灯盏花素口崩片的稳定性

汤秀梅， 杨 燕， 丁江生， 孔美江， 张 煌， 王泽人

（1.云南省药物研究所，云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南白药集团创新研发中心，云南昆明 650111；2.深圳市药欣生物科技有限公司，广东深圳 518000）

灯盏花素口崩片是云南省药物研究所采用灯盏花素研制的口崩片，服用方便，适用于吞咽困难的患者，具有活血化瘀、通经活络功效，用于脑络瘀阻、中风偏瘫、心脉痹阻、胸痹心痛、中风后遗症及冠心病心绞痛证候者[1］。本实验将灯盏花素口崩片用聚氯乙烯泡罩包装后进行稳定性研究，考察其性状、崩解时限、溶出度、含有量变化情况，初步确定贮存有效期。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 708-DS溶出度仪、Agilent 1260高效液相色谱仪 （美国Agilent公司）；KB-1口崩片崩解仪 （天津天大天发科技有限公司）；恒温恒湿箱 （上海一恒科学仪器有限公司）。

1.2 试药 灯盏花素口崩片 （云南省药物研究所制剂室，

批号20160414、20160623、20160624、20160625）。 野黄芩苷对照品 （中国食品药品检定研究院，批号110842-201508，含有量91.3%）。甲醇、四氢呋喃为色谱纯；磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含有量测定[2］

2.1.1 检测波长 通过高效液相色谱仪中的二极管阵列检测器检测得到三维图谱，发现灯盏花素最大吸收波长为335 nm，与文献报道一致，故确定335 nm作为检测波长。

2.1.2 色谱条件与系统适用性试验 填充剂十八烷基硅烷键合硅胶；流动相甲醇-四氢呋喃-0.2%磷酸（28∶10∶62）；检测波长335 nm；柱温30℃；体积流量1.0 mL／min；进样量5 μL。理论塔板数按野黄芩苷计，应不低于5 000。

2.1.3 溶剂选择 分别用甲醇、65%甲醇、0.2%磷酸溶解口崩片，发现其在甲醇中溶解度最高，故确定甲醇作为溶剂。

2.1.4 超声时间选择 口崩片分别超声20、40、60 min，发现超声40 min时供试品含有量最高，故确定40 min作为超声时间。

2.1.5 对照品溶液制备 精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇超声40 min，冷却至室温，甲醇稀释成每1 mL含80 μg野黄芩苷的溶液，过滤，即得。

2.1.6 供试品溶液制备 取口崩片20片，研细，精密称取约80 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇超声40 min溶解，冷却至室温，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.1.7 线性关系考察 精密称取野黄芩苷对照品，甲醇稀释至刻度，制得贮备液 （0.836 mg／mL），分别精密吸取5、1、 1、 2、 1、 1 mL 置于 10、 5、 10、 25、 25、 100 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定。以峰面积 （Y）对质量浓度（X）进行回归，得回归方程 Y＝16 419X-156.8（r＝0.999 91）， 在 0.016 7～0.836 mg／mL范围内呈良好的线性关系。

2.1.8 重复性试验 按 “2.1.6”项下方法制备6份供试品溶液，在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定，测得野黄芩苷含有量RSD为1.23%，表明该方法重复性良好。

2.1.9 稳定性试验 按 “2.1.6”项下方法制备供试品溶液，室温下于0、3、6、9、12、18、24 h在 “2.1.2” 项色谱条件下进样测定，测得峰面积RSD为0.94%，表明溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.10 准确度试验 按 “2.1.5”项下方法制备贮备液，精密称取9份口崩片 （每份10 mg）置于25 mL量瓶中，分别加入贮备液1、2、3 mL，按 “2.1.6”项下方法制备供试品溶液；另取贮备液4 mL置于25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。将对照品、供试品溶液在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定，测得回收率为95%～102%，RSD为2.21%，表明该方法准确度良好。

