人参丝瓜美白润肤霜的制备

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(延边大学药学院，吉林 延吉 133002)

由于人们生活水平的不断提高，使得人们对美的追求也越来越高，化妆品已成为日常生活的必需品。随着回归自然呼声的高涨，以植物提取物为功效成分的化妆品越来越受大众的青睐[1]，约72.9%的化妆品会添加植物成分[2-3]。本实验选取常用美白中药人参，采用体外酪氨酸酶抑制法筛选出人参皂苷为美白剂，在美白的基础上，通过添加丝瓜汁作为保湿剂、抗氧化剂等功效成分，研制出一款复方美白润肤霜。

1 仪器和试剂

主要试剂：蒸馏水；香草醛，辽宁泉瑞试剂有限公司；人参皂苷Re(批号1103B021)，北京索莱宝科技有限公司；L-酪氨酸，上海源叶生物科技有限公司；酪氨酸酶，上海源叶生物科技有限公司；其他试剂均为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司。

主要仪器：FA-2004电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；HH-6型数显恒温水浴锅，金坛市科技仪器有限公司；ZK-2S真空干燥箱，北京中兴伟业仪器有限公司；榨汁搅拌机，顺德市容桂区甜抗电器厂；UV-2201型紫外-可见分光光度，日本岛津公司；Z-36HK高速台式离心机，天津市医疗器械厂。

丝瓜购于延吉千盛超市，放置于冰箱冷藏备用。人参(4年生晒参)购于延吉市西市场。

2 实验方法

2.1 人参皂苷的提取、精制及含量测定

人参100 g，粉碎过40目筛，加水热提取，固液比为 1∶10，煎煮法提取人参皂苷所采用的温度多为恒温提取[4]，温度85～90 ℃，时间2.5h。按上述条件，连续提取3次，提取完全后趁热过滤，将3次滤液合并，用5% NaOH水溶液调pH值到8，静置沉降得人参粗提液。

人参粗提液过 D101吸附性大孔树脂，采用60% 的乙醇作为洗脱溶剂，收集并浓缩洗脱后即得人参皂苷粗提物40g[5]。取人参皂苷粗提物250mg，加适量蒸馏水充分溶解，过滤，加入适量氯仿反复充分萃取，弃去氯仿层；剩余溶液加1倍量水饱和正丁醇，振摇、密塞后放置过夜，弃去水层，将剩余溶液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至50mL，摇匀过滤，即得5mg/mL样品溶液，以下简称PGE。

人参皂苷含量测定参照2015版中国药典[6]，以人参皂苷Re为标准品，制定标准曲线，从而测定人参总皂苷的含量。

2.2 丝瓜汁的制备

将500g鲜丝瓜洗净后研磨，用榨汁搅拌机破碎成粘稠状，反复减压抽滤3次，将3次所得滤液转移至烧杯中，放入4 ～8℃冰箱保鲜备用即得，以下简称LJ。

2.3 润肤霜的配制

查阅相关文献，结合预实验，拟定如下配方(表1)。

表1 人参丝瓜润肤霜配方Tab.1 the formula of Ginseng and Luffa whitening skin care cream

表1(续)

2.3.1 润肤霜的制作工艺

(1)将A相预先溶解，A相搅拌加热至85℃，保温十分钟至完全溶解。

(2)B相加热至80～85 ℃，完全融化后保温 30 min 备用。

(3)搅拌条件下将B相加入A相，搅拌约5 min，然后在65～75℃搅拌30～40 min。

(4)自然冷却至55 ℃时加入防腐剂，香精和大麦粉，低速搅拌均匀，冷却至室温，放置24 h。

一般而言，这些污染物在蔬果上的残留，与物质本身的溶解性、疏水性、施用时间、存在于蔬菜的物质都有关。在科学研究中，许多人研究过不同的清洗和食品加工步骤对各种农药残留以及污染物去除的效率。但是，没有发现存在一种“普遍适用”的方法能够将所有的污染物有效地去除。而且，即使是同一种蔬菜或者水果，使用的农药也不尽相同，这就更使得找到“最好的方法”只是一种奢望。

2.4 产品评价指标

以涂抹分散性、乳化稳定性、离心实验为指标，对样品进行综合评价[7]，每个指标设1～10分，共30分(表2)，其综合评分作为考察指标。

表2 产品评价指标表Tab.2 Product evaluation index table

表2(续)

2.5 单因素实验

2.5.1 人参皂苷提取物及丝瓜汁添加量的选择

在硬脂酸用量为1%，单硬脂酸甘油酯用量为2.5%，甘油8%，乳化时间45 min条件下，膏剂制备中改变PGE (mL)和LJ (mL)配比的量(1∶1；1∶2；2∶1；2∶3；3∶2)选择最适添加量。

