某血站8种酶联免疫吸附试验检测试剂检测结果待查情况调查

秦小林

酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是20世纪70年代发展起来的一种酶联免疫测定技术，因其敏感度和特异度较高、操作简便、重复性好等优点，已广泛应用于疾病诊断、科研等医学领域。目前血站使用ELISA法和核酸检测法（nucleic acid testing，NAT）进行血液筛查，并发布血液检测的最终结果，医院不再进行复查。因此，为保障患者用血安全，血站应重视试剂的选择和检测过程中关键控制点的掌握。现将本站2017—2018年血液检测待查标本再检情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集2017—2018年本站8种ELISA检测试剂检测的待查标本1 402份，均为单边阳性标本。两种不同厂家试剂检测同一项目时，只要检测结果不相符即判为待查标本。

1.2 仪器与试剂 全自动酶联免疫一体机Uranus AE180（深圳爱康生物科技有限公司），EVO全自动加样仪（瑞士TECAN公司），后处理FAME 24/20（烟台澳斯邦生物工程公司）；核酸检测系统及其试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司），核酸检测系统及其试剂盒（苏州华益美生物科技有限公司）；乙型肝炎（乙肝）表面抗原〔（hepatitis B surface antigen，HBsAg），英国雅培和北京万泰〕，梅毒抗体（北京万泰和上海科华），丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）抗体（上海科华和厦门英科新创），人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗体（法国伯乐和北京金豪），所有试剂均通过中国药品生物制品检定所批检。

1.3 方法 分析本站8种ELISA检测试剂检测待查情况，对相应待查项目用同种试剂进行两孔再检。只要有一孔呈反应性即判为阳性，两孔均为无反应性则判为阴性。对待查检测阴性的标本再采用荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）方法进行核酸8份标本混样检测。

2 结果

2.1 HBsAg试剂检测结果待查情况 雅培HBsAg试剂总待查率高于万泰，其中雅培待查阳性率低（15.77%），待查阴性率高（84.23%）；万泰待查阳性率高（64.69%），待查阴性率低（35.31%）。见表1。

表1 某血站1 402份待查标本HBsAg试剂检测结果待查情况

2.2 抗-HCV试剂检测结果待查情况 科华抗-HCV试剂待查数约为新创HCV待查数的2倍，待查阳性率相差不大。见表2。

表2 某血站1 402份待查标本抗-HCV试剂检测结果待查情况

2.3 抗-HIV试剂检测结果待查情况 金豪抗-HIV试剂待查阳性率高（67.57%），伯乐待查阳性率较低（39.45%）。见表3。

表3 某血站1 402份待查标本抗-HIV试剂检测结果待查情况

2.4 梅毒抗体试剂检测结果待查情况 万泰梅毒抗体试剂待查数是科华梅毒抗体试剂待查数的3倍，且待查阳性率也比科华高。见表4。

表4 某血站1 402份待查标本梅毒抗体试剂检测结果待查情况

2.5 ELISA待查阴性标本核酸检测结果情况 雅培HBsAg试剂待查阴性标本核酸检测阳性率最高（0.84%）。见表5。

表5 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV ELISA待查阴性核酸检测情况

3 讨论

相关调查显示，我国乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）携带者约为1.2亿，感染率高达60%，HBsAg携带者亦高达10%～15%[1]。本研究显示，HBsAg总待查率达待查总数的70.61%，可能与我国是HBV高发区有关。8种ELISA检测试剂检测待查中雅培HBsAg试剂待查数最多，占待查总数的50.21%，但其再检阳性符合率仅15.77%；而金豪抗-HIV试剂、万泰HBsAg试剂和万泰梅毒抗体试剂再检阳性符合率均大于60%；新创抗-HCV、伯乐抗-HIV、科华抗-HCV和科华梅毒抗体试剂再检阳性符合率为30%～40%。雅培HBsAg试剂再检符合率低可能与雅培检测试剂盒的诸多影响因素有关。雅培试剂敏感度高，截断值较低（约0.090），洗板不干净即可出现花板，其次加样、孵育温度和时间、显色、试剂、环境、操作、类风湿因子、补体以及离心速度和时间等因素也会导致结果呈假阳性和假阴性[2-3]。有研究表明，以3 600 r/min（2 898 g）离心10 min分离血清，血清中HBsAg含量假阳性率为9.82%；以8 819 r/min（10 000 g）离心10 min分离血清，不会导致假阴性标本出现[4]。可见同一批标本可以通过提高标本离心速度减少假阳性结果，而本室常规ELISA检测标本的离心时间为5 min、速度为3 000 r/min，因此为减少HBsAg待查标本数，必须在检测前将标本以足够的时间和速度离心。万泰HBsAg试剂、万泰梅毒抗体试剂和金豪抗-HIV试剂再检阳性率高可能还与试剂本身有关，国产ELISA试剂盒的敏感度较进口试剂盒稍差，但特异度和重复检出率均高[5]。相关文献显示，ELISA筛查单试剂反应性献血者中，潜在合适献血者占较大比例，广西南宁及河南新乡地区的追踪调查结果显示，单试剂反应性献血者中潜在合适献血者比例分别为86.6%、58.3%[6-7]。也有文献报道，ELISA检测HBV、HCV单试剂阳性，其假阳性率较高，单试剂检测阳性标本及抗-HCV灰区标本中均未检出核酸反应性标本，171例HBsAg灰区标本中检出HBV-DNA反应性标本6例，247例HCV未检出HCV-RNA反应性标本[8]。因而万泰HBsAg、万泰梅毒抗体试剂和金豪抗-HIV试剂存在假阳性率较高的情况。新创抗-HCV、伯乐抗-HIV、科华抗-HCV和科华梅毒抗体试剂再检阳性符合率均在30%～40%，特异度比较符合本站血液筛查要求。另外，表5数据显示，雅培HBsAg再检阴性标本核酸检测阳性率高达0.84%，而我国经NAT法检测后 HBsAg（-）NAT（+）检出率约为 1：2 000，其中约80%为隐匿性乙肝病毒感染（occult hepatitis B virus infection，OBI），20% 为窗口期标本[9-10]。本血站所用雅培HBsAg在再检阴性标本中，核酸检测阳性率远高于我国 HBsAg（-）NAT（+）检出率，因而在雅培HBsAg单边待查标本中极可能存在高风险OBI感染。有研究表明，乙肝核心抗体阳性健康体检人群中，HBV-DNA阳性率为6.8%[11]，尽管继HBsAg检测之后已引入NAT检测，但在抗-HBc（+）合格献血者血液中仍有一定机率含微量HBV-DNA，故需进一步提高核酸检测的敏感度。

血站实验室进行血液筛查的目的是为防止通过输血感染病原体，而非进行诊断，故对检测方法敏感度的要求高于特异度。然而敏感度和特异度本身就是一对矛盾的变量，两者随诊断临界值的变化而变化，过高的检测敏感度势必会削弱其特异度，导致误诊率上升[12]。对血站而言，就会导致因假阳性被屏蔽的献血者数量增多，造成献血人群的流失。而我国尚未要求对单边阳性或核酸阳性的结果作进一步验证，对于检测出现的阳性结果，本站未开展确证试验而无法及时得到证实。单试剂假阳性不仅直接导致了血液资源的浪费，削弱了无偿献血者的队伍，还对因假阳性结果遭拒的献血者身心造成了伤害，对无偿献血事业的健康发展造成了不利影响。因此，血站应对ELISA检测单边阳性或核酸阳性献血者进行追踪调查，为之后献血者的归队问题作出前瞻性统计数据分析，避免上述情况的发生。