2.1.11 范围试验 分别精密称取供试品量的50%、100%、150%各3份，置于100 mL量瓶中，按 “2.1.6”项下方法制备供试品溶液，在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定，测得在0.4～1.2 mg／mL范围内RSD为2.02%，可进行检测。

2.1.12 中间精密度试验 3名人员对同一批口崩片按“2.2.6”项下方法制备供试品溶液，分别用不同高效液相色谱仪在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定，测得含有量RSD为1.67%，表明方法中间精密度良好。

2.1.13 耐用性试验 选择体积流量 0.8、1.0、1.2 mL／min，柱温20、30、40℃，流动相甲醇-四氢呋喃-0.2%磷酸 （26∶8∶66、28∶10∶62、30∶12∶58），Ecosil-C18、 Kromasi 100-5 C18、 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，供试品、对照品溶液在 “2.1.2”项色谱条件下进样测定，测得野黄芩苷色谱峰分离度均大于2.0，表明方法耐用性良好。

2.2 溶出度测定[3-7］

2.2.1 溶出介质选择 由于灯盏花素在水中几乎不溶，故选择pH 4.5醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、0.25%十二烷基硫酸钠溶液、0.5%十二烷基硫酸钠溶液作为溶出介质进行考察，发现口崩片在pH 6.8磷酸盐缓冲液中溶出量最高，故确定pH 6.8磷酸盐缓冲液作为溶出介质。

表1 影响因素试验结果 （）

表1 影响因素试验结果 （）

条件 时间／d 性状 崩解时限／s 溶出度／% 含有量／（mg·片-1）—0淡黄色，味微甜 36±2.32 91.7±3.07 39.7±0.32高温 5 淡黄色，味微甜 38±2.64 91.4±2.46 39.2±0.38 10 淡黄色，味微甜 30±2.23 90.8±2.24 39.4±0.67高湿 5 淡黄色，味微甜 41±2.37 93.3±1.89 39.0±0.39 10 淡黄色，味微甜 36±2.07 90.9±2.42 39.5±0.54光照 5 淡黄色，味微甜 32±2.48 90.5±2.44 40.2±0.78 10 淡黄色，味微甜 39±2.61 92.5±3.31 40.4±0.99

2.2.2 溶出介质体积 文献 [8］报道，灯盏花素在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度为4.6 mg／mL。每片口崩片中含40 mg灯盏花素，由于溶出介质500 mL时大于每片饱和溶解体积的5倍以上，达到漏槽条件，故确定500 mL作为溶出介质体积。

2.2.3 色谱条件与系统适用性试验 同 “2.1.2”项。

2.2.4 对照品溶液制备 精密称取野黄芩苷对照品适量，pH 6.8磷酸盐缓冲液溶解并稀释成每1 mL中含80 μg野黄芩苷的溶液，即得。

2.2.5 供试品溶液制备 取口崩片适量，以500 mL pH 6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速75 r／min，同法操作，30 min后取样，滤过，即得。

2.3 稳定性考察[2，9-10］

1批灯盏花素口崩片进行影响因素试验，3批口崩片（中试）进行6个月加速稳定性试验和18个月长期稳定性试验。参照2015版 《中国药典》四部中口崩片崩解时限检查法，将崩解篮浸入1 000 mL量杯中，杯内水体积约900 mL，温度 （37±1）℃，分别测定6片，记录崩解时间。

2.3.1 影响因素试验 将口崩片 （批号20160414）置于高温 （60℃）、 高湿 [（90±5）%］、 强光 [（4 500±500）lx］下10 d后，分别于第0、5、10天取样，检测口崩片性状、溶出度、含有量，结果见表1，可知在不同时间点各指标无显著差异 （P＞0.05）。

2.3.2 加速稳定性试验 将3批灯盏花素口崩片 （中试，批号20160623、20160624、20160625）采用聚氯乙烯泡罩包装，在温度 （40±2）℃、相对湿度 （75±5）%下放置6个月，分别于第1、2、3、6个月末取样，检测口崩片性状、崩解时限、溶出度、含有量，结果见表2、图1，可知在不同时间点各指标无显著差异 （P＞0.05）。

