土槿乙酸C-18醇酯衍生物的合成及其体外免疫抑制活性研究

曾宪杰，张 猜，陈守强，陈 虹

（1.天津医科大学药学院，天津300070；2.武警后勤学院军事药学教研室，天津300309）

土槿皮（pseudolarixkaempferi，PAB）是我国南方特有松科植物金钱松（Pseudolarixamabilis）的根皮或近根部树皮，最早见于清代赵学敏所著《本草纲目拾遗》,性辛、温、有毒；归肺、脾经；功能杀虫止痒，用于疥癣瘙痒[1-2]。土槿乙酸（pseudolaric acid B，PAB，图1）为土槿皮的主要活性成分[3]，其基本母核是特殊的薁类结构,并具有内酯环和共轭双烯酸侧链的结构,这类结构在天然产物中是很少见的。我们课题组研究显示土槿乙酸能显著改善迟发型超敏反应小鼠的耳肿胀并呈剂量依赖，其作用机制通过抑制与MAPK与PPAR信号通路相关的p38MAPK、ATF-2、MK2、HSP27 及 TNF-α 活性[4-5]。土槿乙酸还具有抗肿瘤[6]、抗白血病[7]、抗真菌[8]、抗血管生成等作用。PAB是很好的免疫抑制活性先导化合物。为寻找高效、低毒，具有良好水溶性的免疫抑制剂，对土槿乙酸进行进一步的结构改造。

图1 土槿乙酸结构Fig 1 Pseudolaric acid B

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂 Varian Mercury Vx400核磁共振光谱仪；Agilent 6210 LC-TOF质谱测定仪；XT显微熔点仪（温度未校正）；DHG-9000A电热恒温鼓风干燥箱；ZK-30BS真空干燥箱；BÜCHI R-124旋转蒸发仪。薄层色谱和柱色谱所用硅胶（青岛海洋化工公司）；土槿乙酸系实验室自提取提纯得到，纯度大于95%；无水二氯甲烷用五氧化二磷回流4 h后蒸出备用；无水四氢呋喃以二苯甲酮做检测试剂，用金属钠回流制得，当溶液变为深蓝色后蒸出备用；无水甲醇用 CaO（250 g/L）回流 6 h，过夜，加至3A型分子筛中贮存备用。除特殊说明外，本实验所用试剂均从北京百灵威试剂公司购得。

1.2 合成方法 土槿乙酸C18羧酸的还原：在25mL三颈瓶中依次加入土槿乙酸（PB，0.432g，1 mmol），10 mL无水二氯甲烷，移至冰浴，冷却反应液温度至0℃。在此温度下，将过量草酰氯（0.94 mL，10 mmol）用恒压滴液漏斗缓慢滴加至反应瓶中，滴加完毕，移至室温搅拌反应2 h。减压蒸馏除去过量草酰氯，得泡沫状固体粗产物。将10 mL无水 四氢呋喃（THF）迅速加入反应瓶中，移至冷阱冷却反应液温度至-40℃，在N2保护下，分两次缓慢加入LiAlH[OC（CH3）3]3（3.6 mL，4 mmol），滴加完毕，室温搅拌反应。TLC检测至反应完全。将反应移至冰浴，15 min后，加无水乙醇20mL淬灭还原剂。然后用10%HCl洗涤，20mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，加入无水Na2SO4脱水，过滤，减压蒸馏得到粗品，粗品经柱色谱（二氯甲烷：乙酸乙酯）纯化得白色固体粉末0.338 g，收率81%。

土槿乙酸C18酯衍生物的合成：在15 mL干燥的反应瓶中依次加入土槿乙醇（PB-OH，0.062 g 0.15 mmol），10 mL干燥 DCM 和小分子酸类（0.15 mmol），冰浴下加入HOBt（0.18 mmol），EDCI（0.18 mmol），2滴三乙胺，15 min后移至室温反应，TLC点板检测。反应完毕，分别加入15 mL 10%HCI，饱和NaHCO3，蒸馏水，饱和NaCl洗涤，萃取，取二氯甲烷层，加入无水Na2SO4脱水，过滤，滤液回收，减压蒸馏溶剂得到粗品，粗品以不同比例的二氯甲烷和乙酸乙酯为流动相，经柱色谱法纯化得产品。以此路线共合成10个化合物，B1-B10。化合物B1-B10合成路线及所引入基团见图2。

图2 土槿乙酸衍生物B1-B10的合成路线Fig 2 The synthesis of pseudolaric acid B derivatives B1-B10 Conditions and reagents：（a）anhydrous DCM，oxalyl chloride,0℃-rt;（b）anhydrousTHF,LiAlH[OC(CH3)3]3,N2,-40℃;（c）anhydrousDCM,R-COOH,HOBt,EDCI,0℃-rt.

