基本情况

A场为某省级生猪标准化示范场，种猪繁育场，存栏母猪数量332头，其中能繁母猪为278头。圈舍条件较好，生产工艺先进并执行程序化免疫。但该场人员素质偏低，管理不够规范，措施具体执行过程缺乏有效监督。

B场为A场新建合作肥育场，圈舍条件较好，肥育猪总存栏规模500头，但饲养管理人员生产防疫理念、技术素养均有待提高。

上述两场发病前一直使用某厂生产的猪瘟（ST传代细胞源）活疫苗和猪瘟（脾淋源）活疫苗。其中种猪每年免疫猪瘟疫苗4次，每次注射2头份/头，使用猪瘟（ST传代细胞源）活疫苗、猪瘟（脾淋源）活疫苗交替免疫；仔猪采用在30日龄、60日龄各免疫猪瘟（ST传代细胞源）活疫苗1~2头份/头的免疫方案。

猪瘟E2蛋白灭活疫苗为新疆天康生物制品厂提供的正式上市产品，批号20171120，有效期 20181119，50毫升/瓶，2毫升/头份。猪瘟免疫抗体间接ELISA检测试剂盒由北京试剂元亨动物防疫技术有限公司提供，批号：CSF20180918E，有效期 20190917；猪瘟免疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒由美国爱德仕公司提供，批号：L871。

2 发病情况

（1）A场自2018年8月中旬保育猪和肥育猪陆续出现死亡。临床症状主要表现为：精神高度沉郁，体温升高（41~42℃），稽留热，严重时不能行走、站立困难、扎堆。有明显结膜炎，部分猪拉黄绿色稀便，病猪在耳部、颌下、颈部、腹部、四肢等处出现淤血、出血斑点，病程稍长，约1~2周。保育猪、肥育猪群体死亡率5%~11%。

（2）B场2018年9月中旬自A场转入外观健康、60日龄左右保育猪106头（未进行猪瘟二次加强免疫），进圈3日后即表现临床症状，发病猪只日渐增多。临床症状主要表现为：精神高度沉郁，体温升高达40.5~42℃，稽留热，扎堆，有明显结膜炎，部分猪拉黄绿色稀便，病猪在耳部、颌下、颈部、腹部、四肢等处出现淤血、出血斑点，个别猪死亡后从鼻孔、嘴角流出大量白色或血色泡沫，甚至有的直接流出血液。病程约3~7天。至10月底，群体死亡率69.8%。

3 剖检变化

分别对A、B两场4头死亡猪只进行病理解剖：尸体外表耳部、颌下、颈部、腹部、四肢等处出现淤血、出血斑点，其中一头气管和支气管充血，腔内充满白色或淡红色泡沫，肺门淋巴结水肿，特征性变化为脾脏稍肿大、有出血性梗死，肾脏表面及肾盂内有大量针尖大小出血点，肠系膜、腹股沟淋巴结切面成大理石样出血斑纹，膀胱、喉头会厌软骨内点状出血，回盲口有扣状溃疡。胃底黏膜有片状出血，大小肠各部多见充血、出血。心耳、心冠多有出血点或斑，1个病例心内膜有出血斑。A场剖检典型病变见图1—图4，B场剖检典型病变见图5—图8。

图1 A场脾脏出血性梗死

图2 A场肾脏表面有出血点

图3 A场肠系膜淋巴结大理石样出血

图4 A场会厌软骨出血

图5 B场脾脏出血性梗死

图6 B场肾脏土黄色、表面有出血点

图7 B场会厌软骨出血

图8 B场肺脏表面出血斑

4 实验室血清学及病原学检测结果

通过流行病学调查、现场解剖诊断，初步判定怀疑A、B两场发病猪均为猪瘟病毒感染。2018年9月对A场保育猪分别采集同群假定健康猪血清8份、发病猪血清4份，对B场采集发病死亡猪病料两套（包含扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏、肺脏），送相关级别实验室进行血清学和病原学诊断。同时对母猪免疫猪瘟E2蛋白灭活疫苗所产的30日龄断奶仔猪（未首免猪瘟）采血样8份，进行母源抗体监测。

（1）血清学检测。某BLS-2级实验室采用进口爱德仕猪瘟液相阻断ELISA试剂盒对20份血清学进行血清抗体阻断率检测；某县级BLS-1级实验室对其中的5份同群假定健康猪血清和4份发病猪血清采用免疫后早期抗体检测中敏感性明显高于进口阻断ELISA试剂盒，而特异性与之没有明显差异的国产猪瘟间接ELISA试剂盒[7-8]，按试剂盒说明操作步骤进行了检测。检测结果见表1和表2。

（2）病原学检测。某BLS-2级实验室在病原学检测中对上述样品进行了合并，其中B场两套病料合并为样品B，假定健康群8份血清合并为样品A1，4份发病猪血清合并为样品A2，采用荧光PCR检测方法进行检测，检测结果显示样品B、A1、A2均为猪瘟病原学阳性。

