硝酸咪康唑壳聚糖缓释凝胶的制备及释放度研究∗

邢树礼，徐燕平，高培民，孙绍伟，马 静，丁召兴△

(1.滨州医学院附属医院药学部，山东滨州 256603；2.山东省滨州市人民医院消化内科 256610)

硝酸咪康唑是一种广谱、高效、不良反应小的抗真菌药，在结构上属于咪唑类。它对组织浆胞菌、芽生菌属等多种真菌，尤其是念珠菌所致的阴道感染有良好的疗效[1]。壳聚糖是甲壳素脱乙酰产物，是我国产量最大的海洋资源之一，具有无毒、无刺激、可降解、生物相容性好等特点[2-3]。本研究以壳聚糖、聚卡波菲为混合基质制成阴道用缓释凝胶，其能持续12 h缓慢释放，达到减少给药次数的目的，现报道如下。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 UV紫外分光光度计(日本岛津)；pHs-2C型数字酸度计(上海伟业仪器厂)；硝酸咪康唑标准品(广西康华药业有限公司，批号：20160913)；壳聚糖(滨州市宏远仪器试剂有限公司，脱乙酰度：85%，批号：160517)；聚卡波菲(BF Goodrich公司)；山嵛酸甘油酯(滨州市鲁滨试剂公司，批号：160623)；甘油(广东台山新宁制药厂，批号：161211)；苯甲酸钠(滨州市鲁滨试剂公司，批号：160108)；三乙醇胺(沈阳化学试剂厂，批号：160108)；其他试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1处方 硝酸咪康唑2.0 g，壳聚糖0.5 g，聚卡波菲1.0 g，甘油5 mL，山嵛酸甘油酯2.0 g，苯甲酸钠0.3 g，三乙醇胺0.2 g，2%的醋酸溶液15 mL，加注射用水至100 mL。

1.2.2工艺 将2%的乙酸溶液放入烧杯中，并加入处方量的壳聚糖，搅拌直至溶解；聚合物相：将聚卡波菲加适量注射用水浸泡过夜，充分搅拌直至完全溶胀成均匀的类凝胶聚合物，将前述的壳聚糖醋酸溶液缓慢加入，同时高速搅匀；油相：加热甘油及山嵛酸甘油酯使熔化，充分搅拌使其均匀；水相：将处方量的苯甲酸钠、三乙醇胺及硝酸咪康唑放至剩余的水中，加热。将油相快速加到热的水相里，充分搅拌以便得到均匀的乳状液体。趁热将聚合物相迅速加至混浊液中搅拌、混匀。搅拌下滴入10 mg/mL氢氧化钠水溶液，使pH在3.5～5.5。

1.2.3确定波长 取适量的硝酸咪康唑，用甲醇溶液溶解成质量浓度为0.25 mg/mL的溶液。按处方比例另取壳聚糖、聚卡波菲及其他辅料用甲醇溶解，分别将上述两种溶液在250～300 nm波长范围内扫描吸收图谱[4]。

1.2.4制备标准曲线 将硝酸咪康唑标准品放置在烘干器中充分烘干，精密称取0.25 g放在50 mL的容量瓶内，先倒入20 mL甲醇将硝酸咪康唑标准品溶解，再用甲醇稀释至刻度，作为贮备液。分别精密量取贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别将这些溶液在波长为272 nm处测定吸收度A(均以甲醇作为空白对照)，以浓度C对吸收度A进行线性回归，表明在0.05～0.80 mg/mL，浓度C与吸收度A呈现良好的线性关系[5-7]，求得回归方程为A=1.421 3C+0.046 0，r=0.999 4。

1.2.5壳聚糖缓释凝胶含量的测定 从制备的壳聚糖缓释凝胶中取3个批次，从中抽1个批次样品，用电子天平精密称取精密称取壳聚糖缓释凝胶约3.0 g，放至50 mL的容量瓶内，将其放在水浴中加热使样品熔融，倒入适量的甲醇，使其完全溶解，定容至刻度。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，再用甲醇稀释至刻度，摇匀。用紫外分光光度计测定容量瓶中样品的吸收度A，代入1.2.4的回归方程，即可得出相应的浓度C，然后便可以算出该批次样品的含量。同上法，测定出另外2批次样品的含量[8-9]。

1.2.6加样回收率试验 分别依照处方中硝酸咪康唑剂量的80%、100%、120%，用分析天平称取，105 ℃干燥至恒重的硝酸咪康唑，并按缓释凝胶处方中各组分的比例，精密称取基质及其他处方材料，用甲醇溶解各组分适量，依“1.2.5”项下壳聚糖缓释凝胶含量的测定来测定硝酸咪康唑的含量。