2.3.3 长期稳定性试验 将3批口崩片 （中试，批号20160623、20160624、20160625）采用聚氯乙烯泡罩包装，在温度 （25±2）℃、相对湿度 （60±10）%下放置18个月，分别于第3、6、9、12、18个月末取样，检测口崩片性状、崩解时限、溶出度、含有量，结果见表3、图2，可知在不同时间点各指标无显著差异 （P＞0.05）。

图1 加速稳定性试验溶出度 （A）、含有量 （B）趋势

表2 加速稳定性试验结果 ）

表2 加速稳定性试验结果 ）

批号 时间／月 性状 崩解时限／s 溶出度／% 含有量／（mg·片-1）20160623 0 淡黄色，味微甜 28±2.19 87.5±2.67 36.2±0.27 1淡黄色，味微甜 25±2.80 86.8±3.31 36.7±0.60 2淡黄色，味微甜 32±2.37 88.4±2.22 36.5±0.47 3淡黄色，味微甜 30±2.04 87.1±2.56 37.4±0.61 6淡黄色，味微甜 29±2.58 89.7±2.22 37.1±0.56 RSD／% — — — 1.32 1.26 20160624 0 淡黄色，味微甜 38±2.73 89.2±2.63 36.3±0.37 1淡黄色，味微甜 36±2.45 87.5±1.87 36.8±0.34 2淡黄色，味微甜 38±2.76 88.3±2.24 36.7±0.28 3淡黄色，味微甜 39±2.19 91.0±2.33 37.5±0.61 6淡黄色，味微甜 34±2.90 87.6±3.03 36.9±0.68 RSD／% — — — 1.63 2.16 20160625 0 淡黄色，味微甜 34±2.32 88.2±2.40 36.6±0.59 1淡黄色，味微甜 32±2.64 87.4±2.09 37.0±0.68 2淡黄色，味微甜 31±2.73 89.7±3.36 36.4±0.50 3淡黄色，味微甜 35±1.72 88.1±2.35 37.6±0.45 6淡黄色，味微甜 37±2.53 87.6±2.10 36.4±0.58 RSD／% — — — 1.02 1.34

表3 长期稳定性试验结果 （x ±s）

图2 长期稳定性试验溶出度 （A）、含有量 （B）趋势

3 讨论

野黄芩苷为灯盏花素主要有效成分，故本实验以其为HPLC法测定含有量、溶出度的指标。参考2010年版 《中国药典》一部中灯盏花素含有量测定方法及相关文献考察流动相，发现甲醇-0.1%磷酸 （40∶60）洗脱时野黄芩苷峰与杂质峰未分开，导致峰型拖尾；四氢呋喃-1%冰醋酸（含0.05%三乙胺） （28∶72）[8］洗脱时出峰较快，但野黄芩苷峰与杂质峰均未分开；甲醇-四氢呋喃-0.2%磷酸（28∶10∶62）洗脱时野黄芩苷峰与杂峰达到基线分离，分离度达1.5以上，故确定其作为流动相。

然后，本实验考察了转速和取样时间，结果见表4。由表可知，转速 50 r／min时口崩片溶出度较低；转速100 r／min时溶出度过高，10 min即达到最大值，不利于控制；转速75 r／min时溶出度在30 min后基本达到最大值，故确定转速75 r／min，取样时间30 min。

表4 转速、取样时间考察结果

灯盏花素口崩片在口腔内可崩解，故要求其崩解速度快于常规剂型[11］，同时溶出度检测的是药物溶出速率和程度，而含有量是片剂主要检测项，故本实验将崩解时限、溶出度、含有量作为稳定性研究的关键检测指标。影响因素、加速稳定性、长期稳定性试验中的崩解时限均小于60 s，达到了口崩片相应要求，故不进行统计学比较，其中加速、长期稳定性试验结果表明，溶出度、含有量变化趋势平缓，RSD均小于2.5%，与0月比较基本无变化，故将有效期暂定为18个月。