表1 猪瘟抗体液相阻断ELISA（爱德仕）检测结果统计

表2 猪瘟抗体间接ELISA（北京世纪元亨）检测结果统计

5 结论

由表1液相阻断ELISA检测数据可见，保育猪假定健康群血清样品阴性率为62.5%（5/8），症状明显猪只样品却没有阴性样品，且数据离散度降低至4.18%，应为抗体阴性猪受猪瘟野毒感染抗体逐渐上升，抗体阳性猪受野毒感染中和，抗体水平降低从而拉低了群体检测数据的离散度。结合现场流行病学调查、病理解剖及实验室血清学、病原学检测结果判断上述两场猪群发生死亡的主要原因为猪瘟病毒感染。同时注射过猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗母猪所产的30日龄断奶仔猪检测数据体现了良好的母源抗体水平和整齐度。

6 处理措施

（1）A场2018年8月中旬经对保育、肥育猪进行现场临床解剖诊断后，立即采用猪瘟E2蛋白灭活疫苗对母猪普免1次；同时加强了断奶仔猪30日龄猪瘟（ST传代细胞源）活苗首免工作的管理和监督，并对肥育猪紧急接种猪瘟（ST传代细胞源）活苗1次，剂量为3头份/头，但直至9月底保育及肥育阶段的发病情况依然没有明显改观。结合9月底B场发病及实验室诊断情况，兽医技术人员建议，10月份开始母猪采用猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗产前45天跟胎免疫，剂量为2毫升/头；且自10月2日起将30日龄仔猪猪瘟初免疫苗也调整为猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗，并对所有肥育早期（120日龄以内）猪只普免猪瘟E2蛋白灭活疫苗1次，剂量均为2毫升/头。自10月20日以后，保育及肥育猪群恢复稳定，再未出现批量死亡。

（2）B场猪群9月底经现场和实验室诊断后，采用猪瘟（脾淋源）活疫苗进行了紧急接种，剂量为4头份/头，病情没有得到有效控制，至10月下旬总死亡率达69.8%。

7 讨论

（1）猪瘟C株活疫苗被誉为控制猪瘟的“金标准”疫苗，能诱导针对不同强毒株和各种基因群的免疫保护[9]，临床保护率可达100%[10]。但笔者在长达10余年的20余次重大动物疫病春、秋季强制免疫病种抗体水平监测和50余个规模养殖场日常商业送检过程中，均有一定比例的免疫个体抗体阴性样品检出。这些阴性样品分布于保育末期、肥育早期、临产及产床母猪等各个阶段，比例从93.33%（14/15）到3.33%（1/30）不等。这与徐璐等（2014年）报道的从1 245份临床免疫血清样品中采用间接ELISA试剂盒检出14.62%（182/1 245）阴性样品、采用爱德仕公司液相阻断ELISA试剂盒检出27.71%（345/1 245）阴性样品[7]的研究结果一致。生产中将上述现象的原因主要归结为免疫操作不规范、免疫程序不合理或所用猪瘟活疫苗品质下降等，较少归结为猪只自身因各种原因导致的免疫耐受，对猪瘟C株活疫苗免疫反应低下不能产生有效保护抗体的原因。在本案例初期虽然加强了断奶仔猪猪瘟活疫苗的首免工作，但依然在50日龄前后的样品中检出大比例的猪瘟抗体阴性个体，分析表明免疫耐受应是此次保育仔猪和肥育前期仔猪发生猪瘟病毒感染的主要原因。

（2）猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病在猪场内的感染普遍存在[11]，作为猪的主要免疫抑制病对猪瘟疫苗诱导的体液和细胞免疫具有显著的影响[12-13]，是造成猪瘟疫苗免疫个体样品中检出阴性样品的重要原因。在临床多起产房仔猪发生非典型猪瘟的处置案例中，母猪繁殖与呼吸综合征或猪圆环病毒感染长期没有得到有效驯化和控制是关键诱因。在实践中往往随着以上两病的有效控制，猪瘟免疫抗体的监测数据也明显好转。

（3）猪瘟疫苗种类多，抗原含量差距较大，C株疫苗免疫后，可很快诱导细胞免疫，免疫早期虽然检测不到中和抗体，但猪只却能抵抗强毒的攻击，说明免疫早期细胞免疫的作用更加重要[14-15]。如果接种后晚些时间攻毒，猪群中和抗体水平与攻毒保护之间呈一定相关性[16-17]。因此规模化猪场制定免疫程序最好以群体抗体检测结果为依据。另外母猪群的免疫水平及均匀性直接关系到仔猪群的群体免疫效果，因此做好种猪群免疫，对仔猪猪瘟防控水平至关重要。猪瘟综合防控是一个复杂的工程，免疫预防是目前控制猪瘟的重要手段，在使用疫苗的同时，应配合良好的检测手段和科学的评价方法、以优化免疫程序才能保证猪瘟免疫效果。

（4）猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗与猪瘟（脾淋源、ST细胞源）活疫苗在本次发病案例的控制效果对比中表现出一定比较优势，但作为一种新工艺的猪瘟防控工具，在面对猪瘟这一对养猪行业举足轻重的重大疫病，在其防控中大范围推广使用尚需更多技术专家的系统攻毒保护试验和大量的田间处置案例及免疫检测对比分析研究数据的支持。