侵袭性垂体瘤组织TNF-α与IL-12的表达及意义

刘思洋，吴建龙，乔建勇

（承德市中心医院，河北承德 067000）

垂体瘤是常见的颅内肿瘤之一，约占颅内肿瘤的10%[1]，人群发病率约为1/10万～7/10万，在颅内肿瘤中仅次于脑膜瘤和脑胶质瘤。根据垂体瘤的生物学行为可以分为侵袭性垂体瘤（invasive pituitary adenomas，IPA）、非侵袭性垂体瘤和垂体癌。IPA介于垂体癌和非侵袭性垂体瘤之间，虽然在组织学上属于良性肿瘤，但已经具有恶变倾向的生物学行为[2]。IPA的生长方式与恶性肿瘤相似，腺瘤呈结节样生长，常侵犯鞍旁海绵窦、蝶窦、斜坡及下丘脑等其它部位，手术难以完全切除，术后复发率高[3]。1940年Jefferson[4]认为，IPA生长超出蝶鞍区域并能够侵犯周围组织，解释了IPA不能完全切除且复发率高的原因。因此，研究IPA的发生机制及侵袭转移的影响因子对IPA的诊断和治疗具有重要意义。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-12（interleukin，IL-12）是与炎症、免疫应答密切相关的多功能细胞因子，被认为在肿瘤的生物学行为中发挥着重要作用。本研究探讨了IPA组织中TNF-α和IL-12表达的变化，以期为IPA发生、发展的机制研究及治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 组织标本 选取承德市中心医院、承德医学院附属医院和中国人民解放军第266医院经手术切除和病理证实的IPA和非IPA组织标本，各40例。侵袭性垂体腺瘤诊断标准：依据Wilson-Hardy 3～4级分类、术前MRI检查及术中观察发现，肿瘤已侵袭鞍区周围如海绵窦、鞍底周围骨组织等，但只有鞍底硬膜浸润不作为诊断标准。

1.2 免疫组化染色和结果判断 IPA和非IPA组织经4%中性甲醛固定24h后，常规石蜡包埋、切片，切片厚度4 μ m。免疫组化染色：采用MaxVision二步法。石蜡切片置60℃烤箱2h，然后脱蜡、水化，加入内源性过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化酶活性，滴加1：100鼠抗人多克隆一抗（美国Santa Cruz公司），4℃过夜，滴加抗鼠生物素标记的二抗（福州迈新生物技术公司），室温孵育20min后滴加DAB显色，苏木素复染，常规脱水、封片。

免疫组化结果判断：TNF-α及IL-12定位于细胞浆，二者阳性表达情况均采用阳性细胞百分比和染色强度进行综合判断。显微镜下观察组织切片中肿瘤细胞密集区，在400倍镜下随机选取5个视野：①阳性细胞计数，阳性细胞数＜10%为0分、10%～25%为1分、26%～50%为2分、≥50%为3分；②阳性染色强度判断标准：无色为0分、淡棕黄色为1分、棕黄色为2分、深棕黄色或棕褐色为3分。以①和②两项之和判定最终结果：阴性（-）0分，低表达（+）1～2分，中度表达（++）3～4分，高表达（+++）5～6分。

1.3 统计分析 应用SPSS 21.0统计软件进行数据统计学分析，组间比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNF-α在IPA组织及非IPA组织中的表达 40例IPA组织中TNF-α总阳性率为65.0%，非IPA组织中TNF-α总阳性率为25.0%，IPA组织中TNF-α阳性率明显高于非IPA组织，组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图1，附表：

附表 IPA及非IPA组织中TNF-α、IL-12的表达情况（n=40）

图1 IPA及非IPA组织中TNF-α的表达（×200，A.IPA,B.非IPA）

2.2 IL-12在IPA组织及非IPA组织中的表达 40例IPA组织中IL-12总阳性率为32.5%，非IPA组织中IL-12总阳性率为62.5%，IPA组织中IL-12阳性率明显低于非IPA组织，组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图2，附表。

图2 IPA及非IPA组织中IL-12的表达（×200，A.IPA,B.非IPA）

3 讨论

TNF-α是由活化的单核巨噬细胞分泌的一种小分子蛋白，基因定位于人第6对染色体6P23～6Q12区，由4个外显子和3个内含子组成，与组织兼容性复合体密切连锁，在细胞免疫、炎症反应、肿瘤免疫等多种生理与病理过程中发挥着关键作用[5]。TNF-α还可诱导多种肿瘤细胞双调蛋白的分泌，双调蛋白不但能诱导肿瘤细胞的增殖扩散，还能通过EGF受体相关通路刺激肿瘤细胞的无限增殖和恶变[6]；TNF-α能通过细胞内一系列信息传递激活P-选择素，激活的P-选择素一方面可以促使肿瘤细胞粘附于血管内皮，另一方面可与整合素共同介导血小板的激活，并使激活的血小板与肿瘤细胞相结合，使肿瘤细胞逃避免疫攻击，从而促进肿瘤的侵袭性生长[7-8]。

IL-12又称为自然杀伤细胞刺激因子，主要由巨噬细胞、树突状细胞、B淋巴细胞等抗原递呈细胞分泌产生，是具有多种生物学效应的免疫细胞生长刺激因子，具有强大的抗肿瘤作用[9]。Jafarzadeh等[10]发现，减少IL-12的分泌可促进乳腺癌进展；IL-12可以诱导干扰素-γ（IFN-γ）的生成，上调干扰素诱导蛋白10(IP-10)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)等血管生成抑制因子，下调基质金属蛋白酶(MMP)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、VEGF等血管生成诱导因子，协同抑制肿瘤血管生成及发挥抗肿瘤作用[11]；另外还有实验显示，人肿瘤异种移植物中的炎性细胞可以抑制肿瘤的生长，该作用是由IL-12所介导的[12]；IL-12还可上调钙粘着素和细胞粘附分子的表达水平，防止肿瘤转移[13]。

本研究采用免疫组化方法（Max Vision二步法）检测了IPA组织和非IPA组织中TNF-α和IL-12的表达情况，结果发现IPA组织中TNF-α的阳性表达率明显高于非IPA组织，IL-12的的阳性表达率明显低于非IPA组织，提示TNF-α和IL-12均参与了IPA的发生发展过程，二者可能在垂体瘤的增殖及侵袭性过程中发挥重要作用。因此，检测TNF-α和IL-12的表达情况可能为判断IPA的生物学行为、预后及治疗提供依据，但相关机制有待于进一步深入研究。