1.3 药理实验部分

1.3.1 MTT法检测目标化合物对小鼠脾淋巴细胞的毒性作用[9]

（1）在超净台中取昆明小鼠脾脏，并按上述方法制备单细胞悬浮液。

（2）将土槿乙酸衍生物和阳性药霉酚酸酯分别溶于 DMSO，用培养液稀释至 10 μmol/L、1 μmol/L、0.1 μmol/L、0.01 μmol/L, 其中 DMSO 含量均低于0.1%，空白培养基同样处理。

（3）于96孔板中以每孔 100 μL（约 1×105个细胞）进行培养，同时加入土槿乙酸衍生物和阳性药霉酚酸酯，每种药物设置4个浓度（10μmol/L、1μmol/L、0.1 μmol/L、0.01 μmol/L)，每个浓度设置 3 个复孔，并以RPMI1640培养液为调零孔。向阴性对照组中加入与给药组相同体积的溶剂。置于37℃，5%二氧化碳温箱中。

（4）48 h后每孔加 20 μL 5mg/mL MTT 溶液（PBS配制）。37℃条件继续孵育4 h，吸取上清液80 μL，每孔加入100 μL三联液用于溶解甲簪颗粒，轻度振荡充分溶解。

（5）在波长570 nm下，用酶标仪测定光密度值（OD），以溶剂处理的细胞为阴性对照组，用以下公式计算药物对细胞的抑制率，并计算IC50：抑制率=（阴性对照组OD值－加药组OD值）/（阴性对照组OD值－空白对照组OD值)×100%。

1.3.2 MTT法检测目标化合物对小鼠T、B淋巴细胞增殖的抑制作用

（1）在超净台中取昆明小鼠脾脏，制备淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为1×106-5×106/mL，加入ConA或LPS至终浓度为5 μg/mL。

（2）以每孔100 μL培养于96孔板中，同时加入土槿乙酸衍生物与阳性药霉酚酸酯100 μL，每个药物设置 4 个浓度（10 μmol/L、1 μmol/L、0.1 μmol/L、0.01μmol/L），每个浓度设置 3个复孔，并以RPMI1640培养液为调零孔。向阴性对照组中加入与给药组相同体积的溶剂，置于37℃，5%CO2温箱中。

（3）48 h后每孔加 20 μL 5 mg/mL MTT 溶液（PBS配制）。37℃继续孵育4 h，吸取上清液80 μL，每孔加入三联液100 μL溶解甲簪颗粒，轻度振荡溶解。

（4）在波长570 nm下，用酶标仪测定光密度值(OD)，以溶剂处理的细胞为阴性对照组，以RPMI1640培养液为空白对照组，用以下公式计算抑制率：抑制率=（阴性对照组OD值－加药组OD值）/（阴性对照组OD值－空白对照组OD值）×100%。

2 结果

2.1本文共合成了10个目标化合物，均为未见文献报道的新化合物，经1H-NMR、13C-NMR和HRESI-MS确证了这些化合物的结构。这些化合物的理化数据如下。

B1：乳白色粉末，66 mg，86%yield，1H NMR（400 MHz，CDCl3）：δ 7.59（dd，J=1.7，0.8 Hz，1H，H-5’），7.24-7.16（m,2H,H-8,H-4’),6.52(dd,J=3.5,1.7 Hz,1H,H-6’),6.46(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.12(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.57(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.75 (s,2H,H-18),3.72 (s,3H,-OCH3),3.26(m,1H,H-3),3.07(dd,J=13.9,6.0 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.6,6.3 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61 (ddd,J=15.1,3.9,1.7 Hz,1H,H-9b),2.13(s,3H,-OCOCH3),2.05(s,1H,H-6b),1.86(s,3H,CH3-17),1.81-1.66(m,5H,H-1,2,5),1.57(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.1,169.4,168.1,158.5,146.5,144.5,141.8,137.8,134.4,133.1,126.9,121.7,118.1,111.9,90.3,83.8,69.7,55.2,52.0,49.5,33.3,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：535.1918(M+Na)+, 理论值：535.1944[M+Na]+

