双阴性T淋巴细胞在急性发作期慢性阻塞性肺疾病患者的变化及意义

李天水,张平骥,胡 萍,綦 颖,刘法永,夏国光,戴 丽

(北京积水潭医院呼吸与危重症医学科，北京 100035)

外周血T淋巴细胞检测时可以检测出一种αβTCR+CD3+CD4-CD8-T淋巴细胞，即双阴性T淋巴细胞(double negative T cells，DNT)[1-2]。STROBER等[3]发现DNT具有抑制功能并能诱导免疫耐受和抑制性免疫调节作用，能够抑制骨髓移植患者的移植物抗宿主病；能通过抑制同种同源效应性T细胞来抑制受者抗供者器官的移植排斥反应[4-5]；在一些自身免疫性疾病中有下调免疫反应的作用[6]，并且可能在肿瘤患者的发病和治疗中存在价值[7]。也有研究发现各种炎症性疾病如细菌、病毒感染，扁桃体炎创伤等可导致DNT的升高，并推测DNT增高可能通过免疫调节来防止过度的免疫反应，对机体起保护作用[8]。

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary,COPD)存在慢性气道炎症及机体免疫功能调节紊乱，研究报道CD4+、CD8+T淋巴细胞在其发生、发展起一定作用[9-10]，推测DNT在COPD急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者的发病中可能同样存在一定的作用，但目前尚未见此类报道。本研究通过回顾性研究AECOPD患者的DNT变化，探讨DNT在AECOPD发病中的变化及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年1月1日至2017年11月1日本院住院的AECOPD患者(AECOPD组)252例和同期住院的非COPD患者(对照组)115例。AECOPD组纳入标准：(1)中华医学会呼吸病学分会制订的COPD和AECOPD的诊断标准[11]；(2)进行T淋巴细胞检测。对照组纳入标准为有T淋巴细胞检测数据的非COPD患者。排除标准：(1)合并呼吸系统慢性疾病，包括支气管哮喘、过敏性鼻炎、支气管扩张、结核；(2)急性上呼吸道感染、肺炎、泌尿系统感染、消化系统感染、软组织感染等急性感染患者；(3)恶性肿瘤患者；(4)急性骨折患者；(5)急性心肌梗死患者；(6)急性脑血管病患者；(7)肾功能不全患者；(8)自身免疫病患者。

1.2方法

1.2.1观察指标 选取性别、年龄、淋巴细胞(L)、总T淋巴细胞(CD3+)、CD3+CD4+T淋巴细胞(CD4+)、CD3+CD8+T淋巴细胞(CD8+)、CD4+/CD8+、DNT、DNT占淋巴细胞比例(DNT%)，合并症包括：冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)、高血压病(HBP)、心律失常(ARR)、糖尿病(DM)、心力衰竭(HF)、睡眠呼吸暂停综合征(SAS)、前列腺增生(BPH)、高脂血症(HLP)、反流性食管炎(RE)。

1.2.2分组 将研究对象分为AECOPD组和对照组，再根据急性加重频率将AECOPD患者分为大于或等于2次/年(高发组，n=95)和小于或等于1次/年(低发组，n=157)两组[12]。

1.2.3仪器与试剂 仪器与试剂采用四色流式细胞术检测DNT，仪器购自贝克曼-库尔特公司，型号为EPIC SXL，荧光标记单克隆抗体均购自贝克曼-库尔特公司。

1.2.4标本采集 所有研究对象均采集空腹静脉血2 mL置于含有乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝剂的真空采血管中，按操作程序处理标本并上机检测。

2 结 果

2.1一般资料情况 两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

2.2两组免疫学指标比较 两组CD3+、DNT%和DNT比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3不同AECOPD发作频率组免疫学指标比较 两组CD3+、CD4+比较、DNT%和DNT比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表1 两组患者一般资料比较

表2 两组免疫学指标比较

2.4AECOPD患者血浆清蛋白水平与免疫学指标相关性分析 清蛋白水平与L总数存在弱相关(P<0.05)，与DNT无明显相关性(P>0.05)，见表4。

2.5二元Logistic回归分析AECOPD的相关因素 L、CD3+、DNT%与AECOPD发作次数有相关性，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表3 不同AECOPD发作频率组免疫学指标比较

表4 血浆清蛋白与其他免疫学指标的Pearson

表5 AECOPD发作次数的Logistic回归分析

3 讨 论

COPD发病机制十分复杂，目前并不完全清楚。研究认为T 淋巴细胞及其介导的炎性反应参与了COPD和肺气肿的发生、发展[13-14]。T淋巴细胞亚群中存在的DNT具有独特的免疫功能[15-20]；有研究证实COPD患者的免疫功能状态存在异常[13]，但其外周血DNT的变化规律及在发病中的作用目前却并不清楚。

本研究发现AECOPD组和对照组在L总数存在差异。T淋巴细胞亚群检测发现两组外周均存在一定数量的DNT，且AECOPD组DNT的相对比例和绝对值均较对照组有明显降低，表明两组患者的细胞免疫状态确实存在差异。

按照急性发作频率将AECOPD患者分为高发组和低发组，发现高发组患者的DNT相对数、绝对数更低。进一步回归分析发现DNT与AECOPD的发病存在相关性，提示DNT水平可能与AECOPD存在关系，DNT降低可能导致急性加重的频率增加。已有的研究发现在自身免疫性疾病、肿瘤[21]、传染性疾病[22-23]等多种疾病中DNT明显增加，与AECOPD患者存在显著不同。DNT可以抑制免疫细胞及炎性因子，发挥免疫抑制功能。DNT在体内调节免疫的作用机制十分复杂。研究发现DNT对具有相同T细胞受体的特异性CD8+和CD4+产生抑制作用； DNT可通过抗原提呈细胞(APC)途径转变成既表达特异性抗原又表达 FasL的“杀伤”细胞，并通过其 FasL将凋亡信号传递给CD8+细胞[4]。有学者认为CD4+、CD8+及DNT均可从APC上获得主要组织相容性复合体(MHC)短肽复合物并递呈此抗原肽于其邻近的T淋巴细胞，可能是免疫调节T淋巴细胞诱导免疫耐受的中心机制。DNT在AECOPD患者外周血显著降低可能会导致其免疫抑制功能降低，并引起AECOPD患者气道炎症调节的紊乱的持续存在，可能是DNT参与AECOPD发生、发展的机制。

AECOPD组患者血浆清蛋白水平与对照组比较有明显降低，急性加重高发组患者血浆清蛋白水平比低发组患者低，提示AECOPD患者的血浆清蛋白水平存在异常降低，并可能与急性加重的发作频率有关。相关分析发现AECOPD患者血浆清蛋白水平与淋巴细胞水平存在相关性(P<0.05)，但相关系数仅为0.131，而与CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、DNT%、DNT均无明显相关性。由此可见，AECOPD患者体液免疫的改变可能是独立于细胞免疫的变化。

综上所述，本研究发现AECOPD患者存在细胞免疫和体液免疫改变，DNT减少和免疫清蛋白的降低可能是AECOPD的一个表现，并且提示可能是COPD急性发作频率高的风险。