糖基化终产物与糖尿病及糖尿病肾病的关系

2019-03-21孙文利

中国卫生标准管理 2019年4期

孙文利

【关键字】糖基化终产物；肾病；糖尿病；酶联免疫吸附法；血清；蛋白质糖基化

糖尿病（diabetes mellitus，DM）为全球范围内较为常见的一种慢性基础性疾病，糖尿病并发症已成为导致糖尿病患者死亡的主要原因之一。研究证实，机体高血糖状况下，蛋白质非酶促糖基化生成的糖基化终产物（advanced glycosylation end products，AGEs）致病作用较大[1]，AGEs与糖尿病并发症程度有紧密联系。糖尿病慢性并发症之一则为糖尿病肾病，若早期不接受相应诊治，疾病发展到一定阶段，AGEs增高。所以，人体心肌、肾脏、血清等组织AGEs指标可用来监测糖尿病、糖尿病肾病病情状况。现纳入我院2016年3月—2018年5月收治的40例糖尿病、40例糖尿病肾病和40例健康者重点讨论AGEs水平与疾病之间的关系。具体报告如下：

1 资料及方法

1.1 一般资料

随机从我院2016年3月—2018年5月收治的糖尿病、糖尿病肾病患者中各抽取40例进行讨论，分别纳入糖尿病组、糖尿病肾病组，另选取同时期到我院体检健康者40例作为对照组。入选标准：（1）40例糖尿病和40例糖尿病肾病患者均接受血糖等检查确诊满足《2012年糖尿病诊疗指南》[2]《中国糖尿病诊疗指南解读——糖尿病肾病》[3]中糖尿病、糖尿病肾病诊断标准；（2）纳入研究前患者均未接受相应治疗干预；（3）本研究经我院伦理委员会同意，且患者及其家属均同意知晓本研究；（4）病历资料齐全。排除标准：（1）精神、智力障碍者；（2）中途脱落研究者；（3）合并其他并发症者；（4）肝肾、心脑等功能严重异常者。对照组：男性22例，女性18例，年龄36～78岁，平均为（56.3±1.2）岁；糖尿病组：男性23例，女性17例，年龄35～79岁，平均为（56.7±1.1）岁；糖尿病肾病组：男性22例，女性18例，年龄36～78岁，平均为（56.7±1.1）岁。各组患者基本资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

制备抗原：将核糖核酸酶25 g、牛血清白蛋白50 g加入到葡萄糖1 mol/L中，溶于磷酸盐缓冲液0.2 mol/L中，用微量过滤器滤除细菌，37℃环境下，孵育3个月。并制备糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）、糖基化终末产物（AGE-RNase）。用磷酸盐缓冲液0.01 mol/L，透析72小时，并将未结合的葡萄糖去除。用荧光分光光度计（RF-540/V4.0型）测定AGEs荧光值，发射波长为440 nm，激发波长为370 nm。

制备抗AGEs抗体：充分乳化弗氏不完全佐剂2 mL和AGERNase 20 g/L，用兔子做实验对象，多点注射，每间隔1周注射1次，共注射4次。最后一次注射后，实施加强免疫，持续8～10 d，抽取静脉血，抗体效价用琼脂双向扩散法测定。如效价低，则实施一次加强免疫。直至抗体效价理想时，抽取其颈动脉血液，分离血清，将其放置于零下20℃环境下备用。

抽取3组研讨对象空腹静脉血液5 mL，离心处理后，分离血清，并将其放置在零下20℃环境中保存，用酶联免疫吸附法测定其血清AGEs指标。

1.3 指标判定

本研究中各检验均由我院检验科专业且工作经验丰富的2名医生负责，若发生意见分歧，则商讨确定。

1.4 统计学方法

用统计学软件SPSS 13.0版本分析数据，计量资料用（±s）表示，采用t检验，计数资料用（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

比较3组研讨对象AGEs指标，DM组、DN组高于对照组，DN组高于DM组，组间数据差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。

3 讨论

蛋白质糖基化也称羰氨反应（Maillard反应）[4]，非酶参与状况下，葡萄糖可自发结合蛋白质游离氨基，生成阿美多米（Amadori）物质，此物质经相应转变后可生成不可逆AGEs，发生蛋白质交联，干扰其功能、结构，与特异性受体一起对单核巨噬细胞产生活化功效，激活转录因子，促进释放和合成生长因子，氧化应激受到诱导，进而损伤组织细胞。目前已知糖尿病、糖尿病肾病患者组织、血清中AGEs指标明显增高，血清AGEs指标上升的原因可能为肾脏清除功能减少和生成多导致。AGEs为混合物，多样性结构，所以，检测组织和血清中AGEs指标有一定难度。现临床所使用的检测方式均具有一定缺陷性[5]，如准确性不高、设备条件要求高、无法广泛推广等。本研究中采用酶联免疫吸附法进行检测，利用固相抗原与待测抗原竞争结合来反应AGEs水平。相比与其他方式，此方式具有精确性好、特异性高、成本低、快速简便等优势，且可在普通实验室使用[6-7]。目前用酶联免疫吸附法测定AGEs指标，可实现普查糖尿病、糖尿病肾病的目的，以早期诊治疾病，并动态监测疾病发病和并发症状况[8-9]。但因人们生活方式和饮食习惯不同，目前仍然无法测定健康人群AGEs标准范围。研究报告指出，AGEs生成量与葡萄糖浓度有一定关系，血糖浓度正常状况，AGEs生成速度较为缓慢[10-11]。但若血糖指标增高时，AGEs生成速度显著增快，所以，糖尿病患者体中则大量蓄积AGEs[12-13]。而人体体内循环时，多由肾脏清除AGEs，研究表明，糖尿病肾病患者AGEs水平显著高于糖尿病患者，而给予血液透析是否可降低AGEs水平，目前暂无明确定论。

表1 比较3组研讨对象AGEs指标（±s）