陈皮药材和饮片黄酮类成分特征图谱研究

都盼盼，白宗利*，乐智勇,,3，许冬瑾

(1.康美(北京)药物研究院有限公司，北京 102600；2.康美药业股份有限公司，广东 普宁 515300；3.广东康美药物研究院有限公司，广东 广州 510000)

陈皮为芸香科植物橘(Citrusreticu1ataB1anco)及其栽培变种的干燥成熟果皮，药材分为陈皮和广陈皮，具有理气健脾、燥湿化痰的功效，临床用于脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多的治疗。现代药理学研究表明，陈皮具有抗炎[1]、抗氧化[2]、抗心血管疾病[3]及抗癌[4-5]的作用，其活性成分主要为黄酮类化合物，如橙皮苷、川陈皮素、橘皮素等。

2015年版《中国药典》规定陈皮的质量控制指标为薄层鉴别、水分和黄曲霉毒素检查、橙皮苷含量测定，这能在一定程度上控制陈皮的质量，但不甚全面。本研究对陈皮、新会陈皮药材及陈皮饮片进行研究，拟建立陈皮药材和饮片黄酮类成分的特征图谱，为其质量全面评价的建立提供参考依据。

1 仪器与试药

Agilent1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技中国有限公司)；XP-6型、XPE205型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；KQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HWS-28型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)。

乙腈(色谱纯、175163、赛默飞世尔科技中国有限公司)；甲醇(分析纯、20180226、北京化工厂)；甲酸(分析纯、20160414、天津市光复科技发展有限公司)；超纯水(自制)。

橙皮苷对照品(110721-200613，96.1%，中国食品药品检定研究院)。收集各饮片生产企业陈皮饮片20批；收集亳州市场陈皮药材20批，收集道地产区广东新会陈皮40批，用于陈皮药材和饮片特征图谱研究。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Kromasil 100-2-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈为流动相A，以1%甲酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为1.0 mL/min；检测波长为283 nm。理论塔板数按橙皮苷计算应不低于2 000。

表1 梯度洗脱程序

2.2 对照品溶液制备

取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg橙皮苷的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

取本品粗粉约0.25 g，精密称定，置锥形瓶中，精密量取甲醇25 mL，超声30 min，放冷，用甲醇中补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学验证

按照《药品质量标准分析方法验证指导原则》(《中国药典》2015年版四部通则)的要求，对上述方法进行方法学验证。稳定性实验表明样品在24h内稳定性良好；精密度和重现性试验测得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD<5.0%，说明该方法重复性良好。

2.5 特征图谱分析结果和相似度分析

2.5.1 陈皮药材特征图谱 20批陈皮药材的供试品溶液按照“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图。结果见图1。

图1 陈皮药材特征图谱

利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱。结果见图2。

图2 陈皮药材对照特征图谱(S.橙皮苷)

数据表明，9个特征峰的相对保留时间分别为0.898(峰1)、1.000(峰2，S)、1.365(峰3)、1.521(峰4)、1.680(峰5)、1.952(峰6)、2.041(峰7)、2.112(峰8)、2.239(峰9)，相对保留时间RSD均小于3%，说明不同基源和不同批次的样品有较多相同的成分；相对峰面积差异较大，RSD介于38.6%～85.4%之间，说明不同生长地区、不同环境与存储条件的药材含量差异较大。

2.5.2 新会陈皮药材 共有特征图谱40批新会陈皮的供试品溶液按上述确定条件进样，记录色谱图。结果见图3。

图3 新会陈皮药材特征图谱

利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱。结果见图4。

数据表明，8个特征峰的相对保留时间分别为0.898(峰1)、1.000(峰2，S)、1.355(峰3)、1.671(峰4)、1.944(峰5)、2.036(峰6)、2.113(峰7)、2.231(峰8)，相对保留时间RSD均小于3%，说明不同厂家和不同批次的样品有较多相同的成分；相对峰面积差异较大，RSD介于10.8%～26.0%之间，说明新会地区不同采收时间、不同栽培方式与不同批次的药材含量有一定差异。

2.5.3 陈皮饮片 特征图谱20批陈皮饮片的供试品溶液按上述确定条件进样，记录色谱图。结果见图5。

图4 新会陈皮药材对照特征图谱(S.橙皮苷)

图5 陈皮饮片特征图谱

利用中药指纹图谱相似度评价系统软件，采用自动匹配法生成共有模式对照特征图谱。结果见图6。

图6 陈皮饮片对照特征图谱(S.橙皮苷)

数据表明，7个特征峰的相对保留时间分别为0.899(峰1)、1.000(峰2，S)、1.372(峰3)、1.527(峰4)、1.945(峰5)、2.045(峰6)、2.116(峰7)，相对保留时间RSD均<3%，说明不同厂家和不同批次的样品有较多相同的成分；相对峰面积差异较大，RSD介于5.3%～14.1%之间，说明不同产地、不同炮制方法与不同批次对饮片含量有一定影响。

2.5.4 陈皮饮片与陈皮、新会陈皮药材特征 图谱之间的相关性 将陈皮饮片共有特征图谱S1、陈皮药材共有特征图谱S2和新会陈皮药材的共有特征图谱S3进行对比，验证其是否有相关性。结果见图7。

结果表明，陈皮药材、新会陈皮药材与陈皮饮片有7个共有峰，说明有较多相同的成分，新会陈皮与陈皮药材相比少1个特征峰，陈皮饮片与陈皮药材相比少2个特征峰，说明陈皮药材与新会陈皮、陈皮饮片的特征图谱存在差异。

图7 陈皮药材、新会陈皮药材和陈皮饮片特征图谱比较

3 讨论

通过查阅文献[6-7]，考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸溶液三种流动相组成，选用比甲醇洗脱能力强的乙腈为有机相，0.1%甲酸的加入可很好地改善峰形。选用超声法[8-9]制备供试品溶液，对确定的方法进行验证，选定的方法峰形和分离度良好，理论塔板数按橙皮苷峰计算不低于2 000。

参照《中国药典》2015年版一部陈皮项下含量测定方法，测定20批陈皮药材、40批新会陈皮药材和20批陈皮饮片的橙皮苷含量，结果显示11批陈皮药材符合《中国药典》标准，合格率为55.0%；8批新会陈皮药材达到《中国药典》标准，合格率为20.0%；13批陈皮饮片符合《中国药典》标准，合格率为65.0%。结果与已有的研究报道[10]较一致，说明单一成分的含量检测不能总体反映陈皮质量的优劣。

本研究结果可为陈皮特征图谱的建立提供参考。新会陈皮和陈皮药材之间的差异性成分，陈皮药材、陈皮饮片在炮制过程中的质量传递与变化，尚需要进一步研究。