B2：乳白色粉末，74 mg，89%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.36(d,J=3.7 Hz,1H,H-4’),7.31(d,J=3.8 Hz,1H,H-3’),7.24-7.17(m,1H,H-8),6.45(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.14(d,J=11.0 Hz,1H,H-14),5.60 (d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.81(s,2H,H-18),3.72(s,3H,-OCH3),3.27(m,1H,H-3),3.07 (dd,J=14.1,6.1 Hz,1H,H-5a),2.89 (dd,J=15.5,6.3 Hz,1H,H-6a),2.75 (dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61(dd,J=15.0,2.4 Hz,1H,H-9b),2.13(s,3H,-OCOCH3),2.05 (s,1H,H-6b),1.87 (s,3H,CH3-17),1.82-1.62(m,5H,H-1,2,5),1.58(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.1,173.0,169.4,168.1,156.8,144.7,141.8,138.5,134.5,132.1,128.0,121.5,119.0,111.5,90.3,83.8,71.1,55.2,52.0,49.5,33.4,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：580.1801(M+Na)+,理论值：580.1795[M+Na]+

B3：乳白色粉末，87 mg，91%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.20(s,2H,H-8,3’),6.44(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.10 (d,J=10.9 Hz,1H,H-15),5.58(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.74(s,2H,H-18),3.72 (s,3H,-OCH3),3.26 (d,J=5.8 Hz,1H,H-3),3.07 (dd,J=14.2,6.3 Hz,1H,H-5a),2.89 (dd,J=15.5,6.2 Hz,1H,H-6a),2.75 (dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61(dd,J=15.1,3.4 Hz,1H,H-9b),2.12(s,3H,-OCOCH3),2.04 (s,1H,H-6b),1.84 (s,3H,CH3-17),1.80-1.68(m,5H),1.57(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.1,169.4,168.1,156.7,145.9,141.8,138.2,134.5,132.6,128.6,127.4,122.0,121.6,103.8,90.3,83.8,70.3,55.2,52.0,49.6,33.4,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：669.1309(M+H)+,理论值：669.0257[M+H]+

B4：乳白色粉末，217 mg ，87%yield,1HNMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.20(m,1H,H-8),6.43 (dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.05(d,J=10.8 Hz,1H,H-15),5.54(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),5.30(s,1H,H-2’),4.59(s,2H,H-5’),4.49(dd,J=8.3,5.1 Hz,1H,H-3a’),4.03(dd,J=14.4,7.2 Hz,1H,H-4a’),3.93(dd,J=13.8,7.3 Hz,1H,H-4b’),3.72 (s,3H,-OCH3),3.26 (d,J=5.8 Hz,1H,H-3),3.07 (dd,J=14.2,6.3 Hz,1H,H-5a),2.89 (dd,J=15.5,6.0 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61(dd,J=15.1,3.4 Hz,1H,H-9b),2.26(m,1H,H-3b’),2.12(s,3H,-OCOCH3),2.06-1.83(m,6H,H-6b,1,2,5),1.79(s,3H,CH3-17),1.57(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)δ 173.2,173.1,169.4,168.1,141.8,137.8,134.5,133.1,126.8,121.7,90.3,83.8,69.8,69.7,69.4,55.2,52.0,49.6,33.3,30.7,30.2,28.8,27.8,25.3,24.3,21.8,20.2,14.6.

HR-ESI-MSm/z：539.2263(M+H)+,理论值：539.2257[M+H]+

B5：乳白色粉末，67 mg，83%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.66(s,1H,H-5’),7.60(d,J=15.8Hz,1H,H-3’),7.44 (d,J=1.3 Hz,1H,H-7’),7.21(m,1H,H-8),6.59(d,J=1.9 Hz,1H,H-8’),6.45(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.19(d,J=15.6 Hz,1H,H-2’),6.08(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.55(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.64 (s,2H,H-18),3.72 (s,3H,-OCH3),3.25(m,1H,H-3),3.07(dd,J=14.3,5.6 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.6,6.3 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.60 (ddd,J=15.0,4.0,1.7 Hz,1H,H-9b),2.12(s,3H,-COCH3),1.88(m,1H,H-6),1.84(s,3H,CH3-17),1.81-1.68(m,5H,H-1,2,5),1.57(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.2,169.4,168.1,166.7,144.6,144.5,141.8,137.6,135.1,134.4,133.7,126.3,122.6,121.8,117.6,107.4,90.3,83.9,69.3,55.2,52.0,49.6,33.3,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：561.2070(M+Na)+，理论值：561.2101[M+Na]+

