高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨

刘洪亮 杜金凤 郭航红 宋鉴达

摘要：通过运用高效液相色谱法来测定美白祛斑类化妆品申的8种激素。这八种激素分别为曲安西龙、氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松龙、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸可的松和醋酸地塞米松。在检测过程中，分别以甲醇溶液为基础来提取不同形态的化妆品。再结合HIB固相萃取柱富集净化之后，再采用专业的色谱柱仪器进行分离。其中，可以将乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱。在短短6mm之內就可以对8种激素进行分离和检测。结果：各个激素成分在0.03579-0.8639ug的范圍內都可以在一定面积內呈现线性的关系。且相关系数都大于0.999。结论：本操作方法相对比较简单，且分析的时间也较短。不仅有着很好的操作性，而且可以大范围地被用于测定美白祛斑类化妆品中。

关键词：高效液相色谱法;美白祛斑化妆品;多种激素

中图分类号：TQ072文献标识码：A 文章编号：1671-0460（2019）06-0139-04

随着时代的不断发展，女性朋友对美白祛斑的需求正变得越来越强烈。所以越来越多的女性也开始关注美白祛斑化妆品的安全性。虽然国家一再对美白祛斑类化妆品进行检测。但是有些化妆品生产商为了能够生产出见效快的美白祛斑产品，都会在那些产品中加入一些激素。虽然这些激素能够在短时间内美白产品，甚至大家在使用过后会使得皮肤变得更加白嫩。但是，如果长时间使用这些产品，则会使得面部皮肤遭受损害。甚至会在之后使得患者的新陈代谢出现紊乱。一些美白化妆品中添加的性激素则会在短时间内促进毛发的生长，甚至有效地防止皮肤老化。但是，如果长时间使用就会使得皮肤萎缩变薄，甚至诱发癌症。所以，在实际生产的过程中，需要对美白化妆品中的激素进行严格地检测，才能够在之后有效地控制化妆品的质量，确保化妆品在使用的过程中变得更加安全。这对保障大家的身体健康也有很重要的意义。本文主要采用高效液相色谱法对美白祛斑化妆品中的8种激素成分进行检测。

1 仪器与试剂

1.1一般仪器

本次试验所使用的仪器为Agilent1100型的高效液相色谱仪。此仪器内部主要是由G1322A、在线脱气、G1316A柱温箱和其他配套的仪器一起组成。并需要配合电子分析天平进行检测。

1.2使用试剂

在本次实验中所使用的试剂主要包括醋酸可的松、地塞米松、醋酸泼尼松龙、醋酸泼尼松、曲安西龙、氢化可的松和其他试剂都来自于中国药品生物制品检验所。在确定其纯度之后被应用于试验中。

2 试验方法

2.1色谱分析条件

整个色谱的柱长度为EcosilC18，其长度保持在250mmX1.6mm。其中检测的波长被控制在242nm。流动相内部乙腈和水的比例被控制在40：60左右。整体柱子的温度控制在40℃。图1为各个成分对照品高效液相分析结果。

2.2标准溶液的配置

可以分别先称取8种激素样品，并融入甲醇溶液进行配置。在经过加工之后就可以配置成一定浓度的混合标准储备液。并将已经配置好的混合溶液稀释成为8种标准质量浓度为2.0、3.0、4.0、8.0、20.0和40.0mg/ml的标准溶液，以便在后续试验中应用。

2.3样品溶液的配置

称取每一样化妆品0.5g，并将其放置在25ml的容量瓶内部，并在之后加入一定量的甲醇。等到在超声加工提取20min之后再放置冷却，并有效地将甲醇补充道一定的刻度。完成上述操作之后，可以选取适量的溶液放置在离心管内部，并在10000r/min转速的条件下离心加工10min。在加工之后再取出上部的清液。等到经过过滤之后再供测定使用。

2.4线性关系和检测限

将事先调制好的混合对照液稀释成8种标准的溶液。其溶液的浓度分别为2.75ug/ml、5.50ug/ml、11.00ug/ml、22.00ug/ml和44.00ug/ml，之后就会形成新的混合对照溶液。配置好之后再按照一定的色谱条件进行全面测定，再记录之后的色谱图。在得到相关数据之后，可以以对照品的浓度为横坐标，并以对照峰的面积为纵坐标。再在调整之后绘制合理的工作曲线。表1有效地显示了各个激素成分的线性回归方程。并分析其他相关的系数。