1.2.7精密度试验 按1.2.4方法，配制硝酸咪康唑0.20、0.40、0.60 mg/mL的溶液，分别在日内的不同时间(0、2、4、6、8、10 h)和日间(1、2、3、4 d)检测吸收度，从而算出日内和日间的精密度[9]。

1.2.8重复性试验 取1个批次的缓释凝胶(批号：20160602)6份，每份按1.2.5方法进行测定，以考察缓释凝胶测定的重复性。

1.2.9稳定性试验

1.2.9.1离心试验 取硝酸咪康唑缓释凝胶约5 g，装入带刻度的离心管中，于2 500 r/min下离心30 min，观察其外观性状，凝胶无分层现象。

1.2.9.2高温高寒试验 取硝酸咪康唑缓释凝胶约5 g，在包装条件下(铝塑管内涂环氧树脂)，分别置于55 ℃干燥箱恒温6 h及-15 ℃冰箱内24 h，凝胶无分层现象。

1.2.10性状均匀性 缓释凝胶为浅黄色半透明状半固体，色泽均匀，质地细腻，观察不到肉眼可以看到的颗粒，稠度适宜，涂展润滑性较好。

1.2.11体外释放度试验 参考文献[10]，称取壳聚糖缓释凝胶约3.0 g 放在扩散池装置中，选尼龙膜作为测定膜将缓释凝胶包裹起来，然后盖上并使劲拧紧池盖。把样品池放到溶出杯中，放凝胶的那面向上，将桨的高度调整好，用模拟阴道液900 mL作为释放介质，桨的转速为60 r/min，温度为(37.0±0.5)℃，在0.1、0.3、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h分别取溶液5 mL，并及时补充5 mL溶出介质，测定累积释放度，得到壳聚糖缓释凝胶的累积释放度曲线。

2 结 果

2.1测定波长的确定 根据扫描的吸收图谱的结果，在272 nm处硝酸咪康唑的吸收最大，而在该波长处，处方中的其他组分基本无干扰，所以选择272 nm作为测定波长，见图1。

a：硝酸咪康唑;b:其他处方成分

2.2加样回收率试验结果 每个试样测定3次，算出平均数，再算出加样回收率，见表1。

表1 加样回收率的结果(n=3)

2.3日内和日间精密度试验 硝酸咪康唑0.20、0.40、0.60 mg/mL的溶液中，测算日内和日间精密度结果，见表2。

表2 精密度试验结果

2.4重复性试验 抽取的1个批 次(批号：20160602)的缓释凝胶6份，测定所得RSD=0.41%，可见所制得的缓释凝胶重复性良好。

2.5稳定性试验 经离心试验及高温高寒试验，观察缓释凝胶的外观性状，发现缓释凝胶无分层现象。

2.6硝酸咪康唑壳聚糖阴道缓释凝胶在模拟阴道液中的释放 在模拟阴道液中测得壳聚糖阴道缓释凝胶的释放曲线，缓释凝胶1 h释放35.54%，2 h释放56.02%，12 h释放达93.92%，从释放曲线可以看出，药物在前2 h快速释放，然后缓慢释放，总体上能达到12 h的释放效果，见图2。

图2 硝酸咪康唑的累积释放度曲线

3 讨 论

壳聚糖是由天然多糖甲壳素经过脱乙酰化之后得到的物质，无毒，无刺激性。其生物相容性及黏膜附着性均很好，因此能使药物在阴道黏膜的渗透性、附着性及吸收量等都有不同程度的增加[11]。本实验以壳聚糖、聚卡波菲为基质制成的阴道凝胶剂，由于剂型和材料的特点，与栓剂比较，阴道黏膜能与药物有更充分的接触，不但增大了接触面积，还使药物的滞留时间延长，这既保证了疗效，又减少了给药次数，且无油腻感，使用舒适。

从最佳组合处方的累积释放度曲线可以得知，壳聚糖缓释凝胶中硝酸咪康唑的释放特性与威布尔分布模式有些相近，更与Ritger-Peppas的复合模式(CR=at+bt0.5+c) 类似[12]，即初期类似Higuchi模式，但后期接近匀速释放，说明硝酸咪康唑在接近缓释凝胶的表面，其硝酸咪康唑的浓度较大或结合较疏松，就能以较快的速率从凝胶间隙中出来，而后期随着凝胶的慢慢溶蚀，内部药物从缓释凝胶中释出。

国内外文献报道用于凝胶的基质有CP934P、CP940P、PCP、CMC-Na、海藻酸钠等，其中仅有CP934P凝胶用Keshary-Chien渗透池测定体外释放度，它的制备浓度为1.5%(w)，用7 mL溶出介质进行释放度试验，结果凝胶在7 h时的药物释放度仅为25%[13]。而本研究缓释凝胶的基质选用的是聚卡波菲，同时用甘油、山嵛酸甘油酯改善凝胶特性，从而控制了硝酸咪康唑的释放速度。