B6：乳白色粉末，73 mg90%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.49(d,J=1.4 Hz,1H,H-6’),7.45(d,J=15.7 Hz,1H,H-3’),7.24-7.18(m,1H,H-8),6.62(d,J=3.4 Hz,1H,H-8’),6.49-6.46(dt,J=7.0,2.8 Hz,2H,H-14,H-7’),6.35(d,J=15.7 Hz,1H,H-2’),6.08(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.55(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.64(s,2H,H-18),3.72(s,3H,-OCH3),3.25(m,1H,H-3),3.07(dd,J=14.3,5.6 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.6,6.3 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61 (ddd,J=15.0,4.0,1.7 Hz,1H,H-9b),2.12(s,3H,-COCH3),1.88(m,1H,H-6b),1.83(s,3H,CH3-17),1.80-1.68(m,5H,H-1,2,5),1.57(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.2,169.4,168.10,166.8,150.9,144.9,141.9,137.5,134.4,133.7,131.4,126.2,121.8,115.5,115.0,112.3,90.3,83.9,69.3,55.2,52.0,49.6,33.3,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：561.2057(M+Na)+，理论值：561.2101[M+Na]+

B7：淡黄色粉末，72 mg，88%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 7.72(d,J=16.0 Hz,1H,H-3’),7.58-7.49(m,2H,H-5’,9’),7.45-7.35(m,3H,H-6’,7’,8’),7.24-7.17(m,1H,H-8),6.53-6.40(m,2H,H-14,2’),6.10(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.56(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.66 (s,2H,H-18),3.72 (s,3H,-OCH3),3.26(m,1H,H-3),3.07(dd,J=14.3,5.6 Hz,1H,H-5a),2.89 (dd,J=15.6,6.3 Hz,1H,6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,9a),2.61(ddd,J=15.1,3.9,1.7 Hz,1H,9b),2.12(s,3H,-OCOCH3),1.89(m,1H,6b),1.85(s,3H,CH3-17),1.82-1.59(m,5H)，1.58(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.1,169.4,168.1,166.7,145.2,141.8,137.6,134.4,134.3,133.7,130.4,128.9,128.1,126.4,121.8,117.8,90.3,83.9,69.4,55.2,52.0,49.6,33.3,30.7,29.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.8.

HR-ESI-MS m/z：571.2278(M+Na)+，理论值：571.2308[M+Na]+

B8：淡黄色粉末，67 mg，78%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 10.04(s,1H,CHO-7’),7.91(d,J=8.1 Hz,2H,H-6’,8’),7.74 (d,J=16.0 Hz,1H,H-3’),7.69 (d,J=8.1 Hz,2H,H-5’,9’),7.25-7.17(m,1H,H-8),6.59(d,J=16.0 Hz,1H,H-2’),6.47(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.11 (d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.57(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.68(s,2H,H-18),3.72 (s,3H,-OCH3),3.26 (d,J=6.0 Hz,1H,H-3),3.07(dd,J=14.1,6.1 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.5,6.2 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,H-9a),2.61(dd,J=15.0,2.5 Hz,1H,H-9b),2.13(s,3H,-OCOCH3),1.88 (s,1H,H-6b),1.86 (s,3H,CH3-17),1.82-1.67(m,5H,H-1,2,5),1.58(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 191.4,173.1,169.4,168.1,166.1,143.4,141.8,140.0,137.8,137.3,134.5,133.4,130.2,128.6,126.7,121.8,121.1,90.3,83.8,69.8,55.2,52.0,49.6,33.4,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：599.2277(M+Na)+,理论值：599.2257[M+Na]+

B9：淡黄色粉末，75 mg，85%yield，1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 8.39 (t,J=1.8 Hz,1H,H-5’),8.30-8.19(m,1H,H-7’),7.84(d,J=7.8 Hz,1H,H-9’),7.74 (d,J=16.0 Hz,1H,H-3’),7.60 (t,J=8.0 Hz,1H,H-8’),7.22-7.20(m,1H,H-8),6.60(d,J=16.0 Hz,1H,H-2’),6.47(dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.11(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.58(d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.69(s,2H,H-18),3.72(s,3H,-OCH3),3.27 (d,J=5.9 Hz,1H,H-3),3.07 (dd,J=14.0,6.0 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.5,6.3 Hz,1H,H-6a),2.75 (dd,J=15.0,8.7 Hz,2H,H-9a),2.61 ((dd,J=15.0,2.5 Hz,1H,H-9b),2.13(s,3H,-OCOCH3),2.05(s,1H,H-6b),1.86 (s,3H,CH3-17),1.82-1.62(m,5H,H-1,2,5),1.58(s,3H,CH3-12).

