不同蒸制时间对三七总皂苷含量的影响

马敏敏 万晓青

浙江医院 浙江 杭州 310013

本研究旨在明确不同蒸制时间对三七总皂苷含量的影响，从而确立三七理想的蒸制时间。

1 材料

1.1 药材与试剂：生三七（批号130227，产地云南），购自杭州华东中药饮片有限公司；人参皂苷Rg1对照品（批号110703-201027，纯度99%，中国药品生物制品检定所）。甲醇（批号201301201，上海振兴化工一厂）；乙酸（批号20130129，中国杭州化学试剂有限公司）；高氯酸（批号20120626，国药集团化学试剂有限公司）；香兰素（批号20120928，上海双香助剂厂）；氢氧化钠（批号20130328，杭州萧山化学试剂厂）；水为自制超纯水（由纯水仪制备），除标明外其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器：PerkinElmer Lambda45紫外分光光度计（美国珀金埃尔默公司）；KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；MILLI-Q Synthesis A 10纯水仪（美国Millipore公司）；DZ30—32C10型离心机；DG120型粉碎机（浙江省瑞安市春海药材器械厂）；DGG—9240A型立式电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)；恒温水浴锅XMTE-2000型号R201D；FA2204B电子天平（上海精科天美科学仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备：取生三七饮片，均分为3等份各100g。置蒸笼中100℃下分别蒸制1、1.5、2h后取出，晾干，打粉，过3号筛。精确称取上述三七粉末各100mg，置50ml锥形瓶中，精密加入60%甲醇15ml，超声处理（100W，40℃）50min，取出，离心（3500r/min）15min。取上清液，用60%甲醇定容于25ml容量瓶中，摇匀即得。

2.2 对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品5.1mg于50ml容量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得到0.102mg/ml的人参皂苷Rg1对照品溶液。

2.3 检测波长的确定：精密移取对照品溶液及供试品溶液0.2ml于10ml具塞试管中，挥干溶剂，移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，于60℃烘箱中加热15min，立即置冷水中冷却，然后加入冰醋酸5.0ml，摇匀，放置15min，相应试剂进行空白对照，经Lambda45紫外可见分光光度计在200～700nm范围内扫描，确定最大吸收波长。如图1所示。确定最大吸收波长549.89nm为检测波长。

2.4 方法学考察：分述如下。

2.4.1 标准曲线的绘制：精密移取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0ml，分别置于10ml具塞试管中，挥干溶剂，移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，于60℃烘箱中加热15min，立即置冷水中冷却，然后加入冰醋酸5.0ml，摇匀，放置15min，相应试剂进行空白对照，在最大吸收波长处测定吸光度A，以A值为纵坐标（Y），以相应具塞试管人参皂苷Rg1含量（mg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程：Y=28.412X-0.0612，r=0.999。表明人参皂苷Rg1含量在0.008～0.049mg/ml与吸光度值呈良好的线性关系。

2.4.2 仪器精密度实验：取供试品溶液0.2ml，按

2.4.1项下方法操作显色，重复测定6次，计算RSD值为0.516%，符合精密度试验要求（RSD＜2%）。

2.4.3 稳定性实验：取供试品溶液0.2ml，按2.4.1项下方法显色，分别在10、20、30、40、50、60min测定吸光度，RSD值为0.792%，说明显色在60min内稳定。

2.4.4 重复性试验：平行取供试品6份，按2.1中方法制备成供试品溶液，并且按上述标准曲线法显色，测吸光度，RSD值为0.31%，符合重复性试验要求（RSD＜5%）。

2.4.5 加样回收率实验：精密吸取对照品溶液0.2ml，加入已知含量的皂苷供试品溶液中，按标准曲线法测定，平行5份，回收率为98.95±1.09%，RSD值为1.01%，符合加样回收率试验要求（RSD＜2%）。

2.5 不同蒸制时间下三七中总皂苷含量测定：精密称取不同蒸制时间下的三七样品各100mg，按2.1项制备供试品溶液制备方法制备，并测定其中总皂苷含量。结果表明，以1h为最佳蒸制时间。见表1。

表1 不同蒸制时间下三七中总皂苷的含量

3 讨论

三七作为常用的活血化瘀药，临床多用于治疗咯血、吐血、衄血、便血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等多种病症。近年来研究表明，三七生用有止血散瘀、消肿止痛之功，熟用有补血益气、壮阳散寒之效。有文献显示，蒸三七比生三七抗血小板聚集活性更强，且蒸制时间越长，抗血小板聚集活性越强。本研究通过对不同蒸制时间下，生、熟三七中总皂苷含量的比较发现，熟三七中总皂苷含量高于生三七；随蒸制时间变化，熟三七中总皂苷含量呈现先升高后逐渐降低的趋势；其中以蒸制1h后所得熟三七中总皂苷含量最高，可作为临床炮制应用熟三七的参照蒸制时间。