维药高孜班提取物对 D－半乳糖致衰老小鼠模型的作用

阿娜古丽·马合木提，热比姑丽·伊斯拉木，曼尔丹·尼牙孜

（新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所·新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆 乌鲁木齐 830049）

高孜班亦称牛舌草，别名为高孜班印地、叁尕吾里，为紫草科植物意大利牛舌草 Anchusaitalica Retz.或同科植物琉璃苣 Borage of ficinales L.的地上部分。维吾尔医学认为，高孜班属性湿热，功能生湿生热，调节异常黑胆质，润湿补脑，祛寒补心，爽心悦志，润燥消炎，止咳平喘等，主治干寒性或黑胆质性疾病，如干性脑虚，寒性心虚、心悸、忧郁症，干性胸膜炎、肺炎及结核疾病等，寒性咳嗽、感冒、气短等[1－2]。目前，高孜班作为新疆维吾尔自治区维吾尔医医院院内制剂主要药物，在抗抑郁、抗老年痴呆领域也有一定进展。本课题组前期已开展了维药高孜班化学成分相关实验研究[3－5]。本研究中通过D－半乳糖致衰老小鼠模型实验，探讨了维药高孜班提取物的抗衰老作用及其可能的途径，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物、试药与仪器

动物：SPF级昆明种小鼠，60只，雌雄各半，体质量（20±2）g，由新疆实验动物研究中心提供，动物实验许可证号为SCXK（新）2016－0001。动物实验经新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药物安全性评价中心（药物非临床研究质量管理规范中心，SYXK＜新＞2016－0005）审核，符合动物伦理委员会的管理准则。实验开始前检疫，经一般行为观察，选用符合要求的54只小鼠进行实验。

试药与仪器：高孜班（Gao Zi Ban，GZB，新疆麦迪森维药有限公司，产地巴基斯坦，批号为201602）；D－半乳糖（D－galactose，上海蓝季科技发展有限公司，批号为161210）；0.9%氯化钠注射液（新疆华世丹药业股份有限公司，批号为 18030508）；维生素 E（vitamin E，VE，上海源叶生物科技有限公司，批号为CAS＃59－02－9，YY11518－100 g分进）。小鼠白细胞介素 2（IL－2）试剂盒（批号为 20171120）、小鼠白细胞介素 6（IL － 6）试剂盒（批号为 20171202）、小鼠肿瘤坏死因子 －α（TNF －α）试剂盒（批号为20171111），均购于武汉博士德生物技术有限公司。Model550型酶标仪（美国 Bio－Rad公司）；Thermo fisher低温冰箱（－86℃，赛默飞世尔高科技＜中国＞有限公司）；TGL－5－A型低速大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2 方法

高孜班提取物的制备[3－4]：取高孜班 20 kg，粗粉碎，加石油醚冷浸，脱脂，药渣粉末晒干，分别取粉碎脱脂后的高孜班每份10 kg，加15倍量70%乙醇，回流提取 2 h，共提取3次，滤过，滤液减压浓缩至1 500 mL，备用。

D－半乳糖致小鼠衰老模型建立[6－7]：将54只KM小鼠随机分为正常对照组（10只）和衰老模型组（44只），雌雄各半。正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水；衰老模型组小鼠腹腔注射 D－半乳糖（200 mg／kg），1次／天，连用46 d。

对 D－半乳糖致小鼠衰老模型的影响：造模成功后，将符合要求的40只小鼠随机分为衰老模型组（模型组）、阳性对照药维生素 E 组（VE 组，10 mg／kg）、GZB提取物高剂量组（GZB －H 组，3.65 mg／kg）、GZB 提取物低剂量组（GZB －L 组，1.8 mg／kg），各 10 只。各组灌胃给予相应药物，正常对照组灌胃等体积生理盐水。各组灌胃容积均为每10 g体质量0.2 mL，1次／日，连续3周。小鼠每周测1次体质量，根据体质量变化随时调整给药剂量。各组小鼠于末次给药1 h后，摘眼球法取血。4℃下3 000 r／min离心10 min，取上清液于－86℃保存待测。然后快速常规取出脑组织，用生理盐水冲洗，滤纸吸干；随后取适量脑组织，称定质量，制匀浆，在4℃下3 000 r／min离心10 min，取上清液，待测。采用酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测血清和脑组织IL－2，IL－6，TNF－α水平，操作步骤均按试剂盒说明书进行[8－9]。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件 One－Way ANOWA方法进行多组样品均数比较，所得数据用±s表示，检验水准 α＝0.05。

2 结果

2.1 对血清中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影响

与正常对照组比较，衰老模型组小鼠血清IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α 水平升高（P＜0.01）。与衰老模型组比较，VE组、GZB－H组小鼠血清IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α水平降低（P＜0.01）；GZB－L组小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），血清 IL－6和TNF－α 水平降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 各组小鼠血清中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比较（X ± s，pg／mL，n＝10）

2.2 对脑组织中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影响

与正常对照组比较，衰老模型组小鼠脑组织IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α水平升高（P＜0.01）；与衰老模型组比较，VE组和GZB－H组小鼠脑组织IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α 水平降低（P＜0.05）；GZB－L组小鼠脑组织IL－2水平升高，IL－6水平降低（P ＜0.05），虽小鼠脑组织 TNF－α 水平降低，但差异无统计学意义（P ＞0.05）。详见表 2。

表2 各组小鼠脑组织中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比较（X ± s，pg／mL，n＝10）

3 讨论

衰老是生物体在生命周期中随着年龄的增长而发生的全身各组织、器官功能减退和稳态功能下降的过程，是诸多病理、生理过程综合作用的结果，是一个不可抗拒的过程[10－11]。延缓衰老药物是一类从机体物质和能量代谢出发，在组织器官、细胞及分子水平上延缓各种退行性变化，提高生物活力、延长寿命的药物。由于生物体复杂，因此延缓衰老药物研究的途径和方法也有多种[12－13]。其中，D－半乳糖致衰老动物模型以衰老的代谢学说为指导建立的，是目前最常用的制备衰老模型的方法[14]。

本研究结果显示，与正常对照组比较，衰老模型组小鼠血清、脑组织IL－2水平降低，IL－6和TNF－α水平升高（P＜0.01）。提示 D－半乳糖致衰老动物模型成立。衰老的特征之一是免疫功能降低，主要表现为免疫细胞数量减少和功能减弱[5－7]。与衰老模型组比较，VE组和GZB－H组小鼠血清和脑组织中IL－2水平均升高，IL－6和 TNF－α 水平均降低（P＜0.05）；GZB－L组小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），虽小鼠血清IL－6和TNF－α水平均降低，但差异无统计学意义（P ＞0.05）；GZB－L组小鼠脑组织 IL－2水平升高，IL－6水平降低，TNF－α水平降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。提示VE具有抗衰老作用，增强小鼠免疫功能，可延缓衰老；GZB提取物通过增强小鼠免疫功能，延缓衰老，且具有一定的剂量依赖性。

综上所述，维药高孜班提取物可通过调节 D－半乳糖致衰老小鼠模型免疫状态，从而起到抗衰老作用，但有待深入研究。