13C NMR (101 MHz,CDCl3)：δ 173.1,169.4,168.1,165.8,148.7,142.2,141.8,137.9,136.1,134.5,133.7,133.3,130.0,126.7,124.6,122.4,121.7,121.1,90.3,83.8,69.9,55.2,52.0,49.6,33.3,30.7,28.8,27.8,24.3,21.8,20.2,14.7.

HR-ESI-MS m/z：616.2170(M+Na)+,理论值：616.2159[M+Na]+

B10：淡黄色粉末，86 mg，89%yield,1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ 8.02 (d,J=15.9 Hz,1H,H-3’),7.61(dd,J=8.7,5.9 Hz,1H,H-6’),7.37(dd,J=8.1,2.2 Hz,1H,H-8’),7.21(m,1H,H-8),7.07(td,J=8.4,2.3 Hz,1H,H-9’),6.46 (dd,J=15.1,11.0 Hz,1H,H-14),6.36(d,J=15.9 Hz,1H,H-2’),6.10(d,J=11.0 Hz,1H,H-15),5.56 (d,J=15.1 Hz,1H,H-13),4.67(s,2H,H-18),3.72(s,3H,-OCH3),3.26(d,J=5.9 Hz,1H,H-3),3.07 (dd,J=14.2,6.3 Hz,1H,H-5a),2.89(dd,J=15.4,6.1 Hz,1H,H-6a),2.75(dd,J=15.0,8.8 Hz,1H,9a),2.60 (dd,J=15.1,3.5 Hz,1H,9b),2.12(s,3H,-OCOCH3),2.04(s,1H,H-6b),1.85(s,3H,CH3-17),1.81-1.68(m,5H,H-1,2,5),1.58(s,3H,CH3-12).

HR-ESI-MS m/z：667.1325(M+Na)+,理论值：667.1319[M+Na]+。

2.2本实验采用MTT(噻唑蓝)法测试了目标化合物对小鼠T、B淋巴细胞的增殖抑制活性和正常细胞的细胞毒作用。体外活性筛选实验以霉酚酸酯（MMF）为阳性对照药，实验结果如表1所示。

表1 新型土槿乙酸醇酯衍生物的体外抑制作用和细胞毒性[aIC50(10-6mol·L-1)]Tab 1 In vitro inhibitory effects and cytotoxicities of novel PB and indoles derivatives[aIC50(10-6mol·L-1)]

3 讨论

结果显示土槿乙酸C-18醇酯系列衍生物多数具有显著的免疫抑制活性，其中衍生物B2，B6，B7对T淋巴细胞增殖抑制活性强于土槿乙酸，衍生物B3与土槿乙酸的抑制活性类似，尤其是B6抑制活性接近阳性对照药霉酚酸酯。衍生物B6，B7对B淋巴细胞抑制活性明显强于土槿乙酸，衍生物B1，B2，B8，B9对B淋巴细胞抑制活性与土槿乙酸活性接近。大多数化合物对正常细胞作用很弱，远低于阳性对照药，呈现高效低毒特性。

呋喃系列衍生物：对T淋巴细胞的增殖抑制活性，当引入呋喃环时其活性降低，当5-位有吸电子基硝基的存在时其活性明显提高，引入卤素溴原子时其活性较土槿乙酸虽有提高，但比硝基取代时活性低，引入四氢呋喃酸时其活性则完全丧失。由此而推测当引入有吸电子基取代呋喃环时，形成了迈克尔反应受体,这种呋喃环的电子共轭体系导致了药理活性增加。B6化合物活性接近于阳性对照药，而B5则完全失去活性，二者结构区别仅仅是-烯酸的取代位置不同，由此推测，引入呋喃丙烯酸有助于提高其药理活性，且2位取代优于3位。

芳香共轭体系系列衍生物：对T淋巴细胞的增殖抑制活性，其化合物活性B7＞B8＞B9，而B10无活性。表明肉桂酸的引入有助于提高活性，当其芳环上有吸电子基取代时其活性降低，至于B10，F和Br原子的引入则导致完全丧失活性。据此而推测，吸电子基团不利于活性的提高，可能是通过吸电子基的引入降低了芳香环的电子云密度，进而影响与靶标的结合。

乙酸C-18醇成酯类化合物，引入呋喃环，抑制T、B淋巴细胞增殖活性明显增加，引入具有共轭体系的呋喃环时活性更佳，并且毒性降低。对土槿乙酸构效关系的研究将促进新型免疫抑制剂的开发。