2.5稳定性试验

可以先取同一浓度的对照品，并将其沉淀0h、2h、4h、6h和8h。并按照一定的色谱条件进行分析。在分析结束之后就可以有效地计算各个激素内部的峰面积。在试验之后就能够有效地确保对照样品溶液在8h小时内都变得更加稳定。

2.6加样回收试验

可以先选取特定的试品溶液，之后再有效地进行测定，结果得出：内部确实存在不含有激素的样品，数量为6份。将每份溶液平均划为0.5g，之后再有效地分析各个成分内部的回收率。在经过一段时间的计算之后，可以得到如下的结论：曲安西龙为98.43%，RSD=0.66%;氢化可的松为98.43%，RSD=0.66%;地塞米松为98.47%，RSD=0.75%;醋酸氢化可的松为98.32%，RSD=0.65%。醋酸泼尼送为98.45%，RSD=0.69%。醋酸可的松为98.45%，RSD=0.66%。醋酸地塞米松为98.46%，RSD=0.65%

2.7样品分析

根据上面的试验方法对各类美白祛斑类化妆品进行检测，并检测内部的8种激素。之后再用特定的时间检测出的光谱图进行定性分析。但是都没有检测出额外的激素。其样品分离的色谱图如图2所示。从图中可以看出，样品在经过处理以后，内部的基质对激素检测并不会存在较多的干扰。并可以采用光谱图鉴来排除存在于样品中的防腐剂成分。在通过对不同的样品进行测定之后，就可以测定出阳性样品。

3结果讨论

3.1优化样品提取方法

只有采用超声的方式有效地提取样品，才能够更好地提高提取的效率。在考察包括甲醇、无水乙醇、水和流动相体内部的不同提取时间之后在分析提取效果。多数结果表明，如果能够以甲醇为提取溶液，并将提取的时间控制在20min左右，其本身的提取效率更高。所有的成分也能够被更好地提取出来。

3.2选择合适的固相萃取柱

根据有关文献的报道内容，其激素化合物在C18在SPE柱子上将会表现出良好的色谱保留行为，并在之后表现出良好的萃取效果。常规而言，OasisHLB-SPE是一种新型的反相色谱保留固相萃取柱。与传统的C18SPE柱子相比，其本身的吸附容量更宽，也能够更好地对激素物质进行净化。

3.3选择合适的柱温

通过上述研究的数据可以得知，这8种激素之间的分力度正有着显著的影响。只有在先后25～50℃等一系列的柱温条件下进行试验，才能够考察出不同激素之间的分离效果。最后得出，在28℃柱温度下降会表现出最佳的分离效果。

3.4选择合适的流动相

在此次试验的过程中，可以得出如下的结论：如果采用乙腈一水系来有效地进行洗脱，就可以得到最佳的梯度洗脱比例，最终也能够获得最佳的流动色谱条件。应该说，各个色谱峰内部的数值可以被有效地分离。

3.5选择检测波长

在通过采用DAD紫外全波长进行扫描之后，可以比较与单个激素成分相關的光谱图。可以发现本次醋酸可的松、地塞米松、醋酸泼尼松龙、醋酸泼尼松、曲安西龙、氢化可的松和其他试剂等对照品的最大吸收波长可以被控制在196～240nm之间。所以，在实际选择的过程中，可以选择196-240nm之间的数值作为波长。这样不仅能够有效地提高检测的灵敏度，还能够避免波长太过单一而使得内部的灵敏度有所降低。

以上从“样品提取方法”、“合适的固相萃取物”、“合适的流动相”和“选择合适的检测波长“等几个方面进行分析。可以看出，本次对八种激素进行检测的方法选用得当，确实能够取得好的检测效果。这种检测方法也值得被推广。

4 结语

综上所述，本文先选择合适的仪器和试验试剂，之后再将“色谱分析条件”、“标准溶液的配置”、“样品溶液的配置”、“线性关系和检测限”、“稳定性试验”、“加样回收试验”和“样品分析”的过程有效地结合在一起。在做好实验之后，再有效地就包括“优化样品提取方法”、“选择合适的固相萃取柱”、“选择合适的柱温”、“选择合适的流动相”和“选择检测波长”的方式分析结果。可以看出，本文所建立的方法非常简便准确。不仅有着很好的重现性，而且可以有效地被运用于化妆品8种激素的检测过程中，样品的检出率也很高。相关部门也确实可以通过运用这种方法来检测美白化妆品。也只有全面对美白祛斑类产品中的激素进行测定，才能够更好地保证美白类化妆品本身的质量。