2.5.2 硬脂酸添加量对膏剂制备的影响

在单硬脂酸甘油酯用量为2.5%，甘油8%，乳化时间45 min条件下，以硬脂酸作为单因素，选取不同水平的硬脂酸用量(1%、2%、3%、4%、5%)进行实验，确定硬脂酸最佳用量。

2.5.3 单硬脂酸甘油酯对膏剂制备的影响

在硬脂酸用量为1%，甘油8%，乳化时间45 min条件下，以单硬脂酸甘油酯作为单因素，选取不同水平单硬脂酸甘油酯的用量(1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)进行实验，确定单硬脂酸甘油酯最佳用量。

2.5.4 甘油添加量对膏剂制备的影响

在硬脂酸用量为1%，单硬脂酸甘油酯用量为2.5%，乳化时间45 min条件下，以甘油作为单因素，选取不同水平甘油的用量(6%、8%、10%、12%、14%)进行实验，确定最佳甘油用量。

2.6 酪氨酸酶活性的测定

2.6.1 溶液的配置

参照袁阳明[8]等人对酪氨酸酶活性的测定来配置溶液。按表3添加用量。

表3 生化酶实验条件设置表Tab.3 Experiment conditions of the tyrosinase inhibition test

(1)酪氨酸酶活性抑制率I(%)=[(A1-AM2)-(A3-A4)〗]/(A1-A2)×100% ；(2)表中 A1为未加中药成分的加酶混合液；A2为未加中药成分和酶的混合液；A3为加中药成分和酶的混合液；A4加中药成分而未加酶的混合液。

3 实验结果

3.1 人参皂苷含量测定结果

人参皂苷标准曲线如图1所示，标准曲线以皂苷浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，回归方程为y=0.0077x + 0.0095，相关系数R2=0.9997。回归方差分析表明，人参皂苷含量在5～25μg/mL 的范围内线性关系良好。计算得5mg/mL样品溶液中人参皂苷含量为82.28%。

图1 人参皂苷Re标准曲线Fig.1 Standard curve of ginsenoside Re

3.1.1 精密度试验

精密吸取对照品溶液30μL，共6份，用显色法测定吸光度，RSD 为1.18%，表明仪器精密度良好。

3.1.2 稳定性试验

分别在0、2、4、6 h 取对照品溶液30μL，按照显色法测定吸光度，计算样品含量，RSD值为2.21%～3.67 %，表明样品在6 h内稳定。

3.1.3 重复性试验

精密吸取同一对照品溶液,重复进样6次，RSD值为1.87%，表明方法的重复性良好。

3.2 单因素实验结果

图2 单因素实验结果图

Fig.2 Single factor experimental results map

在所设计配方中，PGE (mL):LJ (mL)较高和较低时，体系的稳定性都会下降。随着PGE含量的增多，涂抹感觉变差。因此，选择PGE (mL)∶LJ (mL)为2∶1的实验配方进行以后的实验。随着硬脂酸的量的增加，膏体变得不稳定，涂抹性变差。本着节约的想法，在1%和2%两个用量中，选择1%的用量进行下一步实验。单硬脂酸甘油酯的含量过多和过少，体系的稳定性都会降低。当单硬脂酸甘油酯的用量不断增加，涂抹的分散性变差。因此选择单硬脂酸甘油酯含量为2.5%进行接下来的实验。实验结果表明，甘油含量过多和过低都会影响基质的涂抹感觉。随着甘油量的不断增多，膏体变得更加油腻，使用感变差。因此选用甘油量8 %为实验配方的用量进行实验。

3.3 酪氨酸酶活性测定结果

取三批人参-丝瓜膏剂，每批3份，测定酪氨酸酶抑制率，结果见表4。人参丝瓜的抑制率24h为43.71±0.53%，同时测定了一个月和三个月后的酪氨酸酶抑制率，结果虽然略有波动，但与24h并没有显著的统计学差异，说明人参丝瓜膏剂对酪氨酸酶抑制率在三个月内稳定、有效。

表4 人参丝瓜膏剂酪氨酸酶抑制率(n=3)Tab.4 Inhibition rate of tyrosinase in Ginseng and Luffa gourd ointment

4 讨论和结论

酪氨酸酶(Tyrosinase)是一种含双核铜离子的金属酶，是黑色素合成过程中的关键限速酶。抑制酪氨酸酶的活性可以有效减少黑色素的生成，达到淡斑、美白的作用。人参提取物中人参皂苷具有美白活性，以生化酶法测定人参-丝瓜美白膏剂酪氨酸酶活性抑制率，三个月内为42.77%，符合中华人民共和国行业标准QB/T1857-2007化妆品检验规则的相应规定。

人参丝瓜美白润肤霜为淡绿色状膏体，粘度适中，pH 值为6.12，易涂抹，易被皮肤吸收，润肤护肤效果好，皮肤美白效果明显，制备过程简单，制备条件温和。该润肤霜外观细腻，稳定性良好，初步检测具有一定的美白效果。本文结果可为提高基质配方和开发更多新型医学护肤品提供参考[9]。